西澳菲斯特农场赤桉树蜂蜜对血虚证模型小鼠的影响

2024-04-18 11:49赵立波陈家铃陶春霖
中国食品 2024年6期
关键词:血虚空白对照外周血

赵立波 陈家铃 陶春霖

再生障碍性贫血(Aplastic amemia,AA),又称血虚证,为中医临床常见症候,是一种以造血功能衰竭为特征的疾病,其发病机制主要与骨髓造血干细胞损伤、造血微环境损伤以及免疫性造血抑制等机制相关。目前,治疗AA的主要药物如环孢素(cyclosporine A,CsA),存在使用后反应率较低且复发率较高的缺点。本研究以西澳菲斯特农场赤桉树蜂蜜为研究对象,通过建立小鼠血虚模型,探究服用不同剂量的TA10+FFJH以及TA30+FFJH对小鼠血虚症状的影响。

一、实验材料

1.实验药品与试剂。西澳菲斯特农场赤桉树蜂蜜(Fewsters Farm jarrah honey,FFJH),洋妆源(上海)网络科技有限公司;乙酰苯肼、淋巴细胞分离液,美国SIGMA公司;环磷酰胺,上海华联制药有限公司;促红细胞生成素(EPO)ELASA试剂盒,美国R&D Systems公司;其他试剂均为国产分析纯或生化试剂。

2.实验动物。选择BALB/c小鼠80只,购于北京维通利华实验动物技术有限公司。雌雄各半,年龄为8-12周,体重控制在18-22g。饲养温度为(23±1)℃,湿度控制在40%-60%,24h光暗循环,通风良好。饲养期间保证小鼠自由饮水、饮食。

二、实验方法

1.模型建立。(1)实验分组。选取BALB/c小鼠80只,在适应性喂养1周后,将其分为以下8组:①正常对照组;②血虚模型组;③25%-TA10+FFJH组;④50%-TA10+FFJH组;⑤75%-TA10+FFJH组;⑥25%-TA30+FFJH组;⑦50%-TA30+FFJH组;⑧75%-TA30+FFJH组。每组小鼠各10只。(2)实验流程。按照乙酰苯肼、X射线、环磷酰胺联合应用的方法,建立再生障碍性贫血小鼠模型。将不同剂量的蜂蜜溶解至等量生理盐水中,从第7d开始,以每天1次的频率按各组劑量对小鼠进行灌胃,同时对空白对照组以及血虚模型组的小鼠灌胃等体积的生理盐水。实验周期为45d,45d后颈椎脱臼处死小鼠,采样进行检测。

2.各组小鼠一般行为学观察。经上述步骤处理45d后,对小鼠的运动灵活度、反应敏捷度、毛发光泽度、脱毛情况及体重变化情况进行观察统计。

3.外周血检测。(1)细胞计数。各实验组在第45d对各组小鼠进行称重,经眼眶取血,测定外周血的血红蛋白含量、红细胞、白细胞及血小板数;在显微镜下观察外周血涂片,并进行细胞计数。(2)EPO浓度测定。EPO是一种重要的造血调控因子,血液中的EPO水平能够反映机体生成红细胞的能力。参考文献中的方法,对血液进行样品处理,使用试剂盒对血液中的EPO含量进行测定,根据标准曲线计算得出样本的EPO浓度(pg/mL)。

4.骨髓有核细胞(BMCs)计数。实验参考陈姗姗等的方法,颈椎脱臼处死小鼠,取右侧股骨,用PBS缓冲液反复冲洗,取骨髓细胞悬液,配平至相同体积,取0.2mL细胞悬液裂解红细胞后,以自动细胞计数仪计数BMCs数量。

5.统计学分析。实验数据至少重复3次,结果以Means±SEM表示。采用Origin8.5和SPSS分析软件对实验数据进行处理分析,统计结果P<0.05认为有显著性差异。

三、结果分析

1.血虚模型小鼠一般行为学观察。与正常对照组相比,血虚模型组小鼠陆续出现皮毛蓬乱、光泽度降低以及部分脱毛现象,且随着实验进程的发展,症状逐渐加重。同时,小鼠还出现精神不佳、活动减少、体重下降的症状。

对比服用各FFJH剂量组与血虚模型组发现,服用FFJH组小鼠的皮毛光泽度下降及脱毛的程度均有所减轻,精神状态也有明显提升。各组小鼠的体重平均值如图1所示,通过对比可以看出,灌胃FFJH各组小鼠的平均体重均高于血虚模型组,且呈剂量对应关系,说明FFJH对血虚引起的小鼠体重下降有抑制作用。同时,通过在同剂量添加下体重值的对比可以观察到,TA30+FFJH较TA10+FFJH的效果更佳。

图1:FFJH对小鼠体重的影响()

注:与空白组相比,#代表与空白对照组相比差异显著,P<0.05;*表示与模型组相比差异显著。

2.FFJH对血虚模型小鼠外周血三系水平的影响。表1为不同FFJH剂量组、空白对照组以及血虚模型组小鼠的外周血中血红蛋白(Hb)、红细胞(RBC)、白细胞(WBC)以及血小板(PLT)水平情况。由表1可以看出,在血虚模型条件下,小鼠血常规中的各项指标均显著降低(P<0.01),即血虚模型组小鼠的血象三系水平明显下降。服用各FFJH剂量组与血虚模型组相比,小鼠的外周血三系水平均有所提升,且呈剂量对应关系,说明FFJH对小鼠的再生障碍性贫血有显著改善效果(P<0.01)。

3.FFJH对血虚模型小鼠EPO浓度的影响测定。研究表明,EPO具有抗凋亡以及促进血管生成的作用,其浓度水平能直观反映骨髓红系造血功能障碍的程度,图2为不同FFJH剂量组、空白对照组以及血虚模型组小鼠的EPO浓度测定结果。在血虚模型条件下,小鼠血清中的EPO浓度显著提高(P<0.01),而各FFJH剂量组与血虚模型组相比,EPO含量均显著降低,并呈剂量对应关系(P<0.01)。实验结果说明,FFJH对再生障碍性贫血小鼠外周血中各种血细胞的形成有促进作用,而且通过组间数据对比发现,在同剂量添加条件下,TA30+FFJH组较TA10+FFJH组的EPO浓度下降更明显,说明TA30+FFJH降低EPO浓度的作用比TA10+FFJH更好。

图2:FFJH对小鼠血液中EPO水平的影响()

注:与空白组比较,##代表与空白对照组相比差异极显著,P<0.01;**表示与模型组相比差异极显著,P<0.01。

4.FFJH对小鼠BMCs水平的影响。图3为不同FFJH剂量组、空白对照组以及血虚模型组的BMCs水平。与空白组相比,血虚模型组小鼠的造血干细胞数量显著下降(P<0.01),而各FFJH剂量组的BMCs水平明显高于血虚模型组,并呈剂量对应关系(P<0.05),推测FFJH有促进造血干细胞增殖的效果,可以抑制再生障碍性贫血小鼠有核细胞减少,进而对骨髓的造血机能产生明显的促进作用。通过组间数据对比可以发现,在同剂量添加条件下,TA30+FFJH组较TA10+FFJH组促进造血干细胞增殖的效果更明显,说明TA30+FFJH促进造血干细胞增殖的作用比TA10+FFJH更好。

图3:FFJH对小鼠BMCs水平的影响()

注:与空白组相比,##代表与空白对照组相比差异极显著,P<0.01;**表示与模型组相比差异极显著,P<0.01。

综上所述,本实验通过建立小鼠血虚模型,观察各组小鼠体重变化、外周血常规、EPO浓度以及骨髓单个核细胞数的差异,发现FFJH可以改善血虚模型小鼠再生障碍性贫血导致的精神不佳、毛发光泽受损、体重下降症状。服用FFJH后,模型小鼠血象三系水平以及骨髓细胞水平的下降速度均明显减缓(P<0.01),EPO水平波动明显减小,并呈剂量对应关系(P<0.01),说明FFJH能有效缓解并修复血虚模型处理小鼠的骨髓造血微环境受损。不过,本研究也存在一定的不足之处,虽然证明了FFJH可以为机体补充相关营养素以减轻小鼠的血虚症状,但未对调节血虚症状的具体机制进行进一步研究。

作者简介:赵立波(1987-),男,汉族,河南信阳人,工程师,硕士研究生,研究方向为功能性食品。

陈家铃(1993-),女,汉族,贵州安顺人,大学本科,研究方向为原料包裹及改性。

*通信作者:陶春霖(1986-),男,汉族,天津人,大学本科,研究方向为原料包裹及改性。

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