苍术GC指纹图谱研究

吕美红， 严启新， 梁 慧， 李 勇， 冯汉林， 谢晓梅

(1.安徽中医学院药学院，安徽省现代中药重点实验室，安徽合肥230031;2.深圳海王生物工程股份有限公司，广东 深圳518057)

苍术(Rhizoma Atractylodis)为菊科植物茅苍术Atractylodes lancea(Thunb.)DC.或北苍术 Atractylodes chinensis(DC.)Koidz.的干燥根茎，性温，味辛、苦，归脾、胃、肝经，具有燥湿健脾，祛风散寒，明目之功效［1］。现代药理学研究表明，苍术具有抗炎抗菌［2］、降糖、利尿、抗溃疡、促进胃排空、调节肠免疫功能［3］、抗心率失常及心肌保护［4］等作用，与大多数中药材一样，其药理活性复杂，药效不是来自任何单一活性成分。苍术中的主要成分为挥发油和苷类成分。传统中药质量评价方法是对某一化学成分进行定性或定量分析，而对大多数中药来说，任何单一活性成分或指标成分都难以全面准确地评价中药的真伪和优劣，因此，本实验采用GC法建立苍术的指纹图谱，在14批样品测定的基础上，初步总结出不同产地苍术指纹图谱的共性，为其质量控制标准的建立提供了依据。

1 仪器与试药

Agilent6890 N气相色谱仪 (美国Agilent公司);氢火焰离子化检测器;AG135型电子天平(METTLER TOLEDO);KQ－300DE型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);正十五醇 (Sigma－Aldrich Traning Co.，Ltd，纯度为99%);乙酸乙酯(色谱纯);水为重蒸水;其它试剂均为分析纯;苍术药材与饮片来自江苏、湖北、吉林、内蒙、陕西、安徽等地，2008年或2009年收集，均经安徽中医学院药学院中药教研室彭华胜副教授鉴定，样品来源见表1。

表1 苍术样品的来源Tab 1 Sources of Rhizoma Atractylodis samples collected

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱:HP－INNOWax Polyethylene Glycol(30.0 m×0.32 mm×0.5 μm)石英毛细管柱，氢火焰离子化检测器，气化室温度:270℃，柱温:185℃，检测器温度:280℃，载气为氮气，流速:25 mL/min，空气流速:380 mL/min，氢气流速:40 mL/min，柱前压为4.14×104Pa。

2.2 参照物溶液的制备 采用正十五醇(内标)为参照物，精密称定0.40 g，置1 000 mL量瓶中，加乙酸乙酯溶解，并稀释至刻度，作为参照物溶液(每1 mL中约含正十五醇0.40 mg)。

2.3 供试品溶液的制备 取苍术过2号筛药材粉末约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加乙酸乙酯25 mL，40℃超声(功率300 W，频率40 kHz)提取15 min，过滤，滤渣再加乙酸乙酯25 mL，同法处理，合并两次滤液，蒸干，残渣用上述参照物溶液溶解并定量转移至25 mL量瓶中，定容至刻度，摇匀，过0.45 μm滤膜即得供试品溶液。

2.4 测定方法 分别将各批药材与饮片的供试品溶液注入气相色谱仪，记录色谱图，即得。

2.5 方法学考察

2.5.1 空白试验 取乙酸乙酯注入气相色谱仪，记录色谱图，结果见图1。

图1 空白试验色谱图Fig.1 GC chromatograms of blank solution

2.5.2 对照试验 取参照物溶液注入气相色谱仪，记录色谱图，结果见图2。

图2 对照试验色谱图Fig.2 GC chromatograms of control solution

2.5.3 精密度试验 取同一供试品溶液(样品编号12)，连续进样6次，测得各共有峰相对峰面积的RSD小于2.89%，相对保留时间的RSD小于1.28%，表明仪器精密度良好。

2.5.4 重复性试验 取供试品(样品编号12)过2号筛粉末约0.5 g，精密称定，按2.3项下方法平行制备6份供试品溶液，分别进样，测得各共有峰相对峰面积的 RSD小于2.96%，相对保留时间的RSD小于0.86%，表明实验重复性良好。

图3 苍术气相指纹图谱Fig.3 The GC fingerprinting of Rhizoma Atractylodis

2.7 指纹图谱的分析与评价

2.7.1 共有指纹峰的标定 将参照物峰保留时间作为1，计算其它各共有峰与参照物峰间保留时间的比值，从而得出各共有峰的相对保留时间，结果见表2。通过比较14批苍术样品色谱图和相对保留时间，发现其中10个峰是各批供试品所共有，保留时间相对稳定，因此确定这10个峰为共有指纹

2.5.5 稳定性试验 取同一供试品溶液(样品编号12)，分别于 0、2、4、8、12、24 h 时间点进样分析，测得各共有峰相对峰面积基本一致，RSD小于1.98%，相对保留时间的RSD小于0.78%，表明供试品在24h内稳定，符合指纹图谱的要求。

图4 不同产地苍术气相指纹图谱Fig.4 The GC fingerprinting of Rhizoma Atractylodis from different habitats

2.6 指纹图谱的建立 取供试品溶液适量注入气相色谱仪，在同一选定的色谱条件下检测14批样品。苍术指纹图谱与不同产地样品指纹图谱见图3～4。峰。并通过对照，峰S为参照物正十五醇的峰，其保留时间为26.8 min，7、8号共有峰分别为茅术醇与 β－桉叶醇，其保留时间分别为22.1、24.9 min。且此两峰在各批样品指纹图谱中峰高较高，面积较大，含量较高，为主成分峰，因此在各批样品中较易被检出，可作为含量测定时的指标成分。

表2 14批苍术共有峰的相对保留时间Tab 2 Relative retention times of common peaks for fourteen batches of Rhizoma Atractylodis

2.7.2 共有指纹峰面积的分析 将参照物峰面积作为1，计算其它各共有峰与参照物峰间的面积比，从而得出各共有峰的相对峰面积，结果见表3。通过比较苍术各批样品指纹图谱中共有峰的峰面积，可知各共有峰相对峰面积差异较大，表明不同产地的苍术药材与饮片中共有成分的含量存在显著差异，14号样品(陕西)的两主成分色谱峰7、8的峰面积最大，同时即使是同一产地，如样品1～4号，其产地相同，但其含量仍存在显著差异，样品10与11号也是如此，但在各批药材指纹图谱中，各共有峰的面积之和大于总体峰面积的90%。2.7.3 非共有峰的分析 本实验所测定的14批药材与饮片中，除上述10个共有峰外，各自指纹图谱中还存在非共有峰，总体上来看，各批样品中非共有峰所占面积比例较小，不过10%，而且各自非共有峰的峰数也各不相同，这表明各批样品由于产地、生长环境等不同，在成分组成上除上述主要共有成分外，还是存在一定差异，其中4号样品非共有峰数目最少，14号样品非共有峰数目最多，表明4号样品成分组成最为简单，14号样品成分组成最为复杂;2号样品非共有峰所占面积比最大，12号样品非共有峰所占面积比最小，表明2号样品非共有成分含量所占比例最高，12号样品非共有成分含量所占比例最低。14批样品峰总数与非共有峰所占面积比见表4。

表3 14批苍术共有峰的相对峰面积Tab 3 Relative peak area of common peaks for fourteen batches of Rhizoma Atractylodis

表4 14批苍术非共有峰面积比Tab 4 Peaks area ratio of non-common for fourteen batches of Rhizoma Atractylodis

2.7.4 相似度评价 利用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统A版”(药典委员会)，以12号湖北产苍术样品色谱图作为参照图谱进行相似度计算，结果14批苍术药材与饮片中，相似度值在0.992～0.688间，大部分样品相似度较高，但仍不能直接建立苍术指纹图谱的共有模式，需对苍术各药材与饮片进行进一步样品间差异的评价，进行图谱模式识别分类，以便最终能够建立真实可靠的苍术标准指纹图谱。

3 讨论

3.1 参照物溶液的制备 本实验选用了从正十一醇至正十五醇以及它们所对应的烷烃等作为参照物进行试验，最终确定采用以正十五醇为参照物，其保留时间约为26.8 min，与样品各峰互不干扰，峰位稳定，分离度符合要求，基线平稳，重复性也好。

3.2 色谱柱的选择 本实验试用了HP－INNOWax Polyethylene Glycol(30.0 m ×0.32 mm × 0.5 μm)、HP－5(30.0 m ×0.32 mm ×0.25 μm)等石英毛细管柱，最终在 HP－INNOWax Polyethy－lene Glycol(30.0 m ×0.32 mm ×0.5 μm)柱上各批样品供试液均能得到较好分离，出峰时间稳定适中，且峰数较多，故本实验选用此柱。

3.3 指纹图谱的建立意义 本实验初步建立了苍术的指纹图谱，在有限样本的测定基础上，共找出了10个共有峰，并指认了其中两个含量较高的成分峰——茅术醇与β－桉叶醇，所得的指纹图谱多个成分间分离效果良好，能够较全面地反应苍术药材与饮片的内在质量，符合中药质量控制的整体性、复杂性和全面性的要求，为控制苍术内在质量提供了依据。

［1］中国药典［S］.一部.2005:111.

［2］肖 洋，张凌赢，华 芳，等.苍术提取液对铜绿假单胞菌R质粒体内体外消除作用的实验研究［J］.中国老年学杂志，2002，22:216.

［3］Yu K W，Kiyohara H，Matsumoto T，et al.Structural characterization of intestinal immune system modulating new arabino－3，6－galactan from rhizomes of Atractylodes lancea DC ［J］.Carbohydr Polym，2001，46:147.

［4］朱惠京，张红英，马玉莲，等.关苍术正丁醇萃取物对大鼠心肌缺血及缺血－再灌注损伤的保护作用［J］.中国中医药科技，2000，7(3):173.