超声法提取枸杞多糖工艺条件优选

蔡 宇

(暨南大学药学院，广东 广州510632)

枸杞具有补肾养肝、润肺明目、益精、补血等功效［1］。枸杞多糖(lycium barbarum polysaccharides，LBP)是枸杞的有效成分之一。经研究发现，LBP具有降血糖、抗疲劳、增强免疫、耐缺氧、延缓衰老、促进排铅等多种生物功能［2，3］。热水浸提法是枸杞多糖提取的常用方法，但其提取时间长，耗能多。超声波提取是近年来中药提取分离研究应用较多的方法，具有提取效率高、提取时间短、能耗低、提取药液杂质少、有效成分易于分离纯化等优点［4］。本研究采用正交实验法筛选超声法提取枸杞多糖的适合条件，以枸杞多糖提取量为考察指标，并与常规提取方法进行比较，为超声法用于枸杞多糖的提取提供理实验依据。

1 材料和方法

1.1 实验材料

枸杞，购于广州市清平药材市场，于60℃烘箱中烘烤1.5 h，取出后置于干燥器中放置24 h，备用。无水葡萄糖，分析纯，上海伯奥公司生产，批号:200802008。浓硫酸，分析纯，广州市东红化工厂，批号:080401202。苯酚，分析纯，汕头西陇化工厂，批号:071105。

1.2 供试品溶液的制备

1.2.1 超声提取法提取 称取枸杞9份，每份10 g，按照正交实验设计的条件提取。每次提取后过滤，合并滤液，浓缩至10 mL，备用。

1.2.2 煎煮法提取 称取枸杞子10 g，加10倍水于80℃水浴锅中浸泡2 h，于电磁炉上加热，沸后煎煮1.5 h，稍冷过滤，收集滤液;滤渣加8倍水，于电磁炉上加热，沸后煎煮1 h，稍冷过滤，合并滤液，浓缩至10 mL，备用。

1.2.3 枸杞多糖的分离 将取浓缩液离心处理(3 000 r/min，10 min)，除去水不溶性杂质，倾出上清液加5倍量无水乙醇，快速混匀30 s，3 000 r/min离心15 min，倾去上清液，沉淀加3倍量无水乙醇，方法同上，反复两次。用水将沉淀定量转移到50 mL量瓶中，并稀释至刻度，摇匀即得枸杞粗多糖液，浓度0.2 g(生药)/mL。待测。

1.3 枸杞多糖含量的测定

采用苯酚－硫酸法测定枸杞多糖的含量。

1.3.1 对照品溶液的制备 精密称取无水葡萄糖适量，加水溶解稀释制成每1 mL含1.0 mg的溶液，即得。

1.3.2 标准曲线的制备 分别精密吸取标准对照品溶液0.0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0 mL 置于带塞试管中，然后依次精密加入 2.0，1.8，1.6，1.4，1.2，1.0 mL 蒸馏水，再各加 6%的苯酚试剂1.0 mL，混匀，精密加入5 mL浓硫酸，混匀后放置5 min，置沸水浴中加热15 min，立即转入冷水浴中冷却至室温。于490 nm下测定吸光度值。以浓度－吸光度值做直线，经回归分析得回归方程。

1.3.3 供试品溶液枸杞多糖含量的测定 精密吸取样液0.5 mL三份，分别置于10 mL具塞试管中，精密加入蒸馏水1.5 mL，6%苯酚试剂1.0 mL，混匀，再精密加入浓硫酸5 mL，混匀后放置5 min，置沸水浴中加热15 min，立即转入冷水浴中冷却至室温，于490 nm下测定吸光度值。吸光度值带入标准曲线回归方程，计算浓度。

1.4 提取方法比较

称取枸杞子，分别按照正交实验得到的最适超声提取条件和水煎煮法提取枸杞多糖，每种方法重复3次，比较枸杞多糖提取量的平均值。

1.5 数据统计

2 结果

2.1 标准溶液的配制

精密称取无水葡萄糖51.2 mg，置50 mL量瓶中，加水溶解稀释到刻度，浓度1.024 mg/mL。

2.2 标准曲线

以各浓度的标准液的体积对吸光度做直线，得方程y=6.041 3x+0.004 9，r=0.999 5。

2.3 超声法提取枸杞多糖正交实验结果 见表1～3。

表1 超声法因素水平

表2 超声法提取枸杞多糖L9(34)正交试验设计与结果

表3 方差分析

从方差分析表可以看出，超声法提取枸杞多糖中水量对有效成分提取量的影响有统计学意义，P＜0.05;提取次数和提取时间对有效成分提取量的影响没有统计学意义，P＞0.05。从K值可见，所加水量为14倍，提取时间为15 min，提取次数为3次时枸杞多糖提取量最高。综合上述结果可知，超声法提取枸杞多糖的最佳条件为:水量14倍、提取时间15 min，提取次数3次。

2.4 超声提取和水煎煮法提取枸杞多糖的比较

超声法提取与水煎法提取比较，枸杞多糖提取量略高，但二者没有显著性差异，结果见表4。采用超声提取法提取更省时，更节能，提取效率更高。

表4 两种方法枸杞多糖提取量比较

3 讨论

枸杞子系茄科植物枸杞的干燥果实，性甘平，具有补肾养肝、润肺明目、益精骨、补血之功效。枸杞多糖(lycium barbarum polysaccharides，LBP)是从枸杞子中分离出的有效成分之一，具有降血糖、抗疲劳、增强免疫、耐缺氧、延缓衰老、促进排铅等多种生物功能。本实验采用正交实验筛选超声法提取枸杞多糖的适合条件，结果显示:超声法提取加水量为14倍，提取时间为15 min，提取次数为3次时枸杞多糖提取量最高;超声法提取与水煎法提取比较，枸杞多糖含量无显著性差异，但耗能较少，提取效率更高。可作为枸杞多糖提取的有效方法之一，但其用于大生产的提取条件还有待于进一步研究。

［1］唐 军，姚虹霞，王燕平.枸杞子药理作用进展［J］.中华现代医学与临床，2006，5(4):44－45.

［2］黄秋蚌，陈远锋.枸杞多糖的研究及其进展［J］.食品研究与开发杂志，2006，27(1):172－174.

［3］蔡天革等.枸杞多糖对染铅大鼠海马肾上腺素和去甲肾上腺素影响［J］.中国职业医学，2006，33(2):139－140.

［4］钟 玲，尹蓉莉.超声提取技术在中药提取中的研究进展［J］.西南军医，2O07，9(6):84－87.

［5］龚 涛，任大明，王 楠.枸杞多糖提取工艺的研究［J］.生物技术，2005，15(6):78.