HPLC法测定裸花紫珠片中木犀草素的含量

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(深圳市罗湖区中医院，广东 深圳 518001)

裸花紫珠片具有消炎、解毒[1]、收敛、止血的功效，临床上主要用于细菌感染引起的炎症，急性传染性肝炎，急性扁桃体炎、慢性咽炎，外用治烧、烫伤，外伤出血等[2]。有报道对其水提物采用分光光度法进行总黄酮的含量测定[3]，该法干扰多，专属性差。裸花紫珠中分离到紫珠萜酮、木犀草素等化合物，木犀草素及其配糖体是裸花紫珠中含量较多的成分[4]，为了更好地控制裸花紫珠片的质量，保证临床疗效，本实验采用高效液相色谱法对木犀草素进行含量测定。

1 仪器与试药

LC-10ATVP泵高效液相色谱仪(日本岛津公司)，SPD-10AVP型紫外可见检测器(日本岛津公司)，电子天平，超声波清洗器。木犀草素对照品(批号111520-200201，购自中国药品生物制品检定所)，裸花紫珠片由海南九芝堂药业生产，规格为0.5 g/片×24片。甲醇(色谱纯)、磷酸(分析纯)、水为重蒸馏水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱为Diamonsil C18柱(250 mm×4mm,5 μm)，流动相：甲醇-水-磷酸(50∶50∶0.2)，柱温：25℃；检测波长：350 nm；流速为1.0 mL/min；进样量:10 μL。理论板数按木犀草素峰值计算应不低于2 200。

2.2 对照品溶液的制备 精密称取木犀草素对照品约10 mg,置100 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀,即得木犀草素对照品储备液。精密吸取上述溶液1 mL置10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备 取样品20片，除去簿膜衣，精密称定，研细，取约2.5 g，精密称定，置索氏提取器中，甲醇溶液回流提取，提取液水浴蒸干，残渣加甲醇溶解，滤过，滤液转移至25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得供试品溶液。

2.4 阴性对照样品溶液的制备 取不含裸花紫珠的阴性对照样品，照供试品溶液的制备方法制备取得。分别吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照样品溶液注入色谱仪，记录色谱图。阴性对照样品溶液在木犀草素出峰位置处无干扰。

2.5 标准曲线的制备 分别精密吸取木犀草素对照品储备液1.0,2.0,3.0,4.0,5.0 mL置25 mL量瓶中，加甲醇至刻度、摇匀，在上述色谱条件下，各进样10 μL，记录色谱图。以峰面积为纵坐标，进样量(μg)为横坐标进行线性回归，得回归方程：Y=1.092 6×10-4X-0.080 3，r=0.999 3。结果表明木犀草素的进样量在0.012 5～0.206 6μg线性关系良好。

2.6 精密度试验 精密吸取上述对照品溶液，重复进样6次，测定峰面积1.53%(n=6)。结果表明仪器的精密度符合要求。

2.7 重复性试验 取批号100050裸花紫珠片6分，制备供试品溶液，测定含量，6分样品中木犀草素的平均含量为1.426 3 mg/片，求得RSD为1.39%。表明该方法的重复性良好。

2.8 稳定性试验 取同一份供试品液，分别于0，2，4，6，8，10 h,进样10 μL测定木犀草素的含量，RSD为0.68%(n=6)，表明样品在10 h内稳定。

2.9 加样回收率试验 取批号100050裸花紫珠片(含木犀草素2.843 1 mg/g)0.25 g，分别称取6分，精密称定，分别精密加入0.10 mg/mL木犀草素对照品溶液1 mL，制备供试品溶液，测定，结果平均加样回收率为99.89%，RSD为1.79%。

2.10 样品含量测定 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μL,注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，以外标法计算其含量，结果3批样品中木犀草素的含量分别为1.436 6，1.469 8，1.583 2 mg/片。

3 讨论

3.1 检测波长的选择 用紫外可见检测器对木犀草素的标准溶液进行检测，木犀草素的最大吸收波长为348 nm，考虑到此波长处为末端吸收,干扰较大,故把检测波长定在350 nm。

3.2 方法的可靠性 本方法测定裸花紫珠中的木犀草素含量，具有提取及测定方法简便、快捷、准确，重复性好的特点，可作为该制剂含量测定的方法。

[1]陈颖,杨国才.裸花紫珠抗炎作用及增强免疫功能的实验研究[J].广东微量元素科学,2006,13(8):39-41.

[2]胡蓉,姚闽,李玉云,等.HPLC法测定裸花紫珠药材中木犀草素的含量[J].中药新药与临床药理,2009,3(20):271-272.

[3]宋永强,谌乐刚.分光光度法测定裸花紫珠片中总黄酮含量[J].海南医学,2005,16(6):152.

[4]王祝年,韩壮,崔海滨,等.裸花紫珠的化学成分[J].热带亚热带植物学报,2007,15(4):359-362.