金丝草脂溶性化学成分研究*

陈国伟，李 鑫，史志龙，赵桂琴

（承德医学院中药学专业07级，河北承德 067000；2.指导教师）

金丝草又名黄毛草、笔仔草、猫尾草，为禾本科金发草属植物金丝草Pogonatherum crinitum （Thunb.）Kunth的干燥全草。文献记载，本品性寒，无毒，生于河边、墙隙、山坡和潮湿田圩，具有清热、解暑、利尿之功效[1]。在我国民间用于治疗感冒高热、中暑、尿路感染、肾炎水肿、黄疸型肝炎和糖尿病等症。金丝草主要分布于我国浙江、江西、福建及台湾等地，资源十分丰富。在前期研究工作中，作者通过体外抗HBV活性筛选实验研究，发现金丝草的70%乙醇提取物对乙型肝炎病毒（HBV）表面抗原的分泌具有剂量依赖性的抑制作用，半数抑制浓度（IC50）为108.5μg·mL-1[2]。本研究报道：作者采用活性追踪分离方法从中分离得到的4个脂溶性化合物：苜蓿素（Ⅰ）、3',4',5,5',7-五甲氧基黄酮（Ⅱ）、β-谷甾醇（Ⅲ）、β-胡萝卜苷（Ⅳ）。化合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ均为首次从金发草属植物中分离得到。

1 仪器材料

岛津UV2501PC紫外分光光度仪；日本电子JUMECA-400超导核磁共振仪；Micromass Zabspec高分辨磁质谱仪；显微熔点测定仪（X-4型）。AB-8大孔吸附树脂为南开大学化工厂产品；柱色谱硅胶为青岛海洋化工厂产品；聚酰胺为沧州宝恩化工有限公司产品。

金丝草药材2006年5月购于安徽亳州药材交易中心，经军事医学科学院放射与辐射医学研究所副研究员、生药学博士李彬鉴定为禾本科金发草属植物金丝草Pogonatherum crinitum（Thunb.）Kunth的干燥全草。

2 提取分离

金丝草干燥全草20kg，用10倍量体积分数为70%的乙醇水溶液浸泡提取3次，每次72h，滤过，合并滤液，减压回收溶剂得70%乙醇提取物。将提取物以适量水稀释，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯及水饱和正丁醇萃取。氯仿部位100g用AB-8硅胶柱分离，分别以氯仿-甲醇（20∶1，15∶1）洗脱得Fr.1-5，Fr.1用结晶法纯化，得化合物Ⅰ（20mg）；Fr.3用聚酰胺柱分离，结晶法纯化，得化合物Ⅱ（23mg）；Fr.4用结晶法纯化，得化合物Ⅲ（18mg）；Fr.5用结晶法纯化，得化合物Ⅳ（12mg）。

3 结构鉴定（见附图）

化合物Ⅰ：黄色粉末，盐酸-镁粉反应和三氯化铝反应阳性，表明为黄酮类化合物；ESI-MS分析表明其分子量为330。1HNMR（DMSO-d6，400MHz）中δ13.0 （1H,brs），10.86 （1H,brs），9.39（1H,brs）表示存在3个活泼羟基质子，δ7.02（1H,s）为黄酮3位质子的特征信号，3.89（6H,s）示有两个化学环境一致的甲氧基，推断B环2',6'或3',5'位存在2个甲氧基，7.34（2H,s）的2个质子则归属为2',6'或3',5'位。结合13CNMR （DMSO-d6,100 MHz）中δ148.2,139.8的信号存在，示该化合物为连三氧取代，故化合物B环为3',5'-二甲氧基-4'-羟基取代。6.57（1H,d,J=2.0Hz），6.21（1H,d,J=2.0Hz）为典型的间位偶合苯环质子信号，归属为6,8位质子。13CNMR（DMSO-d6,100MHz）显示了15个黄酮骨架碳和两个化学环境相同的甲氧基碳。经与文献[3]比较，该化合物鉴定为4',5,7-三羟基-3',5'-二甲氧基黄酮，即苜蓿素。

化合物Ⅱ：淡黄色片状结晶（甲醇），盐酸-镁粉反应和三氯化铝反应阳性，表明为黄酮类化合物；ESI-MS分析表明其分子量为372。1HNMR（DMSO-d6,600MHz）中δ 6.90（1H,s）为黄酮3位质子的特征信号，δ6.92（1H,d,J=2.4Hz），6.52（1H,d,J=2.4Hz）为典型的间位偶合苯环质子信号，归属为6，8位质子，δ3.91（6H,s）示有两个化学环境一致的甲氧基，推断B环2',6'或3',5'位存在2个甲氧基，δ7.31（2H,s）的2个质子则归属为2',6'或3',5'位。结合13CNMR（DMSO-d6，100MHz）δ153.2,140.2的信号存在，示该化合物为连三氧取代，故化合物B环为3',4',5'-三甲氧基取代。13CNMR（DMSO-d6,150 MHz）显示了15个黄酮骨架碳和两个化学环境相同的甲氧基，经与文献[4]对照，该化合物鉴定为3',4',5,5',7-五甲氧基黄酮。

化合物Ⅲ：无色针状结晶（乙酸乙酯），mp137-138℃，易溶于氯仿和丙酮，Libermann-Burchard反应呈阳性，示为甾类物质。EI-MS分析表明该化合物分子量为414，并出现脱水峰（396），表明分子中含有羟基，同时质谱中出现一系列质量相差为14的碎片单元，1HNMR（CDCl3,600MHz）谱中δ5.35（1H,m）为烯氢信号，高场区出现了多个甲基、亚甲基和次甲基信号重叠形成的“扫帚峰”，通过薄层层析与β-谷甾醇标准品对照，TLC行为完全一致，混合熔点不下降，该化合物鉴定为β-谷甾醇。

化合物Ⅳ：白色粉末，mp268-270℃，难熔于氯仿、甲醇等溶剂，易溶于吡啶。Molish反应和Liebermann-Burchard反应呈阳性。FAB-MS中出现414，397，381峰，具有β-谷甾醇的裂解特征。1HNMR（DMSO-d6,600 MHz）谱中δ4.21（1H,d,J=7.6Hz）为葡萄糖端基质子信号，高场区出现了多个甲基、亚甲基和次甲基信号重叠形成的“扫帚峰”，通过薄层层析与β-胡萝卜苷标准品对照，TLC行为完全一致，混合熔点不下降，与文献[5]对照鉴定为β-胡萝卜苷。

附图 化合物Ⅰ-Ⅳ结构图

[1]黄泰康,丁志遵,赵守训,等.现代本草纲目[M].北京:中国医药科学技术出版社,2001.1633.

[2]赵桂琴.素馨花化学成分及抗HBV活性的研究[D].北京:军事医学科学院放射与辐射医学研究所,2008.16.

[3]陈泉,吴立军,王军,等.中药淡竹叶的化学成分研究 [J].沈阳药科大学学报,2002,19（1）:23-24.

[4]Alan WF,John RL.Flavonoids from Merrillia caloxylon[J].Phytochemistry,1974,13（6）:1561-1564.

[5]郄建坤.中药地枫镇痛活性成分研究 [D].北京: 军事医学科学院毒物药物研究所,2000.40.