玉竹提取物A对小鼠脾淋巴细胞转化和IL-2产生的影响

关玲敏 潘兴瑜*

玉竹（polygonatum odoratum var plurif l orum ohwi）为百合科黄精属植物药，具有扶正固本、滋补强壮、养阴润燥和生津止渴的功效，中医认为有延年益寿和抗衰老作用，并常用于治疗糖尿病和结核等疾病。现代药理研究其主要成分有多糖、生物碱和菸酸等成分，证明有强心、扩张血管、降血压、降血脂和降血糖等作用[1]。有关玉竹对免疫功能的作用各家报道不一，有人认为玉竹具有增强免疫作用[1]。也有资料表明玉竹具有类似肾上腺皮质激素样作用[2]。本文对东北辽西山区所产玉竹的根茎进行提取，以玉竹提取物A为研究对象，探讨其对免疫功能的影响和作用机制。

1 材料与方法

1.1 材料

BALB/C小鼠，6～8W，由本校动物室提供；Con-A（Sigma，美国）；MTT（Fluka，瑞士）；玉竹提取物A（干品，由本室研究人员采集和提取）；RPMI1640（Gibco，美国）。

1.2 小鼠脾淋巴细胞转化实验

细胞密度为1×106/mL，加Con-A6μg/mL刺激和不加Con-A刺激两种形式。5%CO2条件下培养72h，于前4h加MTT，采用本室改进的MTT比色法[6]测定OD值。IP=（1-实验组OD值/对照组OD值）×100%。

1.3 小鼠脾淋巴细胞IL-2的产生

按文献[4,5]的方法，细胞密度为4×106/mL，采用5μg/mL的Con-A做为诱导剂，实验组添加不同剂量的玉竹提取物A，培养48h后收获上清冻存待测。

1.4 小鼠脾淋巴细胞去除Con-A和玉竹提取物的IL-2产生

按文献[6]的方法，Con-A浓度为7μg/mL，细胞密度为1×107/mL，实验组添加不同剂量的玉竹提取物A，培养6h后洗二次，去除Con-A和玉竹提取物A，重悬细胞密度为4×106/mL，继续培养42h后收获上清冻存待测。

1.5 小鼠IL-2的测定

小鼠IL-2靶细胞按文献[7]的方法诱导；小鼠IL-2的活性测定采用文献[3]的方法测定。IP=（1-实验组OD/对照组OD）×100%。

1.6 统计方法

采用t检验。

2 结 果

玉竹提取物A对Con-A诱导的小鼠脾淋巴细胞转化具有较强的抑制作用，其中以1μg/mL的剂量抑制作用相对为强，见表1；对小鼠脾淋巴细胞自然转化也有一定的抑制作用，但是抑制作用是有限的，低剂量没有作用，见表2；玉竹提取物A对小鼠脾淋巴细胞经Con-A诱导的IL-2产生也有显著的抑制作用，6h后去除Con-A和玉竹提取物A，其抑制作用不能解除，二者最有效的抑制剂量均在10μg/mL，见表3和4。

3 讨 论

玉竹提取物A对小鼠体外免疫功能具有显著的抑制作用，用Con-A最小剂量诱导小鼠脾淋巴细胞转化实验的结果表明0.1μg/mL的玉竹提取物A便可产生较强的抑制作用，对非Con-A诱导的小鼠脾淋巴细胞自然转化也有一定的抑制作用，但抑制作用较弱，低剂量并无此作用，二者均呈量效关系。以上结果提示玉竹提取物A对免疫功能的抑制作用是有限度的，只抑制增值的淋巴细胞，对静止的淋巴细胞未发现有任何明显的抑制作用，有实验结果表明，玉竹提取物A没有直接的细胞毒作用，也没有反映出对细胞的毒副作用，这区别于现在临床所应用的免疫抑制剂，是以损伤免疫系统而实现免疫抑制作用的。玉竹提取物A对小鼠脾淋巴细胞经Con-A诱导的产生也有显著的抑制作用，即使作用6h以后去除Con-A和玉竹提取物A，这种抑制作用仍不能解除，二者最低最有效的剂量都在10μg/mL。该结果提示玉竹提取物A对免疫功能抑制的机制之一就是抑制小鼠脾淋巴细胞IL-2的产生，且作用于早期阶段，但不能解释0.1μg/mL的玉竹提取物A对小鼠脾淋巴细胞转化所产生的较强的抑制作用，因为低剂量玉竹提取物A对小鼠脾淋巴细胞IL-2产生几乎没有影响，提示尚有另外的抑制环节。其明确的抑制作用尚在探讨之中。

表1 玉竹提取物A对小鼠脾淋巴细胞转化的影响

表2 玉竹提取物A对小鼠脾淋巴细胞自然转化的影响

表3 玉竹提取物A对小鼠脾淋巴细胞IL-2产生的影响

表4 去除Con-A和玉竹提取物A对小鼠脾淋巴细胞IL-2产生的影响

有关玉竹对免疫功能的影响有彼此相反的报道，为了验证有些地区玉竹对免疫功能的影响，我们所用的玉竹根茎系我室研究人员亲自上山采集，排除了易混杂在玉竹根茎内的七筒黄精，多花黄精和小黄精。通过上述实验结果证明辽宁产生玉竹对小鼠免疫功能具有较强的抑制作用，其研究结果可信。

玉竹对糖尿病和结核治疗有效的机制可能是抑制CD4淋巴细胞对胰腺β细胞的破坏作用和结核菌感染所带来的免疫损伤。本文对辽宁所产生玉竹对免疫功能的作用和机制已有了初步的揭示，对开发中药免疫抑制剂将具有意义。

[1]林厚文,韩公羽,谬时萱.中药玉竹有效成分研究[J].药理学报,1997,29(3):215～222.

[2]广西医学院微生物学教研室主编.英汉免学辞典[M].南宁:广西人民出版社,2005:382.

[3]潘兴瑜,付京晶.MTT比色法改进研究[J].中国免疫学杂志,1999,15(10):42.

[4]吴易元.人类T细胞生长因子的产生和测定[J].中华微生物学和免疫学杂志,2008,4(2):69.

[5]杨贵贞.免疫工程纲要与技术[M].长春:吉林科学技术出版社,2001:42-48.

[6]Gearing A,Johstone A.Thorpe Rproduction and assay of the interleukins[J].J Immunol Methods,2005,83:8.

[7]丁桂凤,席宏丽.用活化的小鼠脾细胞测定IL-2[J].上海免疫学杂志,1998,8(1):64.