分光光度法测定南葶苈子中总黄酮的含量

马梅芳，李芳，陈腾蛟

(1.山东省枣庄市药品检验所，山东 枣庄 277102；2.陕西省中医药研究院，陕西 西安 710003； 3.山东省枣庄市食品药品监督管理局峄城区分局，山东 枣庄 277300)

分光光度法测定南葶苈子中总黄酮的含量

马梅芳1*，李芳2，陈腾蛟3

(1.山东省枣庄市药品检验所，山东 枣庄 277102；2.陕西省中医药研究院，陕西 西安 710003； 3.山东省枣庄市食品药品监督管理局峄城区分局，山东 枣庄 277300)

目的：建立南葶苈子药材中总黄酮的含量测定方法。方法：采用分光光度法,以芦丁为对照品，以5%三氯化铝甲醇溶液为显色剂，在波长413nm处对样品中的总黄酮进行含量测定。结果：总黄酮在3～30μg·mL-1线性关系良好，平均加样回收率98.95%，RSD=0.90%(n=6)。结论：该方法操作简便、准确，具有很好的重现性和稳定性，适用于南葶苈子中总黄酮的含量测定。

南葶苈子；分光光度法；总黄酮；含量测定

南葶苈子为十字花科植物播娘蒿Descurainiasophia(L.) Webb ex Prantl的干燥成熟种子，味辛、苦，性大寒，具有泻肺平喘，行水消肿功能。用于痰涎壅肺，喘咳痰多，胸胁胀满，不得平卧，胸腹水肿，小便不利；肺源性心脏病水肿[1]。化学成分研究表明，南葶苈子中含有黄酮类成分，包括山柰酚、槲皮素、槲皮素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷等[2-5]。药理研究表明，黄酮类成分具有抑制血小板凝集，促进气管纤毛运动，抗炎、抗氧化等多方面的活性[6-8]。关于南葶苈子中黄酮类单体成分的含量测定研究已有报道[9-10]。

中药是一个多组分的复杂体系，由于其多靶位、多器官作用而具有多效性和整体平衡性。中药中发挥药效作用的物质基础与合成药物有着巨大的不同，它不是一个或两个单一的化合物，而是一组或几组结构类型近似的化合物群。近年来，强调中药化学成分群的整体性和复杂性特征，中药有效部位的检测更加受到重视。本文作者利用黄酮类化合物母核上的酚羟基能与铝离子络合显色的特性，建立了一种适用于南葶苈子中总黄酮含量测定的分析方法，为控制南葶苈子药材的质量提供了实验依据。

1 仪器与试药

UV-2401PC紫外可见分光光度计(日本岛津)，sartorius电子天平。芦丁对照品(中国药品生物制品检定所，批号100080-200306)。所用试剂均为分析纯。8批南葶苈子样品，经山东中医药大学石俊英教授鉴定为十字花科植物播娘蒿Descurainiasophia(L.)Webb ex Prantl的种子。

2 方法与结果

2.1 对照品溶液制备

精密称取芦丁对照品15.0mg，甲醇溶解并定容至100mL，得到浓度150μg·mL-1的芦丁对照品溶液。

2.2供试品溶液制备

取南葶苈子样品粉末1g，精密称定，加石油醚(60～90℃)100mL，回流提取至提取液无色，药渣挥干溶剂，精密加入甲醇50mL，回流提取2h，放冷，用甲醇补足损失的重量，滤过。

2.3 标准曲线绘制

精密量取浓度150μ·mL-1的芦丁对照品溶液0.5，1，2，3，4，5mL，加5%的三氯化铝甲醇溶液1mL，60℃加热10min，甲醇溶解并定容至25mL，以相应试剂为空白，照紫外-可见分光光度法，在413nm波长测定吸光度值。以芦丁对照品浓度C为横坐标，溶液吸光度值A为纵坐标，作标准曲线，求得回归方程A=2.927×10-2C+2.178×10-2，r=0.999 8。表明芦丁对照品浓度在3～30μg·mL-1与溶液的吸光度之间呈良好的线性关系。

2.4 精密度试验

精密量取芦丁对照品溶液(浓度150μg·mL-1)2mL，按标准曲线绘制方法操作，在413nm波长处，连续6次测定吸光度值，结果RSD=0.05%，表明仪器精密度良好。

2.5 稳定性试验

取同一供试品溶液，分别在0，20，40，60，80，100min时，在413nm波长处测定1次吸光度值，结果RSD=0.17%。表明供试品溶液在制备后120min内，稳定性良好。

2.6 重现性试验

取3号样品粉末1g，6份，按样品测定方法平行测定，计算总黄酮含量，结果RSD=0.67%，表明方法的重现性良好。

2.7 加样回收率试验

取3号样品(已知含量0.332%)粉末1g，6份，精密称定，精密加入浓度630μg·mL-1的芦丁对照品甲醇溶液5mL(含芦丁对照品3.15mg)，挥干溶剂，精密加入甲醇50mL，回流提取2h，放冷，用甲醇补足损失的重量，滤过，精密量取续滤液5mL，加入5%的三氯化铝甲醇溶液1mL，60℃加热10min，甲醇溶解并定容至25mL，以相应试剂为空白，照紫外-可见分光光度法，在413nm波长处测定吸光度值，由标准曲线读出浓度C，以干燥品计算总黄酮含量，结果见表1。

表1 总黄酮加样回收率试验

注：对照品加入量均为3.15mg

2.8样品测定

取样品粉末1g，精密称定，加石油醚(60～90℃)100mL，回流提取至提取液无色，药渣挥干溶剂，精密加入甲醇50mL，回流提取2h，放冷，用甲醇补足损失的重量，滤过，精密量取续滤液5mL，加入5%的三氯化铝甲醇溶液1mL，60℃加热10min，甲醇溶解并定容至25mL，以相应试剂为空白，照紫外-可见分光光度法，在413nm波长处测定吸光度值，由标准曲线读出浓度C，以干燥品计算总黄酮含量，结果见表2。

3 讨论与小结

三氯化铝显色分光光度法测定中药中总黄酮的含量，是根据黄酮类化合物分子中含有的3-羟基、4-羰基或5-羟基、4-羰基或邻二酚羟基可以与铝盐定量结合，形成有色络合物的原理，通过测定有色络合物的吸光度，来测定中药中总黄酮含量的方法。

表2 南葶苈子总黄酮含量测定

注：n=3

化学成分研究表明[2-5]，南葶苈子中含有的黄酮类化合物主要是以槲皮素、山柰素、异鼠李素为苷元的黄酮苷类成分，均含有3-羟基、4-羰基或5-羟基、4-羰基或邻二酚羟基，因此，可以用三氯化铝显色分光光度法测定总黄酮的含量。

本文对检测波长、显色剂加入量、样品处理方法与时间等多个实验条件进行了优化筛选。实验结果表明芦丁、三氯化铝形成的有色络合物与样品、三氯化铝形成的有色络合物均在413nm附近有最大吸收，故确定检测波长为413nm。显色剂5%的三氯化铝甲醇溶液的加入量为1mL时，测得溶液的吸光度值最大，显色的灵敏度最高，故确定显色剂5%的三氯化铝甲醇溶液的加入量为1mL。南葶苈子中含有的大量脂肪油对总黄酮的测定有一定的干扰，故确定样品的处理方法为先脱脂，再回流提取。2h以后，延长提取时间，测得总黄酮含量不再增加，故确定样品提取时间为2h。最终确定最佳实验条件为：以芦丁为对照品，检测波长413nm，显色剂5%的三氯化铝甲醇溶液的加入量为1mL，样品的处理方法为先脱脂，再回流提取2h。

实验结果表明,不同产地的南葶苈子样品总黄酮含量差别较大。其中山东滨州产的南葶苈子总黄酮含量最高，达0.521%；陕西商洛产的南葶苈子总黄酮含量最低，为0.324%。可见，产地对南葶苈子药材中总黄酮的含量有一定的影响。

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DeterminationofTotalFlavoneinDescurainiaSophia(L.)WebbexPrantlbySpectrophotometry

Ma Meifang1, Li Fang2, Chen Tengjiao3

(1.ZaoZhuangInstituteofDrugControl,ZaozhuangShandong277102,China; 2.ShanxiProvincialAcademyofTraditionalChineseMedicine,Xi′anShanxi710003,China; 3.ZaoZhuangYiChengFoodAndDrugAdministration,ZaozhuangShandong277300,China)

Objective: To set u Pthe method for determination of total flavone inDescurainiasophia(L.) Webb ex Prantl.Methods: The Contents of total flavone were determined by spectrophotometry, reference substance was rutin, 5% AlCl3in methanol was chromogenic agent and the detection wavelength was 413 nm.Results: The linear range of total flavone was 3～30μg·mL-1, the average recovery was 98.95%，RSD=0.90%(n=6).Conclusion: This method is simple, rapid, sensitive and accurate with good reproducibility. It is suitable for determination of total flavone inDescurainiasophia(L.) Webb ex Prantl.

Descurainiasophia(L.) Webb ex Prantl; Spectrophotometry; Total Flavone; Determination

*马梅芳，Email：mameifang0632@126.com

2010-03-16)