大白栓菌中3-氢化松苓酸B含量的测定

王星琴 汪鋆植 郭志勇 王海燕 邓改改 邹 坤

（1.天然产物研究与利用湖北省重点实验室（三峡大学）三峡大学化学与生命科学院,湖北 宜昌 443002；2.宜昌市中医院,湖北 宜昌 443000）

大白栓菌Trametes lactinea（Berk.）Pat.是一种多孔菌科栓菌属的大型真菌[1],生于阔叶树木材上.在亚洲各国广泛分布,研究表明大白栓菌具有调节免疫功能,促进禽畜生长作用.大白栓菌主要含有3-氢化松苓酸B等萜类成分.为了控制大白栓菌质量,为大白栓菌的开发利用奠定基础,本文采用高效液相色谱法对大白栓菌中3-氢化松苓酸B的含量进行了测定.

1 实验材料及仪器

大白栓菌（Trametes lactinea（Berk.）Pat.）由本实验室纯化培养.用白栎（Quercus f abri Hance）木屑、玉米粉、石膏、白糖（70∶35∶2∶1）组成培养基,接种后于28℃培养7 d[2].分别取表面无培养基的大白栓菌菌丝体和下层夹杂有培养基的菌丝体培养物干燥后供测定用.

甲醇、乙腈（天津市科密欧化学试剂开发中心）.3-氢化松苓酸B对照品（本实验室提供,从大白栓菌中提取纯化,纯度99.3%）.

Prostar 210高效液相分析色谱仪（美国）.U3010紫外-可见光分光光度计（日本）.

2 实验方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱为YMC-Pack AQ C18,250×4.6mm,5 μ m；流动相为乙腈-水（95 ∶5）；进样量为 10 μ L,流速为1.0mL/min；柱温为 25℃,检测波长为 214 nm.在该色谱条件下待测组分可达到基线分离见图1～2.

2.2 对照品溶液的制备

精密称取3-氢化松苓酸B（由天然产物开发与利用湖北省重点实验室从大白栓菌中提取纯化）2.0 mg置于10mL量瓶中.加甲醇超声溶解并稀释至刻度,摇匀,备用.

2.3 供试样品溶液制备

取大白栓菌培养物及大白栓菌粉碎,过60目筛,称取大白栓菌培养物粉末1g,大白栓菌粉末0.5 g,加甲醇10 mL,称重后浸泡4 h,40 Hz,40℃超声20 min,0.45μ滤膜过滤,供测定用.

2.4 标准曲线及线性关系考察

精密吸取对照品溶液 1、2、3、4、5、6 、7 、8 、9 、10,12,14μ L注入液相色谱仪,按色谱条件测得峰面积,以进样量（μ g）为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线.回归方程为:y=1192330x-112754,R=0.9999,在20-240mg·L-1呈良好的线性关系.

2.5 稳定性试验

取样品溶液,间隔3h测 1次,共测24h.结果 3-氢化松苓酸B峰面积RSD为1.02%（n=8）,表明供试品溶液室温下放置24h基本稳定.

2.6 精密度实验

精密吸取3-氢化松苓酸B对照品溶液10μ L重复进样5次,测定峰面积的RSD为0.91%.重复取同一样品5份,照“供试品溶液制备”项操作,测得3-氢化松苓酸B平均含量为5.63%,RSD为1.3%.

2.7 样品含量测定

收集培养的3批样品,分别测定大白栓菌菌丝体,大白栓菌培养物中3-氢化松苓酸B含量.按供试样品溶液制备方法制备供试品溶液,准确吸取供试品溶液各10μ L,按上述色谱条件测定,结果见表1.

表1 3-氢化松苓酸B含量

2.8 加样回收试验

精密称取已知含量样品5份,加入与样品含量相当的对照品,测定3-氢化松苓酸B含量,计算回收率,结果见表2.

表2 3-氢化松苓酸B加样回收率（n=5）

3 讨 论

对照品溶液经紫外光谱仪扫描其最大吸收峰为214 nm,故选择214nm为测定波长,采用紫外检测器进行检测,在此条件下3-氢化松苓酸B与其他杂质峰分离度良好.

大白栓菌为多孔菌科真菌,国内外对其研究较少,近年来,大白栓菌作为萌发菌应用于天麻生产,促进了对大白栓菌的研究[3].实验表明大白栓菌主要含萜类化合物,该类化合物具有调节免疫功能,促进禽畜生长作用[4].3-氢化松苓酸B可能通过激活机体免疫系统,一方面提高畜禽体质,增强抗病能力,另一方面导致畜禽采食量增加,促进畜禽生长.但3-氢化松苓酸B水溶性差,水煎不易浸出,醇提成本较高,使用时宜加在饲料中让畜禽采食.

本文对大白栓菌中3-氢化松苓酸B的含量进行了测定.为进一步制定大白栓菌的质量控制标准提供了基础.3-氢化松苓酸B是大白栓菌的主要成分之一,亦为大白栓菌主要活性成分.大白栓菌中3-氢化松苓酸B平均达5.71%.培养物中3-氢化松苓酸B平均为0.53%.其含量较高,可进一步开发利用.

[1]赵继鼎.中国真菌志:第3卷[M].北京:科学出版社,1998:365-366.

[2]谭梦华,段朝红,桂裕成等.大白栓菌的人工培养条件优化[J].时珍国医国药,2008,19（2）:462-463.

[3]汪鋆植,王绍柏,刘晓琴等.栽培条件对无土袋栽天麻种麻质量的影响[J].中国民族民间医药杂志,2006（4）:243-246.

[4]田允波,葛长荣,高士争.天然植物提取物对生长猪的促生长作用及其内分泌机制的研究[J].饲料及饲养试验,2006（7）:40-42.