承德野生杏仁和杏叶蛋白质含量的测定

于文清， 刘晓辉

（河北民族师范学院 生物系，河北 承德 06700）

承德野生杏仁和杏叶蛋白质含量的测定

于文清， 刘晓辉

（河北民族师范学院 生物系，河北 承德 06700）

承德特产之一的苦杏仁，从现有文献看，野生杏仁蛋白的加工研究集中在杏仁粉、杏仁露等相对较少的品种；杏叶的开发近乎为零。蛋白质在人体和动物中担负着各种重要而特殊的功能。作者运用凯氏定氮法对承德本地区的野生杏仁和杏叶蛋白质含量进行测定，为进一步开发杏仁和杏叶提供基础数据，从而促进地方经济的发展。

杏仁；杏叶；蛋白质；凯氏定氮；消化；蒸馏；滴定

野生杏仁是一种传统的中药，在我国使用已有上千年的历史。《本草纲目》记载，杏仁有“润肺脾、消食积、散滞气”三大好处，其本身含有丰富的蛋白质，既是高级营养品，又可供药用。作为承德特产之一的苦杏仁，从现有文献看，苦杏仁蛋白的加工研究集中在杏仁粉、杏仁露等相对较少的品种；杏叶的开发近乎为零，没有引起人们的重视。蛋白质是构成人体的物质基础。人体缺乏蛋白质，不但抵抗力减弱，严重时往往出现四肢水肿、贫血、肝肾损坏及消化道溃疡症状。本文运用凯氏定氮法对承德地区的苦杏仁和杏叶蛋白质含量进行测定，为进一步开发杏仁和杏叶提供基础数据，从而促进地方经济的发展。

氮在蛋白质中的含量比较接近，平均为16%，即每克氮相当于6.25克蛋白质。因此，可以通过凯氏定氮的方法计算氮的含量，进而计算出蛋白质的含量。

1 实验部分

1.1 实验原理

凯氏定氮法原理：进行消化时，含氮有机物与浓硫酸在消煮炉内共热，其中的C和H被氧化成二氧化氮和水，而N则被转化成氨，并进一步与浓硫酸作用生成硫酸铵（甘氨酸的消化过程可表示如下：

蒸馏时，浓碱使消化液中的硫酸铵分解，游离出氨。反应中释放的氨与水蒸气经冷凝管进入接收瓶的硼酸溶液中。硼酸溶液吸收氨后，溶液中的氢离子浓度减低，然后再用标准无机酸滴定，直至恢复溶液中原有的氢离子浓度为止，最后根据所用标准酸的摩尔数计算出待测物中的含氮量。公式如下：

c为标准盐酸溶液摩尔浓度；V1为滴定样品用去的盐酸溶液平均ml数；V2为滴定空白消化液用去的盐酸溶液平均ml数；W为样品质量（g）；样品中蛋白质含量（%）=总氮量×6.25。

1.2 器材与试剂

1.2.1 主要仪器

DGG-9070B恒温电热鼓风干燥箱、消化管、KXY-1010控温消煮炉、DDY-2A凯氏定氮仪、微量滴定管。

1.2.2 试剂

消化液（H2O2：浓硫酸：水=3:2:1)

粉末硫酸钾-硫酸铜混合物（催化剂）硫酸钾与无水硫酸铜以3:1配比研磨混合

30%NaOH溶液

2%硼酸溶液

标准盐酸溶液（约0.01mol/L）

混合指示剂（田氏指示剂）

由50ml0.1%甲烯蓝乙醇溶液与200ml0.1%甲基红乙醇溶液混合，存于棕色瓶中备用。此指示剂酸性时为紫红色，碱性时为绿色。变色范围很窄、灵敏。

1.2.3 样品

野生杏仁、常绿杏叶、常绿发酵杏叶、落叶。

1.3 样品采集与制备

取野生杏仁、常绿杏叶、常绿发酵杏叶、落叶若干，分别晒干后用粉碎机粉碎，然后研磨成精细粉末，将其分别置于称量瓶中，放在DGG-9070B型电热恒温鼓风干燥箱中，在60℃下干燥约20小时，达恒重即可。

1.4 实验方法

凯氏定氮法。

1.5 实验操作

1.5.1 取样

（1）取4个消化管并标号，各加1颗玻璃珠。

（2）在1～3号管中各加样品0.2g，催化剂0.4g，消化液10ml（直接将样品送入瓶底，不要沾在瓶口和瓶颈上，以免影响实验结果），为实验组。

（3）在4号管中加0.2ml蒸馏水，0.4g催化剂和10ml浓硫酸为对照组。

1.5.2 消化

（1）将4个已取样的消化管置于通风橱内，放在消煮炉上消化，先在100℃预热半小时（不要使液体冲到瓶颈）。

（2）预热后，加大火力，迅速升温至360℃继续消化，直至消化液成淡绿色为止（约两个半小时）。

（3）消化完毕，待管中溶物冷却后，加10ml蒸馏水（慢加，随加随摇）。

（4）冷却后，将溶物倒入100ml容量瓶中，定容备用。

1.5.3 蒸馏

（1）从冷水通水口通入冷水进行水封，打开开关，预热凯氏定氮仪。

（2）从容量瓶中量取60ml回收液倒入消化管，并将消化管固定到蒸馏头下的橡胶塞上。

（3）量取30ml硼酸溶液置于锥形瓶中，滴入3～4滴指示剂，溶液呈紫红色，固定在托盘上。

（4）按下加碱开关，加碱后按下蒸馏开关，开始蒸馏。当锥形瓶中加有指示剂的硼酸溶液由紫红色变为浅绿色，且不再有气体产生时停止蒸馏。

（5）更换装有蒸馏水的消化管和锥形瓶，对仪器进行清洗。

（6）更换装有新样品的消化管，并换上新的装有硼酸与指示剂的锥形瓶进行下一次蒸馏，直至完成。

1.5.4 滴定

全部蒸馏完毕后，用标准盐酸溶液滴定各锥形瓶中收集的氨量，直至硼酸指示剂溶液由淡绿色变为紫红色即为滴定终点。

记录滴定时所耗标准盐酸的量。

2 结果与讨论

2.1 结果

公式如下：

将数据代入公式得：

表1 各种样品蛋白质含量的比较

2.1 结果

从表1可以看出蛋白质含量最高的是野生杏仁，19.29%；从杏叶类型看常绿发酵杏叶蛋白质含量最高，7.15%，落叶的含量最低1.00%；由此可以得出，苦杏仁含量高于杏叶含量，而发酵常绿杏叶高于普通落叶，说明发酵后杏叶可以充分利用，进行深加工，如作为青饲料利用，前景非常乐观。

3 前景展望

承德是一个盛产野生杏仁的地方，有着丰富的杏仁和杏叶资源，合理的开发进行深加工有着广阔的前景，充分发挥野生杏仁的优势，在原来生产杏仁露、杏仁粉的基础上，进一步开发，可以开发美容杏仁蛋白面膜、杏仁膏；营养保健的蛋白质粉。杏叶有着丰富的资源，都大量浪费在深山里，采摘后可以通过发酵后深加工作为青饲料，形成新的产业，为地方经济服务。

［1］北京大学生物系生物化学教研室．生物化学实验指导[M]．北京:人民教育出版社，1979．

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[4]聂剑初，吴国利等合编．生物化学基础教程（第3版）[M]．北京:高等教育出版社，1999．06

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A

1005-1554（2011）02-0054-02

2010-12-08

于文清（1971-），女，河北丰宁人，河北民族师范学院生物系副教授，理学硕士。