二甲双胍与消渴热清丸合用对模型大鼠胰岛素抵抗的影响

厉伟兰，陈国明，邵 华

（东南大学附属中大医院临床药学室，南京市 210009）

二甲双胍与消渴热清丸合用对模型大鼠胰岛素抵抗的影响

厉伟兰＊，陈国明，邵 华

（东南大学附属中大医院临床药学室，南京市 210009）

目的：研究二甲双胍与消渴热清丸合用对模型大鼠胰岛素抵抗的影响。方法：选取体重180～200g的雄性Wistar大鼠60只，随机均分为正常对照、模型、二甲双胍、消渴热清丸和二甲双胍+消渴热清丸组。各组大鼠给药第6周后，取血分别检测空腹血糖（FBG）、血清胰岛素（FIns）、血清游离脂肪酸（FFA）、血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平与胰岛素敏感性指数（ISI）。结果：经10%果糖水喂养5周后，模型组大鼠FBG、FIns、FFA、TNF-α均较正常对照组显著增高（P＜0.01），ISI较正常对照组显著降低（P＜0.01），大鼠有明显的胰岛素抵抗；各给药组大鼠上述各项指标与模型组比较显著降低（P＜0.01或P＜0.05），胰岛素敏感指数显著升高（P＜0.01）；且二甲双胍+消渴热清丸组比单独给予二甲双胍的大鼠效果更好。结论：二甲双胍与中药复方消渴热清丸合用有明显的协同作用，并且能在剂量上降低西药二甲双胍的用量，从而减轻二甲双胍的毒副作用。

二甲双胍；消渴热清丸；中西药合用；胰岛素抵抗；协同作用

胰岛素抵抗是2型糖尿病发病的重要机制之一，也是临床常见的一种代谢异常综合征，贯穿于2型糖尿病发生发展过程的始终。近年来众多研究提示，中药及天然药物在治疗2型糖尿病方面具有疗效显著、副作用小的特点，并在改善胰岛素抵抗方面有独特的优势[1～3]。但中医中药在治疗2型糖尿病时，降糖效果不如西药快速显著，因此在临床应用时多与西药合用。本研究中的消渴热清丸为名中医经验方，作为医院制剂应用于临床已有多年的历史。笔者通过研究中药复方消渴热清丸和西药二甲双胍分别单用及二者合用后对胰岛素抵抗大鼠模型的作用，为临床中西医结合治疗2型糖尿病提供理论依据。

1 仪器与材料

1.1 仪器

SN-695智能型放免测量仪（上海日环仪器厂）；7060型全自动生化分析仪（日本日立公司）；MK-3型全自动酶标仪（芬兰雷柏公司）。

1.2 试药

生化测定试剂盒、葡萄糖（Glu）测定试剂盒（上海荣盛生物技术有限公司）；游离脂肪酸（FFA）检测试剂盒（南京建成生物工程研究所）；肿瘤坏死因子-α（TNF-α）测试盒（上海森雄科技实业有限公司）；盐酸二甲双胍片（昆山培力药品有限公司，批号：090330）；消渴热清丸（由东南大学附属中大医院制备，用时加适量蒸馏水配成适宜浓度的混悬液）。

1.3 动物

Wistar大鼠60只，♂，体重180～200g，购于南京市江宁区青龙山动物繁殖场（动物生产合格证号：SCXK（苏）2009-0018）。

2 方法

2.1 复制模型

参照Vasdev S等人方法[4～6]，在给予普通饲料喂养的同时，饲以10%果糖水，喂养5周。

2.2 分组及处理

实验分为5组，即正常对照、模型、二甲双胍（0.1g·kg-1）、消渴热清丸（10.0g·kg-1）和二甲双胍（0.05g·kg-1）+消渴热清丸（10.0g·kg-1）组，每组12只。ig给药，每天1次，连续42d，给药期间继续喂养10%果糖水。

2.3 检测项目及方法

给药42d后，分别取血，分离血清，用全自动生化分析仪检测空腹血糖（FBG），放射免疫法检测血清胰岛素（FIns）水平，分光光度法检测血清FFA水平，酶联免疫吸附法检测血清TNF-α水平。并以FBG水平和FIns水平乘积之倒数的自然对数作为胰岛素敏感指数（ISI）。比较各组间在以上几项指标的差异，判定不同药物对大鼠胰岛素抵抗的防治作用。

2.4 统计学方法

所有数据以±s表示，采用SPSS11.0统计软件进行分析，组间比较采用t检验。

3 结果

3.1 复制模型后大鼠FBG、FIns、ISI、FFA、TNF-α水平的变化

经10%果糖水喂养5周后，模型组大鼠FBG、FIns、FFA、TNF-α水平均较正常对照组显著增高（P＜0.01），ISI较正常对照组显著降低（P＜0.01），表明经复制模型后，大鼠有明显的胰岛素抵抗。复制模型后大鼠FBG、FIns、ISI、FFA、TNF-α的变化见表1。

3.2 给药后各组大鼠FBG、FIns水平与ISI的变化

各给药组大鼠的FBG、FIns水平和ISI与模型组比较有显著性差异（P＜0.01）；而同时给予二甲双胍与消渴热清丸的给药组大鼠，其FIns水平和ISI与单独给予二甲双胍的大鼠比较均有显著性差异。大鼠FBG、FIns水平与ISI的变化见表2。

3.3 各组大鼠血清FFA、TNF-α水平的变化

各给药组大鼠连续给药42d后血清中FFA和TNF-α水平与模型组比较显著降低（P＜0.01或P＜0.05），而同时给予二甲双胍和消渴热清丸的给药组大鼠FFA和TNF-α水平与单独给予二甲双胍的大鼠比较，均有显著性差异。大鼠血清FFA、TNF-α的变化见表3。

表 1复制模型后大鼠 FBG、FIns、ISI、FFA、TNF-α的变化（±s，n＝12）Tab1 Changes of fasting blood glucose，serum insulin，insulin sensitivity index，free fat acid and tumor necrosis factor-α in rats after dupicatting mode（l±s，n＝12）

表 1复制模型后大鼠 FBG、FIns、ISI、FFA、TNF-α的变化（±s，n＝12）Tab1 Changes of fasting blood glucose，serum insulin，insulin sensitivity index，free fat acid and tumor necrosis factor-α in rats after dupicatting mode（l±s，n＝12）

与正常对照组比较：＊P＜0.01vs.normal control group：＊P＜0.01

组别正常对照组模型组FBG/mmol·L-1 4.25±1.2310.67±1.21＊FIns/ng·mL-1 38.91±8.6553.90±7.43＊ISI-5.0±0.39-6.34±0.16＊FFA/μmol·L-1 839.±45.41421.8±88.7＊TNF-α/pg·mL-1 18.86±5.2632.07±5.70＊

表2 给药后大鼠FBG、FIns水平与ISI的变化（±s，n＝12）Tab2 Changes of fasting blood glucose，serum insulin，insulin sensitivity index in rats after treatmen（t±s，n＝12）

表2 给药后大鼠FBG、FIns水平与ISI的变化（±s，n＝12）Tab2 Changes of fasting blood glucose，serum insulin，insulin sensitivity index in rats after treatmen（t±s，n＝12）

与模型组比较：＊P＜0.01vs.model group：＊P＜0.01

组别模型组二甲双胍组二甲双胍+消渴热清丸组消渴热清丸组剂量/g·kg-1-0.10.05+10.010.0FBG/mmol·L-1 10.67±1.214.47±0.53＊4.18±0.92＊7.70±1.65＊FIns/ng·mL-1 53.90±7.4344.89±4.74＊38.65±6.25＊43.76±5.42＊ISI-6.34±0.16-5.29±0.17＊-5.05±0.28＊-5.79±0.31＊

表3 大鼠血清FFA、TNF-α的变化（±s，n＝12）Tab3 Changes of free fat acid and tumor necrosis factor-α in rat（s±s，n＝12）

表3 大鼠血清FFA、TNF-α的变化（±s，n＝12）Tab3 Changes of free fat acid and tumor necrosis factor-α in rat（s±s，n＝12）

与模型组比较：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01vs.model group：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01

组别模型组二甲双胍组二甲双胍+消渴热清丸组消渴热清丸组剂量/g·kg-1-0.10.05+10.010.0FFA/μmol·L-1 1421.8±88.7971.6±47.1＊＊900.7±69.7＊＊995.1±107.8＊＊TNF-α/pg·mL-1 32.07±5.7026.26±2.99＊20.22±4.66＊24.98±7.91＊

4 讨论

在2型糖尿病发病过程中，胰岛素抵抗与其有着密切的关系，74%的2型糖尿病患者可发生胰岛素抵抗。胰岛素抵抗的病因目前尚不清楚，近年来的研究表明，FFA与TNF-α对胰岛素抵抗的发生发展起着重要作用[7～9]。FFA可通过影响葡萄糖转运和葡萄糖磷酸化而抑制胰岛素作用下的葡萄糖摄取、糖原合成及葡萄糖氧化，增加肝糖输出而导致机体产生胰岛素抵抗。TNF-α则可干扰周围组织的胰岛素作用而导致胰岛素抵抗，其机制可能是：（1）TNF-α致胰岛素受体底物中丝氨酸磷酸化而抑制了受体酪氨酸激酶的活性；（2）TNF-α致血FFA增高，干扰了周围组织对葡萄糖的摄取；（3）TNF-α抑制脂肪细胞葡萄糖转运体4（GLUT4）的表达，从而抑制脂肪细胞摄取葡萄糖。

消渴热清丸为东南大学附属中大医院名医之经验方，方由生地、黄连、葛根、花粉、知母、黄芩、丹参等十余味药组成。方中以生地滋阴清热凉血为君药；黄连清热散郁火、燥湿防滋腻太过，为治疗消渴之要药，葛根生津止渴、去烦热、散郁火，二者共为臣药；佐以黄芩增黄连清热之功，花粉增葛根生津止渴之能。诸药合用，攻补兼用，润燥结合，共奏滋阴清热、生津止渴之效。

本研究通过观察该方与二甲双胍单用及合用对实验性糖尿病大鼠FBG、FIns、ISI、TNF-α和血清FFA的影响，结果显示，该方具有一定的改善机体胰岛素抵抗的作用，其作用机制部分可能是通过抑制机体FFA和TNF-α水平而发挥作用。至于其对胰岛素受体后信号传导通路具体环节的影响，还有待于进一步深入研究。本方与0.05g·kg-1剂量的二甲双胍合用时，对大鼠胰岛素抵抗的改善作用与单独给予0.1g·kg-1剂量的二甲双胍比较，作用优于单用二甲双胍组。结果表明，中药复方消渴热清丸与二甲双胍合用有较明显的协同作用，并且能在剂量上降低西药二甲双胍的用量，从而减轻二甲双胍的毒副作用，同时为中医经验方应用于临床治疗2型糖尿病提供了一些理论依据。

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Effect of Metformin Combined with Xiaoke Reqing Pills on Insulin Resistance in Model Rats

LI Wei-lan，CHEN Guo-ming，SHAO Hua
（Dept.of Clinical Pharmacology，The Affiliated Zhongda Hospital of Southeast University，Nanjing 210009，China）

OBJECTIVE：To study the effect of metformin combined with Xiaoke reqing pills on insulin resistance of model rats.METHODS：60male Wistar rats with body weight of 180～200g were randomly divided into five groups：normal control group，model group，metformin group，Xiaoke reqing pills group and Metformin combined with Xiaoke reqing pills group.6weeks after treatment，the levels of fasting blood glucose（FBG），fasting insulin（FIns），free fat acid（FFA），tumor necrosis factor-α（TNF-α）and insulin sensitivity index（ISI）were determined.RESULTS：After 5weeks of fructose feeding，the levels of FBG，FIns，FFA and TNF-α of model group were significantly higher than those of normal control group（P＜0.01）.The ISI of model group was significantly lower than that of normal control group（P＜0.01）.Above results proved that the insulin resistance model was successfully made.Indexes of every treatment group decreased significantly，compared with model group（P＜0.01orP＜0.05）.ISI of treatment group was significantly higher than that of model group（P＜0.01）.Metformin combined with Xiaoke reqing pills was better than metformin alone.CONCLUSION：Metformin combined with Xiaoke reqing pills show synergistic effect.The dosage of metformin has been reduced then the toxic and side effects of metformin could be lowered.

Metformin；Xiaoke reqing pills；Western medicine combined with traditional Chinese medicine；Insulin resistance；Synergistic effect

R285；R587

A

1001-0408（2011）19-1749-03

＊主管药师，硕士。研究方向：临床药学。电话：025-83272127。E-mail：cixilwl@sina.com

2010-08-12

2011-02-26）