XRCC1表达对胃癌术后奥沙利铂化疗患者预后的影响

马艳梅 张振铭 李 华 (辽宁医学院附属第一医院胃肠外科，辽宁 锦州 00)

XRCC1表达对胃癌术后奥沙利铂化疗患者预后的影响

马艳梅 张振铭1李 华2(辽宁医学院附属第一医院胃肠外科，辽宁 锦州 121001)

目的 观察XRCC1在胃癌组织中的表达，探讨其与接受手术及奥沙利铂化疗患者预后的影响。方法 选择接受手术和术后行奥沙利铂化疗的胃癌患者的组织标本，采用免疫组化(SP)法检测XRCC1的表达，Log－rank分析其与临床特征和远期生存率的关系。结果 胃癌组织中XRCC1阳性率为55.6%。XRCC1表达阴性患者中位生存期为52个月，3年生存率为71.9%，5年生存率为34.4%;而XRCC1表达阳性的患者中位生存期为42.4个月，3年生存率为52.5%，5年生存率为22.5%(χ2=0.756，P=0.038 4)。结论 胃癌组织中的XRCC1表达水平与接受手术及术后奥沙利铂化疗患者的远期生存率密切相关，可作为术后胃癌生存预测的指标。

胃癌;奥沙利铂;X线交错互补修复基因1;化学疗法;预后

铂类作为多种肿瘤化疗的一线使用药物，经常被用于胃癌化疗，但肿瘤的耐药性严重影响了其疗效。X线交错互补修复基因 1(X－ray repair cross complementing group 1，XRCC1)是DNA修复基因中的重要成员，其编码的蛋白产物参与DNA损伤的碱基切除修复途径，在修复DNA单链断裂、保持细胞基因组的完整和稳定中起重要作用〔1〕。研究发现，XRCC1基因改变可影响XRCC1蛋白的活性，进而影响多种肿瘤对铂类药物的疗效〔2～4〕。本实验旨在研究XRCC1蛋白在胃癌组织中的表达及与奥沙利铂化疗敏感性的关系。

1 材料与方法

1.1 临床资料 选择2004年1月至2008年1月辽宁医学院附属第一医院收治的胃癌患者72例，其中男40例，女32例;年龄28～75〔平均(53.5±23.3)〕岁。根据国际抗癌联盟(UICC)修订的胃癌TNM分期分为:Ⅱ期24例，Ⅲ期48例。组织学类型:高分化腺癌20例，中、低分化腺癌52例。所有患者术前胃镜诊断明确，术后病理证实，术前均未行放化疗治疗，无重要脏器功能损害。术后均采用FLO－FOX方案化疗。剂量为奥沙利铂130 mg/m2，静脉输注 3 h，1次/d;亚叶酸钙 0.1 g/m2，静脉输注1 ～5 d;5－氟尿嘧啶500 mg/m2，静脉输注大于6 h，1 ～5 d。每3 w重复1次，化疗2～7个周期。

1.2 免疫组化检测与结果判断 手术切除标本经4%甲醛固定，石蜡包埋，常规4 μm厚切片。采用免疫组化(SP)法检测XRCC1蛋白表达情况。兔抗人XRCC1蛋白多克隆抗体购自北京博奥森生物技术有限公司;PV－9000二步法免疫组化检测试剂购自北京中杉金桥公司。石蜡切片常规脱蜡水化后，蒸馏水洗2 min×3次;微波抗原修复15 min，自然降至室温，pH7.4，0.01 mol/L磷酸盐缓冲液(PBS)洗2 min×3次;3%H2O2孵育20 min以阻断内源性过氧化物酶，pH7.4，0.01 mol/L PBS洗2 min×3次;滴加一抗(1∶200 XRCC1 多抗)，4℃过夜，pH7.4，0.01 mol/L PBS洗2 min×3次;滴加试剂1，37℃孵育20 min，pH7.4，0.01 mol/L PBS洗2 min×3 次;滴加试剂 2，37℃孵育20 min，pH7.4，0.01 mol/L PBS洗2 min×3 次;二氨基联苯胺(DAB)显色，苏木素复染，1%盐酸酒精分化，自来水返蓝15 min，脱水，透明，中性树脂封片。

XRCC1阳性主要呈细胞核着色。表达水平判定标准:着色程度分为3分，无着色0分，浅黄色1分，棕黄色2分，深褐色3分;免疫反应范围按照着色细胞百分比来计分，无着色0分，着色范围＜20%为1分，着色范围在20% ～50%之间为2分，着色范围＞50%为3分;总评分为着色程度与范围的乘积，＜2分为阴性表达或不表达，≥2分为阳性表达〔5〕。

1.3 随访 所有患者均观察至疾病进展时间(TTP)，即从首次化疗开始至证实病情恶化或死亡的时间。至随访结束时未得出TTP的，统计作为截尾数据。

1.4 统计学分析 应用SPSS18.0统计软件，单因素分析用χ2检验，生存分析采用Kaplan－Meier曲线，生存时间的比较用Logrank法。

2 结果

2.1 XRCC1在肿瘤细胞中的表达 XRCC1均主要在细胞核内分布，一些肿瘤细胞的胞质也有表达，其在肿瘤细胞的表达率为55.6%(40/72)。见图1。

图1 免疫组化(HE，×400)

2.2 XRCC1表达与患者临床特征之间的关系 XRCC1表达与患者年龄、性别、组织学分型、癌栓无相关性(P＞0.05)，而与TNM分期及淋巴转移存在相关性(P＜0.05)。

2.3 XRCC1表达与胃癌Ⅱ、Ⅲ期患者化疗疗效的关系

XRCC1表达阴性患者中，平均生存期为(56.32±4.39)个月，中位生存期为52个月，3年生存率为71.9%(23/32)，5年生存率为34.4%(11/32);而XRCC1表达阳性的患者中，平均生存期为(40.42±2.88)个月，中位生存期为42.4个月，3年生存率为52.5%(21/40)，5年生存率为22.5%(9/40)。比较发现，XRCC1阴性表达患者疗效好于阳性表达患者，有显著性差异(χ2=0.756，P=0.038 4)。

3 讨论

奥沙利铂是继顺铂和卡铂之后的第三代铂类抗癌药，其药理学特点与其他铂类药物相似，均以DNA为靶点，阻止其复制及转录，造成细胞死亡。目前，临床医师应用以奥沙利铂为主导药物的FLO－FOX方案行胃癌患者术后辅助化疗，已是最常用的胃癌化疗方案之一，但不同个体对铂类药物敏感性差异很大，严重影响了铂类药物的临床疗效。影响铂类药物疗效的原因由多种因素组成，其中DNA损伤修复能力改变是影响铂类化疗药物疗效的重要分子基础〔6〕。DNA损伤修复最主要的修复形式之一即为碱基切除修复(BER)。

BER切除和替换由内源性化学物作用产生的DNA碱基损伤，XRCC1是其重要组成部分。研究发现，XRCC1基因相关位点突变导致的XRCC1基因多态性改变了其对DNA损伤修复的效能，从而影像铂类药物治疗的疗效〔7，8〕。但XRCC1表达与胃癌患者对铂类药物的敏感性及生存期之间关系的相关研究尚未见报道。本研究结果显示，XRCC1表达与不同年龄、性别、组织学分型之间无统计学差异，而与TNM分期及是否淋巴结转移差异有统计学意义。本实验XRCC1表达阴性患者化疗后有效率高于XRCC1表达阳性患者，XRCC1阴性表达患者的平均生存期、中位生存期、3年生存率、5年生存率均优于XRCC1阳性表达患者。提示XRCC1表达阴性患者从含铂方案化疗中受益程度大于XRCC1表达阳性患者。

总之，胃癌组织中的XRCC1表达水平与接受手术及术后奥沙利铂化疗患者的远期生存率密切相关，可作为术后胃癌生存预测的指标。早期检测胃癌组织中的XRCC1表达可能有助于个体化选择化疗药物，改善铂类化疗药物临床疗效不满意的现状。

1 Caldecott KW，Aoufouchi S，Johnson P，et al.XRCC1 polypeptide interacts with DNA polymerase bête and possibly poly(ADP－ribose)polymerase，and DNA ligase Ⅲ is a novel molecular nick－sensor in vitro〔J〕.Nucleic Acids Res，1996;24(22):4387－94.

2 Chung HH，Kim MK，Kim JW，et al.XRCC1 R399Q polymorphism is associated with response to platinum－based neoadjuvant chemotherapy in bulky cervical cancer〔J〕.Gynecol Oncol，2006;103(3):1031－7.

3 Giachino DF，Ghio P，Regazzoni S，et al.Prospective assessment of XPD Lys751Gln and XRCC1 Arg399Gln single nucleotide polymorphisms in lung cancer〔J〕.Clin Cancer Res，2007;13(10):2876－81.

4 Ruzzo A，Graziano F，Loupakis F，et al.Pharmacogenetic profiling in patients with advanced colorectal cancer treated with first－line FOL－FOX－4 chemotherapy〔J〕.J Clin Oncol，2007;25(10):1247－54.

5 Crnogorac－Jurcevic T，Efthimiou E，Nielsen T，et al.Expression profiling of microdissected pancreatic adenocarcinomas〔J〕.Oncogenelogy，2002;21(29):4587－94.

6 Rosel1 R，Taron M，O′Brate A.Predictive molecular markers in non－small cell lung cancer〔J〕.Curr Opin Oncol，2001;13(2):101－9.

7 Snh KW，Kim JH，Kimdo Y，et al.Which gene is a dominant predictor of response during FLOFOX chemotherapy for the treatment of metastatic colorectal cancer，the MTHFR or XRCC1 gene〔J〕.Ann Surg Oncol，2006;13(11):1379－85.

8 Liu B，Wei J，Zou Z，et al.Polymorphism of XRCC1 predicts overall survival of gastric cancer patients receiving Oxaliplatin－based chemotherapy in Chinese population〔J〕.Eur J Hum Genet，2007;15(10):1049－53.

R735.2;R362

A

1005-9202(2011)12-2166-02

1 辽河油田第二医院外科 2 辽宁医学院附属第一医院肿瘤科

马艳梅(1971－)，女，主管护师，主要从事胃肠道肿瘤化疗工作。

〔2011－02－28 收稿 2011－03－20 修回〕

(编辑 袁左鸣/徐 杰)