调肝止痛胶囊中挥发油的包合工艺研究

郑 琰 王 芳 谈 静 曾 倩

1.成都中医药大学附属医院药剂科，四川成都 610072；2.四川省中医药科学院药学研究所，四川成都 610041；3.成都中医药大学附属医院妇科，四川成都 610072

调肝止痛胶囊是由白芍、枳壳、乳香和没药等8味药组成的中药复方制剂，具有养血益肝、行气活血、祛瘀止痛的功效，在临床上用于治疗肝郁血瘀型痛经。方中枳壳、乳香和没药等3味药材含挥发油，且挥发油为本方的活性成分，具有镇痛作用。为减少挥发油在制剂和贮存中的挥发，提高药物稳定性，方便临床药物的使用，减少每日服药剂量，本研究对枳壳、乳香和没药提取挥发油，并用β-环糊精包合，以挥发油的包合率和收得率为考察指标，采用正交实验，对包合工艺条件进行了优选，现报道如下。

1 仪器与试药

JB-3型定时控温磁力搅拌器（上海雷磁新泾仪器有限公司）；JA2003电子天平（上海精密仪器有限公司）； DG/20-002台式干燥箱；β-环糊精（天津市博迪化工有限公司）；枳壳、乳香和没药购于四川新荷花中药饮片有限公司，经检验符合2010版《中国药典》一部规定；无水乙醇为分析纯。

2 方法与结果

2.1 挥发油的提取

枳壳、乳香和没药挥发油的提取采用单因素考察，以挥发油提取率为指标，考察浸泡、加水量、提取时间对提取效果的影响。按照《中国药典》规定的挥发油测定法甲法[1]进行试验。结合试验结果及生产实际，确定挥发油提取工艺的最佳方案为：加10倍量水，不浸泡，提取6 h。在此条件下，挥发油提取率为1.79%。

2.2 包合物的制备方法

采用饱和水溶液法包合：精密称取定量的β-环糊精，置具塞的锥形瓶中，加入适量蒸馏水，水浴加热使溶解，放冷至规定温度，于磁力加热搅拌器上恒温搅拌。用移液管量取挥发油1 mL，按1︰2比例用无水乙醇溶解稀释，将挥发油稀释液逐滴加入β-环糊精溶液中，加塞，恒温搅拌至规定时间，放冷，置冰箱中冷藏24 h，抽滤，用少量纯化水洗涤容器，抽干，以少量无水乙醇洗涤滤渣，在40℃下低温烘干，即得疏松白色包合物粉末。

2.3 包合物中实际含油量的测定

将制得的包合物置500 mL圆底烧瓶中，加蒸馏水200 mL，连接挥发油测定器，照《中国药典》挥发油测定法甲法[1]操作，读取挥发油量，计算包合物实际含油量。

2.4 挥发油空白回收率测定

精密量取挥发油1 mL，置500 mL圆底烧瓶中，加蒸馏水200 mL，水蒸气蒸馏后测定挥发油量，计算空白回收率，挥发油空白回收率=收集挥发油量/加入挥发油量×100%。试验回收的挥发油量为0.95 mL，则空白回收率为95.0%。

2.5 挥发油包合率和包合物收得率的计算

精密称定1 mL挥发油重为0.951 g，挥发油包合率=包合物实际含油量/（挥发油投入量×空白回收率）×100% ；包合物收得率=包合物实际重量/（β-环糊精投入量+挥发油投入量）×100%

2.6 包合工艺条件筛选

根据预试验及文献资料[2-3]，挥发油包合主要受β-环糊精与挥发油的比例、包合温度、包合时间3个因素的影响，故将其作为考察因素。以挥发油包合率、包合物收得率为评价指标，权重系数分别定为0.7和0.3，采用正交表L9（34）设计试验，计算挥发油包合物包合率、收得率，并进行综合评分（综合评分=0.7×包合率/最大包合率+0.3×收得率/最大收得率），确定最佳包合工艺。其因素水平安排见表1。试验方案及实验结果见表2。

表1 因素水平

表2 正交试验结果

2.7 包合工艺条件的确定

根据上述正交试验数据，采用SPSS 13.0软件进行方差综合分析，结果见表3。结果分析：由直观分析可知，影响包合工艺的因素顺序为：β-环糊精∶油比例＞包合温度＞包合时间，β-环糊精︰油比例对包合工艺影响最大。经方差分析，β-环糊精︰油比例对包合工艺有显著影响，包合温度和包合时间对包合工艺无显著性影响，可见最佳包合工艺为：A3B3C2，即β-环糊精︰油比例10︰1，包合温度60℃，包合时间2 h。

表3 方差分析结果

2.8 验证试验

按照所选最佳包合工艺，即β-环糊精︰油为10︰1，包合温度60℃，包合时间2 h，每次取挥发油1 mL，平行验证3批。结果3批工艺的包合率分别为97.68%、98.48%、95.96%，平均值为97.37%，RSD=1.32%；收得率分别为71.57%、74.50%、71.36%，平均值为72.48%，RSD=2.42%，可见该包合工艺稳定可行。

3 讨论

乳香、没药的成分主要为挥发油、树脂和树胶，具有活血，行气，止痛的功效，在成方制剂中大多以药粉直接入药。文献报道乳香没药为主要肝毒性药材，乳香没药不同部位中，挥发油毒性最低，且其挥发油具有镇痛作用[4-5]，用挥发油β-环糊精包合物替代生药粉入药，既能保证疗效又可降低毒性、减少临床日服药剂量，具有较好的应用前景。本研究采用双指标对挥发油的包合工艺进行评价，考虑到挥发油的包合率是衡量包合效果的重要指标，收得率次之，故进行正交试验综合评价时，包合率和收得率的综合评分权重系数分别定为0.7和0.3。优选包合工艺为：β-环糊精︰挥发油比例为10︰1，包合温度60℃，包合时间2 h。该条件下挥发油包合率和收得率稳定且高。调肝止痛胶囊为固体制剂，将挥发油制成β-环糊精包合物，使其粉末化后，再与浸膏粉及辅料成型，可减少挥发油在贮存过程中的氧化、变质及挥发，掩盖刺激性气味，提高药物的稳定性；该法操作简单，设备要求不高，结果可靠，便于工业化生产。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S].北京：中国医药科技出版社，2010：附录63.

[2] 于维萍，辛义周.乳香、没药挥发油β-CD包合物的实验研究[J].中国药房，2007，18（18）：1379-1380.

[3] 卢鹏伟，牛艳阳，李更生.制乳香、制没药挥发油β-环糊精包合工艺的研究[J].河南大学学报 （医学版），2008，27（2）：34-35.

[4] 郑杭生，冯年平，陈佳，等.乳香没药的提取工艺及其提取物的镇痛作用[J].中成药，2006，24（11）：956-959.

[5] 谈英，徐鑫，周昆，等.乳香没药及其提取物给药12周对大鼠肝毒性研究 [J].中国药物警戒，2010，7（4）：193-195.