火把花药材中不同部位雷公藤甲素的含量测定

王贤英 谢香菊 李胜容

重庆市中药研究院，重庆 400065

火把花学名昆明山海棠 (Tripterygium Hypoglaucum Hutch，THH)，又名粉背雷公藤、金刚藤等，是卫茅科雷公藤属落叶披散或蔓状灌木植物。火把花一名始载于《本草纲目》，李时珍集解曰:“生滇南者花红，呼为火把花。”《植物名实图考》称昆明山海棠，《滇南本草》称紫金皮，《中药大辞典》、《全国中草药汇编》、《中国有毒植物》等都有收载。我国昆明山海棠资源丰富，多集中于云南楚雄、红河、玉溪、昆明、四川德昌等地。关于火把花的药用部位还有许多争议，但上海市药品检验所1990年的调查表明，主要药用部位为根、根皮及茎枝［1］。

火把花的化学成份非常复杂，长期研究发现火把花含有生物碱类［如:雷公藤碱(wilfordie)、雷公藤次碱 (wilfori)等］、二萜类［如:雷公藤甲素 (Triptonide)等］、甙类、糖类、有机酸类 (如:齐墩果酸)、多糖、β－谷甾醇、酚性物质等多种化学成分，具有抗炎、抗肿瘤、抗生育等药理活性。火把花的功能主治为“祛风除湿，舒筋活络，清热解毒”。临床常用于治疗类风湿性关节炎、慢性肾炎、白血病、红斑狼疮、跌打劳伤、皮肤瘙痒等疾病，其疗效显著。

由于当前中药材资源越来越缺乏，为了控制药材质量，又要充分利用好药材资源，本实验采用HPLC法，不但对火把花的根、根皮、茎枝的主要化学成分雷公藤甲素含量进行了测定，而且对人们容易忽视的叶的化学成分雷公藤甲素含量也进行了测定。

1 仪器与试药

1.1 仪器 LC－2010A型高效液相色谱仪，Shimadzu CLASS－VP V6.12 SP4工作站 (日本岛津公司)，色谱柱Diamonsil(钻石)柱4.6mm×250mm，5μm(C18柱，迪马公司)，SK250LH超声仪 (上海科导超声仪器有限公司)，梅特勒－托利多AB265－S型电子分析天平。

1.2 试药 乙腈为色谱纯，甲醇为分析纯，水为超纯水，雷公藤甲素对照品 (中国药品生物制品检定所提供，批号:1518—200101)，火把花根 (去皮)、火把花根皮、火把花茎枝、火把花叶均采自四川德昌。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;雷公藤甲素:乙腈－水 (25:75)为流动相，流速1.0 ml/min，柱温为30℃，检测波长为220nm，进样量10μL。理论塔板数按雷公藤甲素峰计算，应不低于2000。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取干燥至恒重雷公藤甲素对照品适量，加甲醇:水 (60:40)制成每1ml含10μg的溶液，即得对照品溶液。

2.3 线性关系考察

精密称取雷公藤甲素对照品1.25mg于10ml容量瓶中，用甲醇:水 (60:40)溶解并稀释至刻度，摇匀;再精密吸取此浓度对照品溶液1.0 ml于10ml容量瓶中，用甲醇:水 (60∶40)溶液稀释至刻度，摇匀，经0.45?m滤膜滤过，即得浓度为0.0125mg/ml的雷公藤甲素对照品溶液，分别取该溶液 1、5、10、15、20、25、30μl于 HPLC仪，测定各色谱峰积分面积，以峰面积为纵坐标，雷公藤甲素进样量为横坐标，绘制标准曲线，并计算得回归方程。回归方程:A=1694825.6X+5865.6，r=0.9997。结果表明，雷公藤甲素在0.0125μg～0.3750μg范围内呈良好的线性关系。见图1。

2.4 精密度试验

分别精密吸取雷公藤甲素对照品溶液各10μl按上述色谱条件，反复进样6次，结果雷公藤甲素的RSD=1.0%，说明仪器精密度较好。

图1 雷公藤甲素HPLC图谱

2.5 稳定性试验

精密吸取新配制的雷公藤甲素对照品溶液各10μl，分别于1、2、4、5、6小时各进样一次，共进样5次，5次测定相对应峰的峰面积，RSD为0.8%，表明对照品溶液在6小时以内稳定。

2.6 供试品溶液制备方法

取药材样品适量，粉碎，过四号筛，取2g，精密称定，加甲醇50ml，超声1小时，滤过，残渣用甲醇洗涤2次，每次10 ml，回收甲醇至约1～2ml，残留物用甲醇约3ml溶解，上中性氧化铝柱 (10g，μ1.5cm，L4～5cm)，用丙酮60ml洗脱，收集丙酮洗脱液并回收至干，残留物加甲醇:水 (60:40)溶液适量使溶解并定容至5ml，摇匀，过0.45μm微孔滤膜，即得。见图1。

2.8 供试品稳定性试验

精密吸取新配制的供试品溶液10μl［样品批号:火把花根 (去皮)］，分别于0、1、2、3、4小时进样一次进行测定，计算雷公藤甲素含量，RSD为1.7%，表明样品供试品4小时以内稳定。

2.9 重现性试验

取同一火把花根 (去皮)各5份，分别研成细粉，按照供试品制备方法各自制备供试品溶液，取各供试品溶液10μl，并按上述色谱条件进行测定，其五次测定结果的雷公藤甲素RSD为0.8%，表明其重现性较好。

2.10 回收率试验

取火把花根 (去皮)粉 (含量为22.67μg/g)(过四号筛)适量，分别称取约2g，精密称定9份，分别精密加入雷公藤甲素对照品 (浓度为12.5μg/ml)2、4、6ml各3份，按照供试品制备方法“雷公藤甲素”制备供试品溶液，并按上述色谱条件测定，计算回收率，结果见表1，平均回收率为97.83%，RSD为2.30%。本方法回收率较好，方法可行。

2.11 火把花的根皮、根、茎枝、叶中的雷公藤甲素含量测定

分别称取不同部位的药材样品，粉碎，过四号筛，各取约2g，精密称定，按照样品供试品制备方法制备供试品溶液，采用HPLC外标一点法，分别精密吸取对照品溶液10μl与各供试品溶液10μl，依正文色谱条件测定，计算本品中雷公藤甲素的含量。

表1 火把花根 (去皮)中雷公藤甲素回收率试验测定结果

表2 火把花药材中不同部位的雷公藤甲素含量测定结果

3 讨论

3.1 参照雷公藤总萜片国家标准 (Z20026007)中“雷公藤甲素”HPLC测定和相关文献报道［2］，选择220nm作为测定雷公藤甲素的检测波长，流动相为乙腈:水 (25∶75)。

3.2 火把花的化学成份非常复杂，其中有的成分与雷公藤相似，仅含量有差别，而有的仅见于火把花。从以上测定结果可以看出，同种火把花药材中，雷公藤甲素的含量:皮＞根＞茎＞叶含量。火把花植物是野生的，目前还没有种植，为了保护火把花药材资源，要充分利用火把花各不同药用部位的成分含量，物尽其用。因此对该植物进行更深入的开发研究是很有必要的。

［1］杨小红，张伟程，陈香．火把花根的研究概况［J］．中医药临床杂志，2007，19(3):315－317．

［2］李胜容，王贤英．HPLC法测定昆明山海棠片中雷公藤甲素的含量［J］．药物分析杂志，2008，28(7):1150－1152．