花卉植物组织培养试管苗出瓶种植技术

□唐雪松 杨志娟

近年来植物组织培养技术取得了飞跃的发展，对生产的促进作用也日益明显，并逐渐向更广阔的领域延伸。现在，几乎所有的植物，其器官、组织或细胞都能在适当条件下离体培养成功。几十年来，在发展和应用这项技术上，许多国家竞相投资，研究十分活跃，取得了丰硕的成果。

植物组织培养一般分为5个阶段：无菌培养的建立阶段；外植体生长和分化诱导阶段；中间繁殖体的增殖阶段；壮苗与生根阶段；试管苗出瓶种植和苗期管理阶段。目前很多研究主要偏重于对第二、三阶段培养基配方的研究，而对最后一个阶段，即试管苗出瓶种植和苗期管理阶段研究较少。其实，这个阶段非常重要，如果该阶段技术掌握不好，试管苗的成活率低，很可能前功尽弃，造成人力物力的巨大浪费。

试管苗是在无菌、完全营养供给、适宜光照、适宜温度和100%相对湿度环境中生长的，并有适宜的植物激素调节生长代谢。一旦出瓶种植，生长环境发生了剧烈变化，如温度不再像培养室中那样适宜，湿度也不可能轻易能保持100%等，因而刚出瓶的幼苗是非常娇嫩的，稍不慎便会造成大量死苗。那么，怎样提高试管苗的成活率呢？通过对蝴蝶兰、文心兰、八仙花、大岩桐、一品红、双色茉莉、盾叶薯蓣等数十种试管苗大量移植比较试验，笔者认为，要保证较高的试管苗移植成活率，必须作好以下几点：

一、必须选择适于移栽的优质试管苗，作好植物的壮苗生根培养

要提高试管苗移栽成活率，选择优质健壮的试管苗是前提。移栽的试管苗应该是粗壮的，茎基部一般呈黄绿色，最好有较发达的根系，如果是木本植物，还应略木质化，并且根系与茎的维管束相通，而不是从愈伤组织中间发生。要达到这些要求，必须作好植物的壮苗生根培养。

1.在增殖培养中选择已分化出嫩叶的小苗，分离成单苗或小苗丛转移至壮苗生根培养基中 以使小苗停止增殖，迅速生根长高，便于移栽，一般2～4周即可生根，长出洁白的正常短根。大多数植物只需1次培养(如大岩桐、食用仙人掌、非洲菊等)，在较少情况下(如文心兰、盾叶薯蓣等)，由于残留在小苗里的细胞分裂素较多，影响生根，就必须转接1～2次生根培养基。还有一些生长细弱的植物(如康乃馨、蝴蝶兰等)在生根培养前要增加壮苗的步骤，使苗长粗壮，便于诱导生根和以后移植成活，采用的培养基一般为不加任何激素的1/2MS培养基。

2.壮苗生根培养基多采用1/2或1/4量的MS培养基 全部去掉或仅用很低浓度的细胞分裂素，并加入适量的生长素（一般用NAA），以促进生根。对一些根系较细，同时又是丛生的植物（如秋海棠类、竹芋类等），可以考虑用“液体浅层静置培养”。这种培养基的优点较多：容易清洗，省时省工，而且培养苗粗壮、根系发达，还可以避免移栽和清洗时对根系的损害，同时省去了琼脂，成本降低了70%。我们进行铁十字秋海棠生根培养（培养基：1/2MS+NAA 0.1～0.2+活性炭0.1）时采用了该方法，效果很好。

3.减少培养基中糖的含量和提高光照强度 一般糖约减少一半，光照强度增加3～5倍，可增强小苗的光合作用，减少对异养条件的依赖，同时增加试管苗的抗逆能力。虽然有时组培苗生长缓慢，但实践证明，其成活率较高。通过壮苗生根培养，小苗已生根成为完整的再生植株，或者虽未生根但已长粗壮，适宜无根扦插，这时便可出瓶种植。

二、试管苗移栽前应进行炼苗

试管苗在培养室中无论营养、温度、湿度和光照等条件都是最适宜的，如果马上出瓶移栽，环境变化太快，试管苗很可能不适应环境而夭折。所以在出瓶移栽前最好进行3～15天的炼苗，让试管苗有个逐渐适应的过程。具体做法是：在移栽前应将选好的试管苗连同培养瓶一起移出培养室，不打开瓶塞，放在洁净明亮通风良好的室内1周左右，在保证湿度和营养的情况下让小苗在瓶内适应外界环境，然后再取下瓶塞进行炼苗，一般持续2～3天后进行移栽。

三、选择适于试管苗生长的种植介质

试管苗移栽成活与否，种植介质的选择非常重要。种植介质有很多种类，但并非所有种类都适用。适于试管苗生长的种植介质必须符合以下要求：①疏松通气；②适宜的保水性；③容易灭菌处理；④不利于杂菌滋生。其中最关键的一点就是种植介质必须疏松通气，否则试管苗根部极易腐烂，造成死苗。所以种植介质常用的有：蛭石（粗粒状，过细的蛭石粉不适宜）、珍珠岩、粗沙、炉灰渣、锯木屑、苔藓卷柏等，可以单用（大多数介质），也可以一定的比例混用，最常用的是蛭石和珍珠岩混用（大岩桐、非洲菊、盾叶薯蓣等都适合）。移栽时可依据经验选择适宜的种植介质，或做几组比较实验，选择出最适宜的一种。比如，文心兰种植介质我们选择了6种不同的种植介质(蛭石、珍珠岩、苔藓、粗沙、朽木屑和纸箱屑)，结果以苔藓和朽木屑效果较好。

关于种植介质除了考虑物理结构外，还要注意调节pH值，如山茶花一般要求pH值5.4左右。不同植物应相应调节种植介质的pH值，以利成活，但大部分植物要求pH值中性偏酸。

四、防止菌类滋生

试管苗在培养瓶中的环境是完全无菌的，移栽出来后难以保证无菌条件，但应尽量不使菌类大量滋生。试管苗成活率低的很大原因就是杂菌 (主要是细菌和真菌)污染。那么怎样降低杂菌对试管苗的影响呢？我认为应该做好以下几点：

1.试管苗出瓶时，要仔细洗去附着其上的培养基 因为培养基营养丰富，最易滋生杂菌。同时清洗时要细心，尽量少伤苗，伤口过多或根损伤过多是造成死苗的原因之一。因为创口容易滋生细菌，所以清洗时一定要仔细，不能用水管直接放水冲洗。最好用适温清水漂洗，水温不能太低，手感舒服即可。

2.分苗时，可适当分离小丛，不必要求都分成单苗 可待移栽成活后，再逐次分植成单苗。

3.试管苗清洗干净后，最好根部在低浓度的杀菌剂(如1/500的多菌灵)中浸上1～2秒 然后在阴处进行晾苗，一般应晾苗1～2小时，小苗基本晾干后才可进行移栽。

4.保证栽培环境干净、杂菌少 试管苗移栽前应对种植介质进行灭菌处理，最好当然是高压灭菌，但费力费时。如果有条件的可以利用锅炉房蒸汽进行灭菌，无条件的也可进行化学灭菌。我们试过KmnO4+CH2HO对朽木屑进行灭菌处理，效果较好。

5.试管苗移栽后应立即将浓度为800～1000倍液的灭菌剂(多菌灵、托布津、百菌清等)用喷雾器进行喷淋 最好每7～10天喷1次，防止菌类滋生对试管苗的影响。

五、适宜的水分供应

移栽小苗成活与否，水分条件非常重要，对某些植物来说(如文心兰、八仙花等)甚至是成败的关键。在培养瓶中，由于湿度大(基本达到100%)，所以瓶中小苗防止水分散失的角质层等几乎全无，根系也不发达，所以移栽小苗的水分供给就必须加强。当然也不能太多，如果浇水过多，又会造成小苗根部积水，根部通气不畅，造成烂根。为了解决这个矛盾，只有提高移栽小苗周围的空气湿度，一般应达到90%左右，使叶部的蒸腾减少，尽量接近培养瓶中条件，使小苗始终保持挺拔的状态。可采用的方法很多，如果用苗盘种植，可加盖塑料薄膜，或罩上玻璃瓶即可，并不定期用喷雾器间歇喷雾。如果在温室内苗床上种植，湿度计是必须的，并安装人工喷雾设备来保持叶面的空气湿度。大多数植物必须在高湿度环境中才能顺利成活，当然也有少部分植物例外(如食用仙人掌对水分条件要求不高)。在个别实验材料比较宝贵的情况下，最好先将小苗放置在湿滤纸上，令其幼根发生丰富的根毛后，使用灭菌剂处理后再移栽到消毒的介质中，以加强试管苗对水分的利用，从而提高成活率。

六、注意掌握移栽季节和适当的光温条件

试管苗在培养瓶中是全营养的，有丰富的糖作碳源，基本上属异养。而出瓶后要靠自己进行光合作用维持生存，因此光照不能太弱，但也不能太强，最好避免直射光，用强度较高的漫射光（强度约在1500～5000lx之间）。因为光太强，会增强植物的蒸腾作用，使水分平衡矛盾变尖锐，同时会灼伤娇嫩的叶片，破坏叶绿素，使叶片失绿发黄，小苗不易成活。根据植物种类不同，苗的壮弱等因素考虑光的强度，适当遮阴，以利小苗成活，一般中午太阳光照较强时最好用遮阴网进行遮阴。

在培养室中，温度一般是恒定的(大多数植物要求25～27℃)，试管苗生长良好，移栽出瓶后，为了保证试管苗的成活率，温度条件也需考虑。根据植物种类不同，适宜温度也有差别，喜温植物(如竹芋类)，以25℃左右为宜；喜凉植物(如菊花)，以20℃左右为宜。温度不能太高，也不能太低，太高会造成蒸腾加强，影响水分平衡，同时容易使菌类滋生；温度太低又会使试管苗生长迟缓，不易成活。能控制温度的温室大棚成本太高，所以移栽季节的选择非常重要。一般以春秋季节为好，冬天也可以 (可以用塑料薄膜覆盖提高温度)，夏天一般不进行试管苗的移栽。

试管苗移栽成功与否，前10天是关键，这段时间要多观察，发现问题要及时处理。只要10天过去后，试管苗生长正常，基本上即可成活。但后期管理也不能懈怠，一般两周后要开始施肥，可以参照无土栽培的方法自配营养液，也可直接用l/2MS培养基大量元素的水溶液，用喷雾器进行喷淋，1周1次。如果生长正常，约15～20天后新根生长，幼芽萌发，试管苗即可判断成活。

综上所述，只要注意了试管苗本身质量，同时控制好了移栽的环境条件，即维持好水分平衡、选择好种植介质、防止了杂菌污染和创造适宜的光、温条件，试管苗成活率一般能达到90%以上。但不要所有植物试管苗的移栽都采用一个模式，毕竟植物种类不同，对生长的要求也不一样，必须要有科学的态度。在一般原则下，根据植物特点，仔细安排几种不同的处理试验，很快就能掌握移栽的关键。所以，我认为管理人员的责任心和事业心是最重要的，因为试管苗的移栽管理并不复杂，只要多实践，多动脑筋，用心管理，试管苗的成活并不是困难的事。

（通联：成都农业科技职业学院 温江区611130）