蒿芩清胆汤对阳黄证大鼠β-G、UDPGT的影响*

任存霞

内蒙古医学院中医学院（内蒙古呼和浩特 010059）

蒿芩清胆汤对阳黄证大鼠β-G、UDPGT的影响*

任存霞

内蒙古医学院中医学院（内蒙古呼和浩特 010059）

目的 探讨复方蒿芩清胆汤对阳黄证黄疸动物模型肝细胞摄取、转化、排泄胆红素的影响，揭示其利胆退黄的机制。方法 在采用异硫氰酸-1-萘酯（ANIT）灌胃诱导大鼠肝损伤的基础上，结合中医高脂高糖饮食加湿热环境因素，建立中医阳黄证黄疸动物模型。观察大鼠一般生物学状态、β-葡萄糖醛酸酶含量、尿苷二磷酸葡萄糖醛酸基转移酶（UDPGT）活性、D-木糖吸收率的变化，并予复方蒿芩清胆汤治疗，探讨其对胆红素代谢的影响。结果 阳黄证动物模型符合黄疸特点，β-葡萄糖醛酸酶含量升高、UDPGT活性及D-木糖含量下降，肝病理组织学改变符合肝内胆汁淤积黄疸的病理改变。经中药蒿芩清胆汤治疗后，各指标明显改善。结论 蒿芩清胆汤保肝利胆退黄作用机理可能与降低肝细胞β-葡萄糖醛酸酶含量、诱导UDPGT活性、促进胆红素排泄，从而改善胆红素代谢有关。

黄疸 阳黄证 湿热证 蒿芩清胆汤

蒿芩清胆汤源自《重订通俗伤寒论》，广泛用于五脏之湿热或痰湿为患诸证，如湿温病、黄疸、呕逆、淋证、眩晕、盗汗等。有文献报道用本方治疗肝细胞性黄疸等疾病［1］。前期实验研究表明，本方具有利胆抗急性胆道感染、降低血清转氨酶、胆红素，保肝护肝的功效［2］。本课题运用病证结合的方法，建立符合中医病因病机理论的阳黄证黄疸动物模型，通过观察模型动物β-葡萄糖醛酸酶（β-G）含量，尿苷二磷酸葡萄糖醛酸基转移酶（（UDPGT）活性，D-木糖吸收率的变化，进一步探索中药利胆退黄的机制。

1 材料与方法

1.1 药物 蒿芩清胆汤水煎液（质量浓度1g/mL，组成：青蒿6g，竹茹 9g，半夏 5g，赤茯苓 9g，黄芩 9g，枳壳 5g，陈皮 5g，滑石 6g，青黛2g，甘草1g）［3］。所有药物均购自内蒙古中蒙医院中药房，并经内蒙古医学院药理教研室鉴定。

1.2 动物 wistar大鼠50只，雌雄各半，体质量180～220g，由内蒙古大学实验动物研究中心提供，清洁级，编号：2009-0001。

1.3 试剂 异硫氰酸-1-萘酯（ANIT），由北京通县育才精细化工厂生产。普通食用色拉油，经高温灭菌处理。β-G测试盒，购于福建省中外合资蓝波生物技术研究所。D-木糖测试盒，购于南京建成生物研究所。UDPGT采用Black法，UDPGA、洋地黄皂苷，购于美国Sigma公司北京代理公司-北京舒伯伟公司；2-戊酮、胆红素为中生北控科技股份有限公司出品。考马斯亮兰测试盒，购于南京建成生物工程研究所。

1.4 分组与造模 将大鼠分为正常对照组、模型对照组、湿热模型组、阳黄模型组及中药治疗组，每组10只。 阳黄证造模阶段时处长夏季节，湿热证造模21d，其中，中药治疗组预防性给药14d。黄疸造模48h，取材2d。正常对照组每日予0.9%氯化钠注射液2mL/100g灌胃。模型对照组第1～21日予0.9%氯化钠注射液2mL/100g灌胃，第22日予0.5%ANIT灌胃1次 （将ANIT溶于色拉油中）。每日湿热模型组、阳黄模型组、中药治疗组放于湿热造模箱内 （造模箱内温度28～32℃，相对湿度RH＞92% ）。每日上午喂饲1∶1的50%葡萄糖和猪油脂混合液2mL/100g灌胃。第8日起，中药治疗组每日下午给100%蒿芩清胆汤2mL/100g灌胃。第22日，阳黄模型组、中药治疗组均予0.5%ANIT灌胃1次（将ANIT溶于色拉油中）。以上各组大鼠在实验过程中均不限饮食。

1.5 标本采集与检测 第24日处死大鼠，腹主动脉取血离心，无菌操作取肝脏，固定于1∶9的40%甲醛和95%酒精混合液中，HE染色法作病理学检测。β-G、D-木糖采用比色法测定，具体操作按照测试盒说明书进行；UDPGT测定采用Black法［4］，蛋白测定采用考马斯亮兰法，按说明书操作。

2 结 果

2.1 大鼠一般情况 造模后，阳黄模型组大鼠巩膜黄染、皮肤（尾、耳背、肛周、口周）黄染，大鼠体质量明显下降，肛温升高，被毛松散无光泽，反应迟钝，饮水量增多，大便呈条状稀便，颜色呈浅黄色，符合阳黄证特点。

2.2 各组大鼠β-G含量的测定 见表1。模型对照组、阳黄模型组β-G含量与正常对照组比较明显升高（P＜0.01），其中阳黄模型组更甚；湿热模型组较正常对照组也有升高，但无统计学意义；中药治疗组与阳黄模型组相比，β-G含量下降（P＜0.01），与正常对照组无显著差异。

表1 各组大鼠 β-G、UDPGT、D-木糖水平比较 （±s）

表1 各组大鼠 β-G、UDPGT、D-木糖水平比较 （±s）

与正常对照组比较,*P＜0.05，**P＜0.01;与阳黄模型组比较,△P＜0.01。

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2.3 各组大鼠UDPGT含量比较 见表1。模型对照组、湿热模型组、阳黄模型组UDPGT活性与正常对照组比较明显降低（P＜0.01），其中阳黄模型组最甚；中药治疗组数值回升，与阳黄模型组数值相比，有显著差异（P＜0.01）。

2.4 各组大鼠血清D-木糖含量的测定 见表1。模型对照组、阳黄模型组D-木糖含量与正常对照组比较明显降低，其中阳黄模型组更为明显；湿热模型组较正常对照组也有降低，但无显著差异；中药治疗组数值回升，与阳黄模型组相比，有显著差异（P＜0.01），而与正常对照组无显著差异。

2.5 各组大鼠肝脏病理学变化 光镜观察可见，阳黄模型组肝脏可见灶状或小片状肝细胞坏死，细胞肿大，部分病例肝细胞浆疏松呈空网状，部分变圆，胞浆清亮呈气球样。肝细胞索较拥挤，部分区域肝窦受压变窄，呈狭小裂隙状，其内枯否细胞增生、肿大。中央静脉扩张，汇管区可见淋巴细胞浸润，小叶间静脉扩张。湿热模型组肝脏病理改变不明显，肝细胞可见单核细胞和淋巴细胞浸润。模型对照组淤胆明显，炎性损害程度轻。中药治疗组炎性损害程度、肝细胞坏死程度均减轻，无淤胆。中药治疗组虽有不同程度肝细胞破坏，炎细胞浸润，淤胆等肝损伤病变，但与阳黄模型组比较，损伤程度明显减轻，只1例淤胆。

图1 各组肝脏组织病理学观察（×400）

3 讨 论

黄疸是肝内外各种疾病所引起的胆红素代谢障碍的综合性病理过程。血清中胆红素含量升高，引起巩膜、皮肤、黏膜、某些体液和其他组织黄染现象。黄疸是中医临床常见的一个独立病证，临床以身黄、目黄、小便黄为特征。黄疸根据临床表现及寒热属性分为阳黄、阴黄。阳黄证属实证，病势急，病情较轻，病程短，预后良好，病机为湿热阻滞，熏蒸肝胆，病位主要在胆、胃。中医阳黄包括的范围比较广泛，诸如急性病毒性肝炎、急性胆囊炎、阻塞性黄疸等以黄疸为主症的疾病［6］。

β-G是一种溶酶体内酸性水解酶，在肝脏中特别丰富，其能分解胆红素-葡萄糖醛酸酶酯的酯链，使肠道的直接胆红素转化为未结合胆红素，后者是一种脂溶性的非极性物质，易于在小肠重吸收进入肠肝循环，所以β-G在增加胆红素肠肝循环方面起重要作用。研究证实，当肝细胞受损或有炎症时β-G分泌量显著增加［5］。其活性高低反映肝细胞损伤程度和再生情况。从实验结果来推断，蒿芩清胆汤能治疗阳黄证可能与抑制该酶活性有关。

测定D-木糖是监测肠吸收功能的重要手段之一。阳黄状态下，D-木糖含量降低，提示小肠吸收功能减弱，胆红素排泄受到阻碍，而经蒿芩清胆汤治疗后，吸收率提高，提示蒿芩清胆汤退黄机制之一可能是通过促进胆红素排泄而实现的。

UDPGT是体内催化胆红素结合反应的主要肝微粒体酶，主要存在于肝细胞的内质网膜中。胆红素与Y蛋白复合物被运至滑面内质网，在UDPGT的作用下，生成葡萄糖醛酸胆红素-结合胆红素，结合胆红素水溶性增加，随胆汁排入小肠。一些药物可以诱导提高UDPGT活性。本实验结果表明，模型对照组、湿热模型组、阳黄模型组，尤其是阳黄模型组UDPGT活性下降明显，而经蒿芩清胆汤治疗后其活性提高，虽然与正常组比还有差异，但与阳黄组比较已显示出显著差异，提示蒿芩清胆汤的利胆退黄作用可能与其诱导UDPGT活性有关，蒿芩清胆汤促进了胆红素的葡萄糖醛酸化，使结合胆红素生成增加，从而促进胆红素代谢。

蒿芩清胆汤即可和解少阳，清利胆腑，又可分消走泄，宣通三焦气机，使痰湿之邪尽除。蒿芩清胆汤方含温胆汤、碧玉散，既可调理中焦脾胃，又兼及上下，上能宣展肺气，下能通利小便，故为治疗阳黄证首选。临床研究证实蒿芩清胆汤是治疗肝细胞性黄疸的有效方剂，且在护肝降酶方面优于思美泰，在退黄方面与思美泰相当，疗效确切，服用安全，价格低廉［1］。药理研究表明蒿芩清胆汤能够退黄可能与以下机制有关：（1）护肝及降酶作用［2］；（2）促进胆汁分泌作用［7］；（3）利尿作用［7］；（4）调理胃肠功能［8］。而本实验运用病证结合的方法，建立符合传统中医病因病机理论的阳黄证黄疸动物模型，检测了中药复方蒿芩清胆汤对模型动物胆红素代谢重要环节的影响，可以看出各组动物β-G、UDPGT、D-木糖含量的不同变化。

［1］衷学军，李平.蒿芩清胆汤加减治疗肝细胞性黄疸的临床观察［J］.井冈山学院学报，2006，27（4）：118-119.

［2］任存霞，谭亚琴，钱占红.蒿芩清胆汤对家兔实验性急性胆道感染疗效观察［J］.中药药理与临床，2005，21（6）：3-5.

［3］谢鸣.方剂学［M］.北京：人民卫生出版社，2005：125.

［4］黎汉忠.茵陈对大鼠肝UDP-葡萄糖醛酸酶活性的影响 ［J］.中成药，2001，23（1）：45.

［5］Ho K J.Biliary electrolytes and enzymes in patients with and without gallstones［J］.Dig Dis Sci，1996，41（12）：2409-2416.

［6］陈爱萍，陈自强，谢立芹.阳黄症治探讨［J］.中国实验方剂学杂志，2003，10（增刊 1）：19-20.

［7］任存霞，钱占红，莫日根.蒿芩清胆汤利胆、利尿作用研究［J］.中药药理与临床，2006，22（2）：11－12.

［8］钱占红，任存霞，莫日根.蒿芩清胆汤的胃肠作用［J］.中药药理与临床，2006，22（6）：6-7.

R285.5

A

1004-745X（2011）08-1252-02

内蒙古自治区自然科学基金课题（2009MS1167）

2011-03-29）