铁椆与红菇提取液抑菌作用的比较

刘英姿，甘耀坤，陈旭健，明庭会，曾献莹

(1.玉林师范学院化学与生物系，广西 玉林 537000；2.广西师范大学生命科学学院，广西 桂林 541004)

铁椆与红菇提取液抑菌作用的比较

刘英姿1,2，甘耀坤1,2，陈旭健1，明庭会1，曾献莹1

(1.玉林师范学院化学与生物系，广西 玉林 537000；2.广西师范大学生命科学学院，广西 桂林 541004)

研究铁椆树根、铁椆果仁与红菇子实体的抑菌效果。以80%乙醇为提取剂，运用超声波技术分别制备铁椆树根、铁椆果仁、红菇子实体提取液，测定它们在一定质量浓度范围内对大肠杆菌(Escherichia coli)、藤黄微球菌(Micrococcus lueus)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、产气气杆菌(Aerobacter aerogenns)、卡尔伯斯酵母(Karlperth yeast)、阿达青霉(Penicillium adametzi Zaleski)6种供试菌种的抑菌作用，并对其大小进行比较。结果发现：在测试质量浓度范围内，3种测试提取液对大肠杆菌、藤黄微球菌、卡尔伯斯酵母均有抑制作用，其中对大肠杆菌、藤黄微球菌抑制作用比较明显，且随质量浓度升高抑菌作用增强；抑菌效果为铁椆树根>铁椆果仁>红菇子实体。研究表明，铁椆树根、铁椆果仁和红菇子实体3种提取液对不同菌种的抑菌作用有一定的选择性，抑菌效果顺序为铁椆树根最好、铁椆果仁次之，且抑菌效果在2.0g/mL质量浓度条件下较好。

铁椆；红菇；超声波提取；抑菌作用

红菇(Russula)又名美丽红菇，鳞盖红菇，营养丰富，鲜美可口，具有补血、滋阴、清凉解毒之功效，是一种野生名贵珍稀食用菌[1]。铁椆(Cyclobalanopsis glauca)又名青冈栎、青栲、铁栎，是红菇的主要共生树种，其种子含淀粉；树皮、壳斗含鞣质；种仁可用于止渴，止痢疾，破恶血，健行；树皮有止产妇流血的功效；嫩叶可以治疗臁疮等[2-3]。近年来，不少学者研究了红菇的抗菌、抗氧化、抗运动性疲劳作用和红菇对血糖血脂的影响[4-7]，也对红菇的共生树种——铁椆的抗氧化、抗运动性疲劳作用进行了探讨[8-9]，了解到红菇和铁椆具有多种抗性机能且有相依性，但铁椆是否具有抑菌机能？它和红菇的抑菌作用有何异同？目前尚未见报道。本实验拟采用超声波技术分别制备铁椆树根、铁椆果仁与红菇子实体提取液，测定它们在一定的质量浓度范围内对大肠杆菌(Escherichia coli)、藤黄微球菌(Micrococcus lueus)，金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、产气气杆菌(Aerobacter aerogenns)、卡尔伯斯酵母(Karlperth yeast)、阿达青霉(Penicillium adametzi Zaleski)6种供试菌种的抑菌作用，并对其大小进行比较，探讨铁椆与红菇在抑菌方面的利用价值，为天然抑菌药物的开发提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 材料

红菇子实体和铁椆树根、果仁由广西容县自良乡红菇基地提供。

1.2 供试菌种及培养基

1)细菌：大肠杆菌(Escherichia coli)、藤黄微球菌(Micrococcus lueus)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、产气气杆菌(Aerobacter aerogenns)；2)酵母菌：卡尔伯斯酵母(Karlperth yeast)；3)霉菌：阿达青霉(Penicillium adametzi Zaleski)，由玉林师范学院化学与生物系微生物学实验室提供。

参照凌建亚等[10]的方法配制不同菌种培养基：1)葡萄糖-酵母汁-蛋白胨培养基，用于培养酵母菌；2)牛肉膏-蛋白胨培养基，用于培养细菌；3)沙氏琼脂培养基，用于培养霉菌。

1.3 抑菌提取液的制备

将红菇子实体和铁椆树根、果仁洗净、烘干；然后分别使用万能粉碎机粉碎得粉末；分别称取一定量的粉末，加入80%乙醇溶剂，冰水浴超声波提取[4]，离心(4000r/min，10min)后的上清液经蒸发浓缩成一定浓度的粗提液；再根据需要分别将粗提液于80℃条件下蒸发浓缩成质量浓度梯度为0.5、1.0、1.5、2.0、3.0、6.0g/mL的红菇、铁椆树根、果仁提取液，灭菌后置于4℃冰箱中保存备用。

1.4 方法

1.4.1 不同浓度的红菇子实体和铁椆树根、果仁提取液对不同菌种抑制作用的测定

参照陆志科等[11]的方法并稍作改动。以80%乙醇和无菌的蒸馏水作对照(CK)，分别记为CK1和CK2。以红菇子实体提取液为例，选择质量浓度为0.5、1.0、1.5、2.0g/mL 4种梯度提取液，将灭菌并干燥的滤纸片(直径1.0cm)分别浸入这4种梯度质量浓度提取液中，浸透(一般需浸泡5h以上)。用无菌镊子将浸好的滤纸片夹起并分别贴在已制备好的接种培养基平板上，同时贴空白对照滤纸片，贴好滤纸片的平板置恒温培养箱中培养。再分别用铁椆树根和果仁的提取液重复以上步骤。细菌于35～37℃培养18～24h，霉菌、酵母菌置于28℃条件下培养44～48h。

1.4.2 1.0g/mL的红菇子实体和铁椆树根、果仁提取液对大肠杆菌抑制作用的比较

将灭菌并干燥的滤纸片(直径1.0cm)分别浸入1.0g/mL的红菇子实体和铁椆树根、果仁提取液中，浸透(一般需浸泡5h以上)。用无菌镊子将浸好的滤纸片夹起并贴在已制备好的接种培养基平板上，同时贴上80%乙醇和无菌的蒸馏水空白对照滤纸片。贴好滤纸片的平板置恒温培养箱中培养，于35～37℃培养18～24h。

1.4.3 琼脂稀释法测定提取液最小抑菌浓度(MIC)

根据消毒技术规范(2002年版)[12]，在无菌超净工作台上，用灭菌的移液器吸取不同质量浓度的3种测试提取液0.3mL分别加入到无菌培养皿中，倒入约20mL冷却至45℃左右的培养基，混合均匀。待培养基冷却凝固后，用灭菌的移液器吸取0.01mL(含菌数约105个/mL)的菌悬液分别加入到上述平板培养基中，用涂布棒涂布均匀。每个平板做3个重复。将细菌于37℃恒温培养24h、霉菌和酵母菌于28℃恒温培养48h后进行观察。

2 结果与分析

2.1 不同浓度的红菇子实体、铁椆树根、果仁提取液对不同菌种的抑制作用

表1 不同质量浓度提取液对不同菌种的抑菌圈直径Table 1 Antibacterial ring diameters of extracts from Russula and Cyclobalanopsis glauca with various concentrations cm

从表1可以看出，红菇子实体、铁椆树根、果仁3种测试提取液在质量浓度0.5、1.0、1.5、2.0g/mL条件下，对大肠杆菌和藤黄微球菌的抑制作用较明显，对卡尔伯斯酵母的抑制作用次之，且3种测试提取液的抑菌圈随着其质量浓度的升高而变大，而对金黄色葡萄球菌、产气气杆菌和阿达青霉没有抑制作用。

2.2 1.0g/mL的红菇子实体和铁椆树根、果仁提取液对大肠杆菌的抑制作用

图1 1.0g/mL的红菇子实体和铁椆树根、果仁提取液对大肠杆菌的抑制作用Fig.1 Bacteriostatic effects of extracts from Russula and Cyclobalanopsis glauca roots and nut at a concentration of 1.0 g/mL on E. coli in comparison with sterile distilled water and 80% ethanol

由图1可知，当提取液的质量浓度为1.0g/mL时，3种测试提取液对大肠杆菌均有抑菌效果，从其抑菌圈直径的大小来看，铁椆树根提取液＞铁椆果仁提取液＞红菇子实体提取液。

2.3 琼脂稀释法测定提取液最小抑菌浓度(MIC)结果

表2 不同材料、不同质量浓度的提取液最小抑菌浓度的测定结果Table 2 Minimum inhibitory concentrations of extracts from Russula and Cyclobalanopsis glauca roots and nut at various concentrations

从表2可以看出，红菇子实体对大肠杆菌的最小抑菌浓度为0.5g/mL，对藤黄微球菌的最小抑菌浓度为1.0g/mL，对卡尔伯斯酵母的最小抑菌浓度为3.0g/mL；铁椆树根对大肠杆菌的最小抑菌浓度为0.5g/mL，对藤黄微球菌的最小抑菌浓度为1.0g/mL，对卡尔伯斯酵母的最小抑菌浓度为2.0g/mL；铁椆树果仁对大肠杆菌和藤黄微球菌的最小抑菌浓度都为0.5g/mL，对卡尔伯斯酵母的最小抑菌浓度为1.5g/mL。总体上看，对不同菌种而言，最小抑菌浓度为大肠杆菌、藤黄微球菌的较小，卡尔伯斯酵母的较大；对不同的提取液而言，最小抑菌浓度为：铁椆果仁＜铁椆树根＜红菇子实体。

3 结 论

在滤纸圆片测试培养中，抑菌效果为铁椆树根提取液>铁椆果仁提取液＞红菇子实体提取液；在琼脂稀释法测定提取液最小抑菌浓度的结果中，最小抑菌浓度为铁椆果仁提取液＜铁椆树根提取液＜红菇子实体提取液。总的来说，3种测试提取液中，铁椆树根和果仁提取液的抑菌效果相当，而红菇子实体提取液的抑菌效果较差。至于抑菌成分和作用机理还有待进一步研究。

本实验通过红菇及其共生树种铁椆树根和果仁对供试菌种的抑制作用比较，在一定程度上证明了铁椆具有与红菇子实体一样的抑菌作用或抗菌活性，且效果相对较好，对红菇子实体及其共生树种的综合开发，研制天然抑菌药物、天然防腐抑菌剂具有重要的指导意义。

[1] 甘耀坤, 赵良发, 戴卢, 等. 野生红菇研究综述[J]. 玉林师范学院学报: 自然科学版, 2005, 26(3): 70-74.

[2] 韦仕岩, 莫天砚, 刘斌, 等. 广西浦北六万山锥林的红菇及其生态环境的调查研究[J]. 广西农业大学学报, 1998, 17(1): 25-32.

[3] 李海鹰, 范嘉晔, 王桂文, 等. 广西浦北鳞盖红菇的形态与生态环境[J]. 广西科学, 1995, 2(2): 33-35.

[4] 陈旭健, 甘耀坤, 罗应棉. 红菇子实体提取液抗菌性的研究[J]. 安徽农业科学, 2008, 36(10): 4138-4139.

[5] 甘耀坤, 娄小华, 李岩, 等. 红菇子实体抗氧化性能的初步研究[J].食用菌, 2007, 29(1): 57-59.

[6] 甘耀坤, 陈晓白, 曾诗媛, 等. 红菇提取液抗运动性疲劳作用的研究[J]. 食用菌, 2010, 32(1): 66-67.

[7] 陈旭健, 甘耀坤, 吴慧慧, 等. 红菇子实体对小鼠血糖、血脂的影响[J]. 食品科技, 2008(4): 237-239.

[8] 甘耀坤, 陈旭健, 韦巧春. 铁椆抗氧化性能的初步研究[J]. 安徽农业科学, 2008, 36(29): 12738-12740.

[9] 甘耀坤, 张原琪, 陈晓白, 等. 铁椆抗运动性疲劳作用的初步研究[J].安徽农业科学, 2009, 37(29): 14202-14204; 14209.

[10] 凌建亚, 秦红敏, 张长恺. 浓香乳菇菌丝抗菌活性的研究[J]. 食品科学, 2000, 21(4): 40-42.

[11] 陆志科, 谢碧霞, 李安平. 麻竹竹叶提取液的抗菌性能[J]. 中南林学院学报, 2005, 25(1): 56-59.

[12] 中华人民共和国卫生部. 消毒技术规范(2002年版)[M]．北京: 中华人民共和国卫生部, 2002．

Comparison of Bacteriostatic Effects between Extracts from Russula and Cyclobalanopsis glauca

LIU Ying-zi1,2，GAN Yao-kun1,2，CHEN Xu-jian1，MING Ting-hui1，ZENG Xian-ying1
(1. Department of Chemistry and Biology, Yulin Normal University, Yulin 537000, China；2. College of Life Science, Guangxi Normal University, Guilin 541004, China)

The bacteriostatic effects of extracts from Russula and Cyclobalanopsis glauca were studied in this paper. Russula roots and Cyclobalanopsis glauca roots and nut were subjected to solvent extraction with 80% ethanol under ultrasonic assistance,and the extracts from both plants were comparatively evaluated for their bacteriostatic effects on Escherichia coli, Micrococcus lueus, Staphylococcus aureus, Aerobacter aerogenns, Karlperth yeast, Penicillium adametzi Zaleski. Results indicated that three extracts had inhibitory effects on Escherichia coli, Micrococcus luteus, and Karlperth yeast. Meanwhile, the inhibitory effects of these extracts on Escherichia coli and Micrococcus luteus were more obvious and exhibited a concentration-dependent manner.Minimum inhibitory concentrations against Karlperth yeast increased in the following order: Cyclobalanopsis glauca root extract ＜Cyclobalanopsis glauca nut extract ＜ Russula extract. Moreover, the optimal inhibitory concentrations of these extracts were all 2.0 g/mL.

Cyclobalanopsis glauca；Russula；ultrasonic extraction； bacteriostatic effect

Q939.97

A

1002-6630(2011)05-0036-03

2010-06-16

广西科技厅自然科学基金项目(桂科自0728250)；广西教育厅科研项目(200709LX140)；

广西教育厅科研项目(200810LX403)

刘英姿(1975—)，女，硕士，主要从事分子生态学研究。E-mail：lyz3377@126.com