2型糖尿病肾病与ACE基因多态性的相关性研究*

(泰山医学院公共卫生学院，山东 泰安 271016)

糖尿病肾病( diabetic nephropathy，DN) 是糖尿病( DM) 重要的微血管并发症之一。在我国经过对DM患者的回顾调查中，DN约占2型DM患者的34.7%[1]。血管紧张素转换酶(angiotensin converting enzyme，ACE)是肾素-血管紧张素系统中的一个关键酶，可将无活性的血管紧张素I 转化为有活性的血管紧张素II, 并可灭活缓激肽[2]。ACE基因多态性与2型糖尿病肾病的关系因种族、地域和环境不同，国内外对此尚有争论。因此，我们对泰安地区ACF基因多态性与DN发生之间关系进行研究，以探讨其相关性。

1 对象与方法

1.1 研究对象 本次研究采用以医院为基础的配对病例-对照研究方法，研究对象均来自泰安各三级医院住院病人。106例研究对象其诊断均符合2002年ADA糖尿病推荐标准为糖尿病组即MD组(无肾病)。连续2次以上24h尿白蛋白排泄率(UAER)≥30 mg的2型DM患者被诊断为糖尿病肾病即DN组。按照与DN病例同性别、同年龄组的配比条件选取对照。并调查患者及对照组一般情况：性别、年龄、体重、血压、是否有冠心病等。

1.2标本收集及处理 合格标本经知情同意后取空腹静脉血4 ml, 一管血液自凝，分离血清，-700C冰箱保存，检测生化指标；另一管加EDTA-K2抗凝, 用快速裂解消化法提取基因组DNA。

1.3方法

1.3.1血生化指标检测 取已分离血清检测患者TG、TC、LDL、HDL，操作严格按使用说明书。

1.3.2基因分析 将提取人基因组DNA,进行PCR/琼脂糖凝聚电泳检测。PCR上游引物序列为：5'CTGGAGACCACTCCCATCCTTTCT-3'，PCR下游引物序列为：5'GATGTGGCCATCACATTCGTCAGAT -3'。反应条件为：预变性94℃5 min后进入循环，变性94℃ 1 min，退火58℃ 2 min，延伸72℃ 2 min，共循环30次，最后72℃延伸10 min，4℃保存。取PCR产物8 μl在2%琼脂糖凝胶中电泳,在紫外透射反射仪下观察结果。

1.4统计处理 采用SPSS 13.0计算各比较组ACE 基因I/D多态性的基因型频率及等位基因频率, 确认其符合Hardy - Weinberg 平衡。组间比较用χ2检验和t检验，多因素相互关联用Logist ic 回归方程检验。

2 结 果

一般情况比较 DN组与DM组的平均年龄经检验其差异无显著意义，对两组人群的空腹总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)和低密度脂蛋白(LDL)水平以及冠心病患者在两组中的构成比做χ2检验，结果各项指标在两组间的差异均无显著意义，见表1。

表1 患者的一般特征比较

2.1PCR扩增结果 紫外透射反射仪下观察到：在190bp位置出现1条荧光带即DD型(缺失型)，在490bp位置出现1条荧光带即II型(插入型)，在490bp和190bp位置出现2条荧光带即ACE基因杂合型(ID型)，DM组、DN组与对照ACE基因型频率和等位基因频率的差别均无统计学意义，见表2。

表1 病例与对照ACE基因型和等位基因频率分布

3 讨 论

血管紧张素转换酶(ACE)基因位于人类的17 号染色体短臂2 区3 带(17q23),由26个外显子和25个内含子组成。ACE 基因I /D 多态性是位于ACE 基因第16内含子的一段 alu 序列的多态性，插入本身长度为287 bp。表现为插入纯合子( II)、缺失纯合子( DD)以及插入/缺失杂合子( ID)[3]。ACE基因存在三种基因型：DD、DI、II 及两种等位基因：D、I。近年来，国内外对ACE基因多态性与DN 的易感性关系进行了大量的研究报道,但结论不甚一致[4-6]。结果的差异可能与样本选择、地域、种族、其它遗传因素不同有关。

本实验结果表明，DM组、DN组和正常对照组之间ACE 基因I/ D 多态性基因型频率存在差异不显著(P>0.05)，同时，D 等位基因频率差异亦不显著(P>0.05)。表明ACE 基因I/D多态性与2型糖尿病病人DN发生和发展无关联，ACE DD型基因不能作为2 型糖尿病病人DN 发生、发展的预测指标，ACE基因插入/缺失多态性与DN的发生无关。

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