补肾健脾方药结合二甲双胍对多囊卵巢模型大鼠的治疗作用

陈高萍，沈明勤，魏爱醇

(海安县中医院，江苏 海安 226600)

本文对补肾健脾方药结合二甲双胍对多囊卵巢模型大鼠的治疗作用，进行了实验研究，现将结果报告如下。

1 材料

1.1 动物 SD雌性大鼠，SPF级，由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供，动物合格证号：SCXK(沪)，2007-0005。

1.2 药品与试剂 补肾健脾方药，经煎煮、浓缩,制成含生药量3 g/mL药液,4 ℃保存，备用。二甲双胍片，0.25 g/片,48片/瓶，批号：08051301，江苏江中药业集团股份有限公司生产。注射用人绒毛膜促性腺激素(HCG)，500 U/瓶，批号：0803091，上海第一药业有限公司生产。中性胰岛素注射液，400 U/10 mL，批号：0804215，江苏万邦生化医药股份有限公司生产。口服葡萄糖，350 g/袋，批号：080102，上海福亿葡萄乳品有限公司生产。FSH、E2、P放免试剂盒，批号：081020，北京北方生物技术研究所生产。INS,北京福瑞特工程公司生产。

2 方法

2.1 PCO大鼠模型制备及分组 SD雌性大鼠100只,体质量250 g，随机分为正常对照组10只和PCO模型组90只。正常对照组给予常规伺养。PCO模型组依照Poretsky法[1]每只大鼠皮下注射HCG 1.5 U,每日2次，共22 d，INS皮下注射于第1～11天内自0.5 U/d开始，每日递增0.5 U，逐淅递增至6.0 U/d，并按此剂量维持至第22天，注射前1 d起以5%葡萄糖溶液替代日常饮用水，造模最后1 d禁食过夜。

全部大鼠每周称体质量1次。于第23天称量体质量,眼眶后静脉取血，测血清P、INS。正常对照组大鼠血清P、INS均在正常范围内。PCO模型组大鼠血清P、INS升高者，为PCO模型大鼠。根据血清P、INS值选出PCO模型组大鼠，按体质量及P、INS值随机分为模型对照(灌胃饮用水)组、阳性药(二甲双胍)组、二甲双胍加补肾健脾方药高、低剂量组、补肾健脾方药高、低剂量组共6组，每组12只，未成模大鼠剔除。均将供试液配制成一定浓度后，按10 mL/kg灌胃给药，正常对照组另给予等量饮用水。

2.2 给药方法 二甲双胍组大鼠按成人剂量的10倍(250 mg/kg)、补肾健脾方药高、低剂量组按成人剂量的10倍、5倍量(通过人与大鼠体表面积比率换法计算出给药量分别为30 mg/kg、15 mg/kg)，灌胃给药。正常对照组和模型对照给大鼠每日灌胃蒸馏水1 mg/100 g体质量。均1次/d，连续14 d。

2.3 检测项目及方法 末次给药后禁食过夜，翌日称重后，大鼠腹股沟静脉取血，分离血清，放免法测血清雌二醇(E2)、孕酮(P)、促卵泡素(FSH)、胰岛素(INS)水平，另取血清测血糖水平(GLU)，计算胰岛素敏感指数(insulin sensitivity index，ISI，为空腹血糖值与空腹血胰岛素值乘积的倒数，呈非正态分布，分析时取其自然对数值)。最后，放血处死动物，取子宫、卵巢称脏器质量。卵巢病理检查：每组随机取4只卵巢进行切片、脱片、包埋、HE染色、光镜检查。

3 结果

3.1 补肾健脾方对多囊卵巢模型大鼠卵巢、子宫质量的影响 见表1。

表1 对多囊卵巢模型大鼠卵巢、子宫质量的影响(±s)

3.2 补肾健脾方药对多囊卵巢模型大鼠血清E2、FSH、INS、P、ISI的影响 见表2。

表2 对多囊卵巢模型大鼠E2、FSH、INS、P水平的影响(±s)

3.3 补肾健脾方药对多囊卵巢模型大鼠血糖和胰岛素敏感指数(ISI)的影响 见表3。

表3 对多囊卵巢模型大鼠血糖和胰岛素敏感指数(ISI)的影响(±s)

3.4 补肾健脾方药对多囊卵巢模型大鼠卵巢病理组织学观察结果 对照组：子宫内膜表面覆盖单层柱状上皮，腺体较丰富，卵巢组织内见各发育阶段的卵泡及排卵后形成的黄体、白体。模型组：子宫内膜上皮为高柱状，细胞质丰富，腺上皮细胞明显增生呈假复层改变，卵巢组织内见多量扩张呈囊状的卵泡，卵泡内见卵泡膜细胞及颗粒细胞。二甲双胍组：子宫内膜表面覆盖单层柱状上皮，腺体较丰富，2例鼠卵巢组织改变与模型组相似,见多量扩张呈囊状的卵泡，卵泡内见卵泡膜细胞及颗粒细胞,另2例鼠卵巢改变与正常对照组基本相似。补肾健脾方药低剂量组：2例鼠子宫内膜与模型组改变相似，上皮为高柱状，细胞质丰富,腺上皮细胞明显增生呈假复层改变，另2例与对照组相似，表面覆单层柱状上皮，腺体较丰富,各例鼠卵巢组织改变与模型组相似，见多量扩张呈囊状的卵泡，卵泡内见卵泡膜细胞及颗粒细胞。 补肾健脾方药高剂量组:2例鼠子宫内膜与模型组改变相似，上皮为高柱状，细胞质丰富，腺上皮细胞明显增生呈假复层改变，另2例与对照组相似，表面覆单层柱状上皮,腺体较丰富，2例鼠卵巢组织改变与模型组相似，见多量扩张呈囊状的卵泡,卵泡内见卵泡膜细胞及颗粒细胞，另2例鼠卵巢改变与正常对照组基本相似。

4 小结

本实验[1]结果提示,二甲双胍结合补肾健脾方药对皮下注射HCG和INS引起的多囊卵巢模型(PCO)大鼠有明显的治疗作用,且比单独使用二甲双胍治疗的阳性对照组的药效作用有一定程度的好转。

[1]刘新敏,李光荣,陈双厚,等.多囊饮对多囊卵巢模型大鼠的影响[J].中华中医药杂志,2006,21(6):371-373.