痛经贴体外透皮吸收的研究

吴泽民，王 沛，李春子，陈丽文

(长春中医药大学，吉林 长春 130117 )

中药制剂痛经贴是传统中医妇科临床多年使用的协定处方，处方由荜茇、三七、丁香等名贵中药组成，具有活血通经，散寒止痛之功能，临床疗效确切。我们设计以二甲基亚砜作为该贴剂的透皮剂来促进该药吸收，采用体外Franz扩散池法，对主药荜茇中有效成分胡椒碱、丁香中的丁香酚的体外吸收和该制剂的稳定性进行了研究，同时还对二甲基亚砜的促透皮吸收作用进行了考查[1-2]。

1 仪器与材料

Waters 600E液相色谱仪；Waters 600泵，Waters 2487紫外检测器；Millennium 32色谱工作站(Waters公司)；岛津GC-14A气相色谱仪(日产);Franz扩散池(宁海黄坛玻璃仪器厂)；痛经贴(医院制剂室提供)；胡椒碱对照品(中国药品生物制品检定所，批号200981-2201)；丁香酚对照品(中国药品生物制品检定所，批号200928-0106)。

实验用小鼠，雌雄不限，雌者无孕，体质量(24±2)g，由吉林大学动物部提供。

2 方法与结果

2.1 胡椒碱标准曲线制备 取干燥至恒重的胡椒碱对照品，精密称定4.0 mg置于10 mL容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻线，摇匀，精密吸取1 mL， 定容于10 mL容量瓶中，用无水乙醇稀释至刻线，摇匀，作为标准品溶液。分别吸取上述标准品溶液0.2、0.4、0.8、1.5、3.0、5.0 μL，注入高效液相色谱仪中，以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，绘制标准曲线[1]，得方程Y=482 148 0.10X-359 0.22，r=0.999 8，表明胡椒碱在0.008 0～0.200 0 μg峰面积与进样量之间呈良好线性关系。

2.2 丁香酚标准曲线制备 取干燥至恒重的丁香酚对照品，精密量取6.00 mg置5 L容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻线，摇匀，即得标准品溶液。分别吸取制得的标准品溶液适量，用无水乙醇配成标准液系列0.056、0.089、0.178、0.303、0.596、0.798、1.243 mg/mL，分别取上述溶液各1 mL注入气相色谱仪中，以峰面积为纵坐标，以进样量为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程Y=168 9.7X+89.7，r=0.999 6，表明丁香酚在0.056～1.245 μg峰面积与进样量之间呈良好线性关系。

2.3 色谱条件 液相色谱柱为VP-ODS(150 mm×4.6 mm)，流动相为甲醇-水(70∶30)，检测波长为344 nm，流速为1 mL/min。以胡椒碱为对照品，进样后测定峰面积。结果：测得平均回收率为97.80%(RSD为1.20%)。

气相色谱柱为PEG-20M石英毛细管柱，柱温110 ℃保持5 min，以10 ℃/min升至110 ℃，再以20 ℃/min升至220 ℃，保持10 min，检测器进样器温度均为230 ℃，FID检测器。以丁香酚为对照品，进样后测定锋面积。结果：测得平均回收率为97.80%(RSD为2.42%)。

2.4 皮肤的制备[2]取体质量(24±2)g的实验小鼠，用脱毛膏脱去背部皮肤毛，处死，剃下该块皮肤，用蒸馏水彻底洗净，浸在生理盐水中备用。

2.5 体外透皮吸收试验 采用改良Franz装置，将50%乙醇生理盐水加入接受池中。取离体鼠皮，将真皮层一侧面向Franz池接受池，蒙在接受池上，确保无气泡存在，用塑料绳沿池口包裹、扎紧，以防接受液外漏，剪去多余皮肤，将痛经贴贴膏(3.2 g)紧贴于离体鼠皮角质层一侧，释放池顶端用塑料薄膜密封。另取一套改良Franz装置，同法操作,将不加促透皮剂二甲基亚砜的痛经贴膏(3.2 g)紧贴于离体鼠皮角质层一侧，作为空白对照。水浴恒温至(37±1) ℃，电磁恒速搅拌，分别于0.5、1.0、1.5、2、4、6、8、10、12、24、30 h,从样品接受池和空白接受池中分别取出5 mL接受液，同时各补加等量50%乙醇生理盐水。

将取出的接受液于微孔滤膜过滤后，吸取30 μL注入高效液相仪中测定，根据峰面积计算累计透过量Q，以时间t为横坐标，各时间点胡椒碱累计透过量Q为纵坐标,绘制体外透皮吸收曲线。结果该贴膏的体外透皮吸收基本符合零级释药过程，在0.5～30 h体外经皮吸收接近恒速，其吸收特定曲线方程为Q=0.261 0 t+2.868，r=0.999 8(n=12);不加二甲基亚砜的贴膏体外透皮吸收也基本符合零级释药过程，在0.5～30 h体外经皮恒速吸收，其吸收曲线方程为Q=0.190 2 t+0.764 4，r=0.999 8(n=12)。但是不加二甲基亚砜的痛经贴贴膏的累计透过量明显小于加入二甲基亚砜。

2.6 制剂稳定性的考察 取5套改良Franz装置，室温保持约30 ℃,操作同上，痛经贴贴膏(3.2 g)紧贴于离体鼠皮角质层一侧，接收池中不加接收液以消除误差。分别于2、4、6、8、12 h依次量取其中一份痛经贴贴膏约0.5 g，同时该套装置即结束试验，另称取新拆封的痛经贴贴膏约0.5 g，作为0 h的样本，进行丁香酚的含量测定。

所取样品置于25 mL容量瓶中，加适量无水乙醇，超声提取30 min后放冷,定容，取3 μL注入气相色谱仪中测定，根据峰面积计算出含量(C)，以时间t为横坐标,各时间点丁香酚含量(C)为纵坐标，绘制曲线，见图1。可见体外透皮吸收试验过程，痛经贴贴膏剂基本稳定。

图1 30 h内丁香酚含量变化曲线

3 小结

该实验结果表明，该贴膏剂中加入透皮剂二甲基亚砜能明显增加该贴剂透皮吸收量，说明二甲基亚砜起到了很好促渗透作用，故加入二甲基亚砜可行。

该贴膏剂在0～30 h体外经皮渗透吸收接近恒速，基本符合零级吸收渗透过程,且作用时间较长，可考虑制成长效经皮给药制剂。

[1]陆守曾.高等数学(下册)[M].上海，上海科技出版社，2006：223-236.

[2]徐叔云.药理实验方法学[M].北京：人民卫生出版社，2006：102-104.