鱼肉中硝基苯残留量检测

郭 军，赵全东，刘铁钢

（吉林省水产科学研究院，吉林 长春 130000）

我们参考各种农残食品分析方法和水中硝基苯的检测方法，根据硝基苯的物理化学性质，经过大量实验验证。采取丙酮匀浆提取鱼肉中的硝基苯，水蒸气提取纯化，正己烷萃取，无水硫酸钠+氧化铝柱净化，浓缩，GC，ECD检测器检测的方法检测鱼肉中的硝基苯。

1 试验

（1）试剂和仪器。所有试剂在硝基苯出峰处应无干扰峰，最好选择优级纯或色谱纯试剂。丙酮：色谱纯。正己烷：色谱纯。无水硫酸钠：分析纯，650℃灼烧4h，冷却后贮于密闭容器中备用。中性氧化铝：层析用，100-200目，650℃灼烧4h，加5%（W/W）去离子水脱活，震荡1h后，放置过夜。硝基苯标准品：购于国家标准物质中心。氯化钠：分析纯。水：实验用水符合GB/T 6682中一级水标准。

实验室常规仪器、设备及下列各项：气相色谱仪：agilent 6890N、配63Ni电子捕获检测器；电子天平：0.0001g；匀浆机；离心机：4000r/min、100ml；电热恒温水浴锅；旋转蒸发器；Snyder浓缩柱；水蒸气蒸馏装置；无水硫酸钠+氧化铝净化柱：在玻璃层析柱下端放入少量玻璃棉，依次干法装入4g氧化铝和10g无水硫酸钠。轻敲柱壁，使填充物尽可能致密。

（2）色谱条件。色谱柱：HP-5石英毛细管柱，固定相：甲基硅油，30m×0.32mm×0.5μm载气：氮气，载气流量：1.0mL/min保持至 6min；0.5ml/min2→1.2ml/min 保持至 8min；1.2ml/min→最后。进样口温度：240℃。温度程序：初始柱温40℃，维持1min；20℃/min→120℃，维持 1min；15℃/min→240℃；检测器：63Ni电子捕获检测器；温度：300℃。进样方式及进样量：无分流方式进样，自动进样1μL。

（3）标准曲线。将硝基苯标液用正己烷稀释定容，配成浓度为 0.0202 μg/mL、0.0606 μg/mL、0.101 μg/mL、0.1414 μg/mL、0.202μg/mL的标准使用液。采用以上色谱条件进样，进样量1ul,以峰面积为纵坐标、标物浓度为横坐标，建立校准曲线回归方程：

Area=1912.013×Amt-11.397

R=0.9955

Area:峰面积

Amt:标准的量（浓度）

2 样品的预处理和测定

（1）样品预处理。鱼去鳞、去皮沿背脊取肌肉；样品切为不大于0.5cm×0.5cm×0.5cm的小块后混匀，每一样品总样品量不低于50g，放置冰箱中-18℃冷冻贮存备用。

（2）提取。将样品解冻，称取样品10g（精确到0.01g），置于50mL匀浆机试管中，加入丙酮25mL，匀浆机匀浆2min，分散均匀，提取硝基苯，4000r/min离心5min，收集上清液。转移鱼样品至匀浆机试管中，再加入丙酮20mL匀浆2min，同上条件离心分离，合并上清液。将丙酮提取液置于500mL圆底烧瓶中，在105℃温度下，水蒸气蒸馏出300ml，并置于500mL分液漏斗中，向其中加入20gNaCl，用每次20ml正己烷萃取2次，静止分层30min，再用200ml硫酸钠水溶液反萃正己烷萃取液一次，弃去水相。将正己烷萃取液过无水硫酸钠+氧化铝净化柱（柱内径12mm，10g无水硫酸钠（上层）+4克氧化铝）。

（3）浓缩。用10mL正己烷洗涤分液漏斗和无水硫酸钠脱水柱，一并和正己烷萃取液置于旋转蒸发器中，旋转蒸发浓缩至10mL，将10mL浓缩液转移至K.D浓缩瓶中，Snyder柱浓缩至0.6mL左右，以正己烷定容至1mL。GC/ECD测定。

（4）样品测定。分别注入1μL适当浓度的硝基苯标准溶液及样品提取物溶液于气相色谱仪中，按上述色谱条件进行色谱分析，记录峰面积；响应值均应在仪器检测的线性范围之内。根据标准样品的保留时间定性，外标法定量如图1所示。

NB：硝基苯

图1 某含硝基苯的鲢鱼肉提取液色谱图

（5）空白实验。用该方法检测市售鱼产品，未检出硝基苯。

（6）加标回收率测定。取10g空白鱼肉加标0.885微克，做多次实验，回收率70%～80%。

3 结果和讨论

（1）检出限。以该色谱条件下3倍噪音所对应浓度为定量检出限，考虑到前处理步骤，得该方法鱼肉中硝基苯检出限为3ug/kg。

（2）空白干扰实验。所有试剂在硝基苯出峰处无干扰峰，正己烷浓缩后硝基苯出峰处无干扰峰。

（3）精密度。单个实验室多人次测定同一个样品相对标准偏差小于10%。

（4）正己烷萃取。正己烷萃取率比苯低，但是其毒性相对小，易浓缩，因此我们采用正己烷。

（5）水蒸气蒸馏装置。我们使用经典的提取方法，若不用水蒸气蒸馏提纯，做到浓缩步骤时，样品成凝固状，使得实验无法进行。依据硝基苯易与水形成共沸物的特点采用水蒸气蒸馏提取纯化，损失小并能去除大部分的脂类物质干扰使得实验可以进行下去并最终取得良好的实验结果。

图2 水蒸气蒸馏装置图

4 结论

该方法检测鱼体中硝基苯，具有良好的分离度、精密度、较高的回收率和较低的检出限。