EMP1蛋白在口腔鳞癌组织中的表达及其临床意义*

张 军 李 江 王丽珍 徐 骎

EMP1蛋白在口腔鳞癌组织中的表达及其临床意义*

张 军 李 江 王丽珍 徐 骎△

目的：检测上皮膜蛋白基因1（EMP1）在口腔鳞状细胞癌（OSCC）组织中的表达及其临床意义。方法：应用免疫组织化学染色方法对60例OSCC患者组织切片中的EMP1表达进行检测，分析不同临床参数中EMP1的表达差异，并计算EMP1表达评分用于诊断OSCC的灵敏度和特异度。结果：EMP1主要表达在细胞膜和（或）胞浆中，淋巴细胞及细胞间质中无明显表达。临床早期OSCC的EMP1表达评分高于晚期，无淋巴结转移OSCC的EMP1表达评分高于有淋巴结转移者，差异有统计学意义。用于诊断淋巴结转移的灵敏度和特异度分别为61.9%和77.8%，用于诊断OSCC临床分期的灵敏度和特异度均为70.0%。结论：EMP1的表达与淋巴结转移、临床分期存在一定相关性，可能对临床诊断和治疗OSCC具有指导价值。

口腔肿瘤 癌，鳞状细胞 免疫组织化学 上皮膜蛋白基因1

口腔鳞状细胞癌（oral squamous cell carcinoma，OSCC）是头颈部常见的恶性肿瘤，占头颈癌的90%左右[1]。前期有研究通过少量标本发现上皮膜蛋白基因1（EMP1）在OSCC中的表达明显下调[2]。本课题前期研究通过PCR及Real time-PCR检测EMP1在OSCC及邻近正常组织中的表达情况，提示该基因可能在肿瘤发生、发展中起作用[3]。为进一步证实此结果，本研究通过对较大样本OSCC临床组织标本的验证，观察分析EMP1蛋白在体内的表达水平及其与临床特征的关系，重点判断EMP1表达评分用于判断临床特征的灵敏度和特异度，以评价该基因表达在OSCC发生、发展中的临床意义。

1 材料与方法

1.1 材料 选取2009年1月—4月上海市第九人民医院收治的60例OSCC患者的石蜡组织块。该组患者平均年龄（61.7±13.2）岁；其中男36例，女24例；有烟酒史者25例，无烟酒史者35例；发病部位：舌部32例，颊部14例，腭部3例，牙龈9例，口底2例；18例伴有颈淋巴结转移，42例无颈淋巴结转移；临床早期和晚期各30例，病理分化Ⅰ级15例，Ⅱ级42例，Ⅲ级3例。

1.2 方法

1.2.1 免疫组织化学染色 组织切片厚度为5 μm。切片置于68℃恒温箱中烘烤后放入二甲苯中脱蜡30min，后依次放入100%乙醇中5s，95%乙醇中5s，洗涤2次，蒸馏水洗涤去除乙醇；切片置于H2O2中进行抗原封闭10min；蒸馏水洗片1次，PBS洗片3次，每次5min；多克隆鼠抗人EMP1抗体（Ab⁃nova，中国台湾）按1∶200稀释，滴加抗体后，置暗盒中在4℃下反应过夜；第2天取出暗盒，复温1 h，PBS洗片3次，每次5min；加入二抗，室温孵育45min；PBS洗片3次，每次5min；加入适量按1∶80配制的二氨基联苯胺（DAB，Sigma，St Louis，Missouri，美国）溶液，显色约5s，显微镜下观察显色，PBS中终止反应。苏木素复染，梯度乙醇中脱水，然后用二甲苯，洗片2次透明，中性树脂封片，显微镜下观察并摄片。

作者单位：300041 天津市口腔医院口腔颌面外科（张军）；上海交通大学医学院附属第九人民医院（张军，李江，王丽珍，徐骎）

1.2.2 免疫组化结果判断标准 阳性染色百分数（P）评分标准，0分：<10%；1分：10%～25%；2分：26%～50%；3分：51%～ 75%；4分：76%～100%。染色强度（I）的评分标准，0：阴性；1：淡黄色；2：褐色；3：深褐色。总的评分（S）=P×I[4]。免疫染色评分由2名有经验的病理科医生在双盲情况下得出。

1.3 统计学方法 应用SPSS 17.0统计软件。2组及多组EMP1表达评分比较采用Mann-Whitney’s或Kruskal-Wallis非参数统计方法。应用受试者工作曲线（receiver operative curve，ROC）分析计算EMP1表达评分用于诊断OSCC的灵敏度和特异度，根据阈值对该组患者的淋巴结转移及肿瘤早晚期的判断进行卡方（χ2）检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 免疫组织化学染色结果 EMP1主要表达在细胞膜和（或）胞浆中，淋巴细胞及细胞间质中无明显表达。在30例早期患者中有27例（90.0%），42例无淋巴结转移患者中有30例（71.4%）的鳞癌细胞胞膜和胞浆中EMP1为褐或深褐色染色，见图1A、C；在30例晚期肿瘤患者中有15例（50.0%），18例有淋巴结转移患者中的10例（55.6%）鳞癌细胞胞膜和胞浆中EMP1为淡黄色或褐色染色，见图1B、D。

Figure 1 The staining of EMP1 in OSCC cells (Immunohistochemistry×200)图1 EMP1在OSCC细胞中的染色（免疫组织化学×200）

2.2 不同临床参数之间EMP1表达评分的比较 临床早期OSCC的EMP1表达评分高于晚期，无淋巴结转移OSCC中EMP1表达评分高于有淋巴结转移者，差异有统计学意义，见表1。

Table 1 Comparison of expression levels of EMP1 in different clinical characterization groups表1 不同临床特征EMP1表达水平比较 M（P25,P75）

2.3 EMP1用于诊断OSCC的灵敏度和特异度 EMP1表达评分用于诊断淋巴结转移的灵敏度和特异度分别为61.9%和77.8%，见图2；用于诊断OSCC早晚分期的灵敏度和特异度均为70.0%，见图3；EMP1表达总评分的阈值为7。以7为阈值，诊断淋巴结是否转移和癌症早晚分期差异有统计学意义（P<0.01），见表2。

Figure 2 ROC analysis of diagnosing lymph node metastasis using EMP1 expression scores图2 EMP1表达评分判断淋巴结是否转移的ROC曲线

Figure 3 ROC analysis of diagnosing early or advanced OSCC using EMP1 expression scores图3 EMP1表达评分判断早晚期OSCC的ROC曲线

Table 2 Results of EMP1 expression scores for diagnosing lymph node metastasis and early or advanced stage of OSCC表2 EMP1表达评分阈值诊断淋巴结转移与否及早晚期OSCC的结果

3 讨论

EMP1基因是在1995年由瑞士学者Taylor等[5]从胎鼠肠cDNA文库中克隆出并命名的，其编码4个跨膜结构域，分子质量约18 ku。在鳞状上皮中富含该基因的mRNA[6]。Gnirke等[7]观察几种有不同转移特点的人乳腺癌细胞发现，该基因表达与细胞的浸润和转移特性有关。Wang等[8]认为EMP1基因可能是参与细胞信号传导、细胞通信及黏附调节的调节因子之一。Zhang等[3]研究发现OSCC中的EMP1基因表达下调，且其下调与淋巴结转移有关。本研究发现该蛋白在OSCC中的表达明显下调，说明其可能参与了该疾病的发生和发展，且EMP1的表达在早、晚期肿瘤及有无淋巴结转移肿瘤间存在差异，提示EMP1可能成为OSCC分子诊断、治疗的一种新的候选标志物。

目前治疗OSCC的有效手段是手术扩大切除病灶，同时在手术前后辅以化疗和（或）放疗，但生存率并不十分令人满意，只有60%的患者可以生存5年[9]。因此，临床实践中更应该注意OSCC早期发现的重要性，同时需要仔细考虑患者个体治疗方法模式的选择，临床医生在为了保存器官及其功能和处理相关并存情况时，要把注意力集中在最有效的治疗方法上[10]，这样才能减少失败，提高患者生存期及改善生活质量。OSCC的传统治疗方法和预后主要依据TNM分类，该系统对于早期OSCC来讲具有主观性和缺乏提示作用，并且对该疾病的严重程度、预后和治疗反应提供的信息少，而早期发现OSCC是提高生存率的最有效方法[11]。本研究通过ROC曲线分析，得出阈值为7的评分标准，以该阈值对本组患者是否有淋巴结转移及肿瘤早晚分期进行卡方检验，差异有统计学意义，提示该阈值可能在制定治疗方案时有参考作用。总之，结合TNM分类系统，EMP1的表达评分可能为临床医生选择治疗方法、判断预后或预测疾病严重程度方面提供一些有价值的信息。

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（2011-11-03收稿 2012-03-22修回）

（本文编辑 闫娟）

Protein Levels and Clinical Significance of EMP1 in Oral Squamous Cell Carcinoma

ZHANG Jun,LI Jiang,WANG Lizhen,XU Qin
Department of Oral Maxillofacial Surgery,Tianjin Stomatology Hospital,Tianjin 300041，China

Objective:To investigate the protein level and significance of epithelial membrane protein-1(EMP1)in oral squamous cell carcinoma(OSCC)tissues.Methods:Immunohistochemical method was used to determine the expression of EMP1 in 60 samples of OSCC.The difference of EMP1 expression in clinical parameters was analyzed.Scores of EMP1 ex⁃pression was calculated for diagnosis of OSCC.Results:The expression of EMP1 was found in the cell membrane or cyto⁃plasm.There were no significant expressions in lymphocytes and intercellular substance.There was a higher expression of EMP1 in the early clinical stage of OSCC than that of later clinical stage of OSCC.There was a significantly higher expression of EMP1 in no lymph node metastasis than that of lymph node metastasis of OSCC.The sensitivity and specificity used for pre⁃diction of expressive scores of EMP1 were 61.90%and 77.80%,and the sensitivity and specificity used for clinical stage were both 70.0%,respectively.Conclusion:Expression of EMP1 was correlated with lymph node metastasis and clinical stage, which may has guidance significance for clinical practice.

mouth neoplasms carcinoma,squamous cellimmunohistochemistry epithelial membrane protein-1

10.3969/j.issn.0253-9896.2012.08.002

*上海市科委科研计划项目（项目编号：08JC1414400）

△通讯作者E-mail:xuqin_2004@hotmail.com