人羊膜的研究进展

马晓峰董乐乐

(1 包头医学院第一附属医院骨科，内蒙 包头 014010；2 包头医学院第一附属医院，内蒙 包头 014010)

人羊膜的研究进展

马晓峰1董乐乐2

(1 包头医学院第一附属医院骨科，内蒙 包头 014010；2 包头医学院第一附属医院，内蒙 包头 014010)

通过大量查阅国内外有关人羊膜的基础和临床应用研究文献并总结这些研究成果。可以人了解羊膜的来源广，价格低、与细胞相容性好、抗原性低，羊膜上皮层具有上皮细胞及成纤维细胞生长因子等多种细胞生长因子，而基底膜含有Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ等多种类型胶原、纤维桥接蛋白及多种糖蛋白，由于这些结构的特殊性，使其能够促进多种细胞的生长。近年来随着组织工程生物工程对羊膜的进一步研究，人羊膜在临床中的应用会更加被重视。

人羊膜；基础；组织工程；临床应用

人羊膜作为一种生物材料，在基础研究及临床中的应用已有很多年的历史。1910年，Davis用胎膜作为手术替代材料进行皮肤移植，并取得成功。1913年，Stem和Sabella分别报导了用羊膜来治疗皮肤烧伤和皮肤溃疡[1-3]。随后羊膜被应用于各种手术，包括：眼科、颅脑外科、腹腔外科和妇科等。随着对人羊膜的的进一步研究，随着组织工程及生物工程的发展，人羊膜在临床中的应用会越来越广泛。

1 概 述

1.1 羊膜的结构和功能

羊膜位于胎儿绒毛膜的表面，从细胞滋养层衍生而来，是光滑、无神经、无血管、无淋巴的双层透明膜，厚0.02～0.05mm，是人体最厚的基底膜[4-6]。羊膜由5层机构构成：羊膜上皮，基底膜，致密层，成纤维细胞层，海绵层[7，8]。每层结构都有其独特的作用，并且含有多种生长因子，这些生长因子主要由羊膜上皮细胞分泌[9]。主要包括：生长因子、转化生长因子α、肝细胞生长因子、角化细胞生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、转移生长因子1、2[10]。组织学及电镜观察证实，胚胎早期的羊膜具有和胎儿皮肤相似的组织结构，从而认为羊膜具有和皮肤相同的屏障和防御保护功能。运用于创面的修复能起到保护创面不受到细菌等微生物侵入，减少感染的作用。一般情况下，β3-防御素是细菌细胞壁中的肽聚糖或脂多糖对羊膜上皮形成刺激而产生的。防御素是一类内源性抗菌肽，它具有很广泛的抗微生物活性，对革兰阳性、阴性细菌、真菌及薄膜病毒的杀伤作用很强。所以认为羊膜具有天然免疫性[11]。羊膜的上皮细胞还具有潜在的分化能力，因为已经有研究证实鼠羊膜上皮在特定生化条件下不仅分化为毛囊上皮细胞，而且还可以分化为皮肤[12]。此外，羊膜基底膜中存在大量富含硫酸乙酰肝素的蛋白多糖，可以起到与皮肤相似的屏障作用，使羊膜成为半通透膜。

1.2 常用羊膜的特点以及类型

在对羊膜进行临床研究以及基础研究的过程中，羊膜细胞外基质、冻存羊膜以及新鲜羊膜是最常用的羊膜材料，它们的特点各不相同，且制备方法有所不同。冻存羊膜和羊膜外基质首先需要制备新鲜羊膜。新鲜羊膜在制备过程中保留了羊膜上皮细胞及各种细胞因子，有利于眼表的重建，故用来治疗眼表疾病。然而因为新鲜羊膜含有细胞成分，所以有轻微抗原性，且保存时间不长，使用起来不太方便。与新鲜羊膜比较，冻存羊膜能够保存较久，使用起来要方便很多。所谓的羊膜外基质主要是指除去可溶性蛋白以及细胞，仅保留原组织中不能被溶解的成分，此类不可溶解的成分主要有结构蛋白、氨基葡聚糖、弹性蛋白、胶原蛋白等，将此类物质作为细胞的生长支架，不仅有利于细胞的黏附，而且保存时间长，方便使用[5]。

1.3 羊膜的制备

按照供体医学标准，必须严格检查捐赠者的身体状况，通过血清学检测保证其未受乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒，人类免疫缺陷病毒，巨细胞病毒和梅毒螺旋体的感染，捐赠者无产道感染淋球菌或衣原体病史，无其他传染性疾病和恶性肿瘤。

1.3.1 新鲜羊膜的制备：新鲜羊膜的制备有多种方法。在这里介绍一种常用方法：将羊膜取下，清洗，去血污，然后置入0.5%胰酶中消化（一块羊膜约300mL），37℃，30min～1h，中间稍加搅拌，消化以羊膜的蜕膜层能脱落为准。消化后的羊膜直接放入1mol/L碳酸氢钠中浸泡（200mL），4℃，20h，时间过长会影响质量，此时的羊膜应该是洁白而且是半透明，双蒸水反复冲洗至pH至7～8左右，置入无菌磷酸盐缓冲液（PBS）中，每天液体要更换一次，1周左右就可用于下一步实验。

1.3.2 制备冻存羊膜[4]：将制备好的羊膜放入4℃的纯甘油中进行脱水处理，每隔24h对甘油液体进行1次更换，液体的更换次数总共为3次。完成上述工序后，将其放入4℃恒温冰箱中保存备用。将经过脱水处理的羊膜取出，放入到含有硫酸软骨素的DMEM液与纯甘油的混合液（其比例为1∶1）中浸泡，-80℃超低温冰箱储存，6个月备用。

1.3.3 羊膜细胞外基质的制备：将经甘油脱水后的羊膜取出，PBS液水化，加入0.25%胰蛋白酶，37℃室温下消化，再用细胞刮子刮除残存的羊膜上皮细胞，于倒置相差显微镜下，证实无细胞后羊膜上皮面朝上平铺于乙酸纤维薄膜纸上，加入含硫酸软骨素的100%甘油∶DMEM液(1∶1)中浸泡，置于4℃恒温冰箱储存，1周备用，或-80℃超低温储存，6个月备用。有研究者将生理盐水漂洗后的羊膜用0.2%戊二醛交联，0.5%十二烷基磺酸钠、0.25%胰酶脱细胞，反复漂洗，冷冻干燥，分装密封，环氧乙烷消毒备用。

2 临床应用

2.1 眼科：羊膜的临床应用比较广泛，目前眼科应用较多。眼科主要用羊膜行结膜疾病导致的结膜缺损、角膜疾病致角膜缺损的移植。Gris等[9]报道了用冻干羊膜治疗眼科疾病的长期随访研究，其结果表明，在对眼表疾病进行治疗的过程中，羊膜具有较高的安全性，特别是对于结膜切除术后结膜缺损的患者，尤为实用。

2.2 烧伤整形科：近年羊膜广泛的运用于烧伤患者的皮肤缺损的覆盖与修复。广西省梧州市红十字会医院烧伤整形外科陈燕图、黄仁胜等[6]对102例烧伤患者应用羊膜敷料覆盖213个创面的临床治疗后，疗效确切满意。主要表现为疼痛减轻，创面渗出减少，全身性反应轻，创面愈合时间缩短。羊膜覆盖后，膜下很少积液，减少了创面感染的因素。

2.3 除了在眼科于烧伤整形科得应用外，近年不少学者在骨外科尝试运用羊膜治疗疾病。如肌腱断裂、神经损伤，而且在这些方面也做了很多基础研究。罗静聪等[8]在实验中将肌腱切断，重新缝合后用人脱细胞羊膜包裹，与对侧不用羊膜的肌腱比较，虽然未发现羊膜对肌腱愈合有影响，但证实羊膜能有效减少肌腱粘连。MLigiliche等[7]将脱细胞羊膜制成管状诱导周围神经再生.随着对羊膜研究的进一步深入，我们相信羊膜的应用会更加广泛的应用于临床，为更多患者带来福音。

[1] 梁婧.人羊膜对创面愈合的促进作用[J].中国美容医学,2009,1(18): 131-133.

[2] Gris O.Amniotic membrane transplantation for ocular surface pathology: long-term results [J].Transplant Proc,2003,35(5):2031-2035.

[3] Dua HS.The amniotic membranein ophthalmology[J].SurvOphth almol,2004,49(1):51-77.

[4] 罗晓婷.新鲜制备及中长期保存的羊膜细胞外基质结构特征[J].中国临床康复杂志,2006,1(10):79-81.

[5] 范伟杰.羊膜的基础和临床应用研究进展[J].中国修复重建外科杂志,2006,20(1):65-68.

[6] 陈燕图.羊膜敷料在烧伤创面的临床应用[J].华夏医学杂志,2004, 1(17):44-45.

[7] Mligiliche N.Extracellular matrix of human amnion manufactured into tubes as conduits for peripheral nerve regeneration[J].J Biomed Mater Res,2002,63(5):591-600.

[8] 罗静聪.脱细胞羊膜对鼠肌腱粘连的影响[J].中国修复重建外科杂志,2004,18(5):431-436.

[9] Gris O.Amniotic mem-brane transplantation for ocular surface pathology: long-term results[J].Transplant Proc,2003,35(5): 2031-2035.

[10] Koizumi NJ.Growth factor mRNA and protein in preserved human amniotic membrane[J].Curr Eye Res,2000,20(3): 173-177.

[11] Buhimschi IA.The novel antimicrobial peptide beta3-defensin is produced by the amnion: a possible role of the fetal membranes in innate immunity of the amniotic cavity[J].Am J Obstet Gyne col,2004,191(5):1678-1687.

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1671-8194（2013）26-0051-02