苦瓜酒中皂苷的含量测定

陈艳兰，杨云川，王成军，邓水来，周萍

（大理学院，云南大理671000）

苦瓜酒中皂苷的含量测定

陈艳兰，杨云川，王成军，邓水来，周萍*

（大理学院，云南大理671000）

目的：测定苦瓜酒中皂苷的含量。方法：以人参皂苷和β-谷甾醇为对照品，香草醛-高氯酸分光度法测定皂苷含量。结果：人参皂苷在0.030~0.240 mg范围内线性关系良好（r=0.999 1），平均加样回收率为99.6%，RSD=2.5%（n=6），样品含量在0.151 1～0.563 0 mg；β-谷甾醇在0.015~0.116 mg范围内线性关系良好（r=0.999 3），平均加样回收率为100.9%，RSD=2.6%（n=6），样品含量在0.065 6～0.247 9 mg。结论：β-谷甾醇和人参皂苷均可作为测定苦瓜皂苷含量的对照品，方法准确可靠，可用于苦瓜酒的质量控制。

紫外分光光度法；苦瓜皂苷；含量测定

苦瓜（Morrnordica charantia L.）为葫芦科植物，一年生攀缘草本。明代医药学家李时珍说：“苦瓜气味苦，寒，无毒，具有除邪热，解劳乏，清心明目之功效”。苦瓜不仅是蔬菜，也可药用，历来是备受广大消费者青睐的保健品，对机体无明显毒副作用〔1〕。苦瓜中的主要有效成分之一是苦瓜皂苷，主要包括甾体类皂苷和三萜类皂苷两种。现代医药学研究表明苦瓜皂苷具有降血糖、抗肿瘤、抗病毒、抗生育、抗菌、抗氧化和抗炎等作用〔2〕。近几年苦瓜被加工为低糖苦瓜蜜饯、苦瓜酸豆奶、苦瓜茶、苦瓜保健饮品、苦瓜啤酒等，其开发前景极为广阔。苦瓜在白酒中浸泡，其有效成分均可融于酒中。本论文通过测定苦瓜酒中总皂苷的含量，评价苦瓜酒质量，为苦瓜酒的进一步开发利用提供理论依据。

1 仪器与试剂

TU-1901型双光束紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）；电子天平（上海精密科学仪器有限公司）；人参总皂苷标准品（惠州市东方植物保健科技有限公司，批号：20070516，含量：98.0%）；β-谷甾醇标准品（南京泽朗医药科技有限公司，含量：98.0%）；冰乙酸，高氯酸，香草醛和乙醇均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 对照品溶液的配制

2.1.1 人参皂苷对照品溶液的配制精密称取干燥至恒重的人参皂苷对照品0.600 0 g置100 mL量瓶中，用无水乙醇溶解，定容，即得6 mg/mL对照品储备液。精密量取储备液5 mL至50 mL量瓶中，无水乙醇定容，即得0.6 mg/mL对照品溶液。

2.1.2 β-谷甾醇对照溶液的配制精密称取干燥至恒重的β-谷甾醇标准品0.290 0 g置100 mL量瓶中，用无水乙醇溶解，定容，即得2.9 mg/mL对照品储备液。精密量取储备液5 mL至50 mL量瓶中，无水乙醇定容，即得0.29 mg/mL的对照品溶液。

2.1.3 样品溶液制备将不同生长时间的苦瓜浸泡于约60%的食用白酒中，浸泡不同时间，编号分别为1号：200606，2号：20070715，3号：20070815，4号：20080826，5号：200906，6号：201007。

2.2 最大吸收波长的选择分别取人参皂苷对照液、β-谷甾醇对照液各0.2 mL，样品液0.3 mL置具塞试管中，水浴挥干溶剂，加5%的香草醛-冰乙酸溶液0.3 mL和高氯酸0.5 mL摇匀，于70℃水浴加热30 min，取出水浴冷却至室温，加冰乙酸5 mL摇匀，静置15 min。以试剂空白为参比，于390~750 nm波长范围内扫描，见图1。本研究确定人参皂苷对照品测定波长为548 nm，β-谷甾醇对照品测定波长为552 nm。

图1 光谱扫描曲线

2.3 试验条件考察本试验对高氯酸用量，5%香草醛-冰乙酸用量，水浴温度，水浴时间，冰乙酸用量和加冰乙酸后放置时间等6个因素进行考察〔3-5〕。

2.3.1 高氯酸用量考察样品按照“2.2”项下，依次加入0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0 mL高氯酸，处理后分别在548、552 nm测定吸光度值。从实验结果可知，在高氯酸用量为0.5 mL时，人参皂苷和β-谷甾醇对照液的吸光度均最高，故选择高氯酸用量为0.5 mL。

2.3.25 %香草醛-冰乙酸用量考察样品按照“2.2”项下，依次加入5%香草醛-冰乙酸溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6 mL，处理后分别在548、552 nm测定吸光度值。从实验结果可知，在5%香草醛-冰乙酸用量为0.3 mL时，人参皂苷和β-谷甾醇对照液的吸光度值均最大，故选择5%香草醛-冰乙酸用量0.3 mL。

2.3.3 水浴温度考察样品按照“2.2”项下，分别于室温40、50、60、70、80℃水浴加热15 min，处理后分别在548、552 nm测定吸光度值。从实验结果可知，人参皂苷对照液的吸光度值随水浴温度的增加而增加，而β-谷甾醇对照液在70℃时有最大吸收，为在相同条件下比较，本实验选择70℃的水浴温度。

2.3.4 水浴时间考察样品按照“2.2”项下，于70℃水浴加热5、10、15、20、25、30 min，处理后分别在548、552 nm测定吸光度值。从实验结果可知，β-谷甾醇对照液的吸光度值随水浴时间的增加而增加，人参皂苷对照液水浴15 min后吸光度值变化趋势不明显。为在相同条件下比较，本实验选择70℃水浴30 min后测吸光度值。

2.3.5 冰乙酸用量考察样品按照“2.2”项下，依次加冰乙酸3、4、5、6、7、8 mL，处理后分别在548、552 nm测定吸光度值。从实验结果可知，随冰乙酸体积的增加，人参皂苷和β-谷甾醇对照液的吸光度值均逐渐减小，5 mL后下降趋势较平缓，所以选择冰乙酸用量5 mL。

2.3.6 加冰乙酸后放置时间考察样品按照“2.2”项下，加冰乙酸5 mL摇匀，放置5、10、15、20、25、30 min，处理后分别在548、552 nm测定其吸光度值。从实验结果可知，在加冰乙酸放置15 min后人参皂苷和β-谷甾醇吸光度变化不大，故本实验选择加冰乙酸后放置15 min测吸光度。

由上述考察结果，本实验所用条件为：5%香草醛-冰乙酸溶液的用量0.3 mL，高氯酸的体积0.5 mL，70℃水浴加热30 min，冰乙酸的体积为5 mL，加冰乙酸后放置15 min测定吸光度。

2.4 标准曲线的绘制

2.4.1 人参皂苷标准曲线的绘制精密量取0.05、0.10、0.15、0.20、0.25、0.30、0.35、0.40 mL人参皂苷对照液，分别置10 mL具塞试管中，水浴挥干溶剂，照“2.2”项下方法处理并在548 nm处测定吸光度。以吸光度（Y）为纵坐标，质量（X）为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程为：Y=4.297 8X-0.014 4（r=0.999 1），线性范围为0.030~0.240 mg。

2.4.2 β-谷甾醇标准曲线的绘制精密吸取0.05、0.10、0.15、0.20、0.25、0.30、0.35、0.40 mL β-谷甾醇对照液，分别置10 mL具塞试管中，水浴挥干溶剂，照“2.2”项下方法处理并在552 nm处测定吸光度。以吸光度（Y）为纵坐标，质量（X）为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程为：Y=9.850 6X-0.013（r=0.999 3），线性范围为0.015~0.116 mg。

2.5 仪器精密度试验分别精密吸取0.2 mL人参皂苷对照液和β-谷甾醇对照液，照“2.2”项下处理后，分别在波长548、552 nm处连续测量6次，所得吸光度值RSD分别为0.10%，0.06%，结果表明仪器精密度良好。

2.6 显色稳定性试验分别精密吸取1号样品0.2 mL 6份，照“2.2”项下处理，分别在波长548、552 nm处，于5、15、30、60、90、120 min测吸光度，所得吸光度值RSD分别为2.3%，2.2%。结果表明样品在120 min内显色稳定。

2.7 重复性试验分别精密吸取1号样品0.2 mL 6份，照“2.2”项下处理，分别在波长548、552 nm处测吸光度，计算苦瓜皂苷含量。以β-谷甾醇为对照，样品含量为0.069 6 mg，RSD=0.72%；以人参皂苷为对照，样品含量为0.164 6 mg，RSD=0.83%。

2.8 回收率试验分别精密吸取1号样品0.1 mL，加入β-谷甾醇对照液、人参皂苷对照液各0.1 mL，照“2.2”项下处理后，分别在波长548、552 nm处测吸光度。结果见表1。

表1 回收率试验结果（n=6）

2.9 样品含量测定取各样品液适量，稀释后精密吸取0.2 mL置具塞试管中，水浴挥干溶剂，照“2.2”中的步骤进行。分别在548、552 nm测定吸光度值，结果见表2。

表2 样品含量测定（n=3）

3 讨论

3.1 显色方法的选择文献报道测定皂苷含量的显色方法主要有香草醛-浓硫酸法、浓硫酸法、香草醛-高氯酸法〔6-7〕。由实验考察可知，香草醛-浓硫酸法显色稳定性和精密度不优于其余两种方法；浓硫酸法虽显色稳定性好，但测定非纯皂苷含量时，其他成分可使皂苷含量结果误差较大；香草醛-高氯酸法对样品中糖、蛋白质等物质造成的误差较小。本实验测定苦瓜粗提物中总皂苷，未分离糖、蛋白质等干扰组分，因此采用香草醛-高氯酸显色法。

3.2 测定波长的选择分光光度法测定物质含量是较为广泛的方法，测定波长选择不当会导致测定结果不准确。本研究中人参皂苷对照品和β-谷甾醇对照品分别在548、552 nm处有最大吸收，而样品在558 nm有较大吸收。本研究以人参皂苷为对照品测定样品时波长为548 nm，以β-谷甾醇为对照品测定样品时波长为552 nm。

3.3 对照品的选择通过方法学考查，β-谷甾醇和人参皂苷均可作为测定苦瓜皂苷含量的对照品。从实验可知β-谷甾醇对照品的最大吸收波长与样品的最大吸收波长更接近，建议在测定苦瓜酒中皂苷含量时选择β-谷甾醇为对照品。

3.4 样品含量的差异从表2可知，苦瓜酒样品中皂苷含量有所差异，这与苦瓜的生长时间和浸泡时间长短等因素有关，不同生长时间对苦瓜皂苷的含量存在很大的影响，生长成熟的苦瓜皂苷含量最大。从实验可知苦瓜生长成熟后浸泡2年为最佳浸泡时间，超过最佳浸泡时间其含量逐渐降低。

〔1〕刘秀英，胡怡秀，马征，等.苦瓜醇提取物亚急性经口毒性研究〔J〕.中国热带医学，2010，10（5）：573-574.

〔2〕何启平.苦瓜的化学成分及综合利用〔J〕.河北农业科学，2009，13（2）：157-159.

〔3〕邓敏航，黄和，何碧银，等.苦瓜活性成分提取工艺研究〔J〕.广西热带农业，2010（5）：7-11.

〔4〕周婵媛，陈华国，周欣，等.紫外分光光度法测定吉祥草中的总皂苷〔J〕.华西药学杂志，2010，25（3）：344-346.

〔5〕黄敏珠，王栋，尹忠臣，等.紫外分光光度法测绞股蓝片中绞股蓝总苷的含量〔J〕.中国中药杂志，2010，35（18）：2410-2411.

〔6〕张中伟，谢明勇，王远兴，等.比色法测定苦瓜总皂苷〔J〕.南昌大学学报：理科版，2005，29（5）：447-449.

〔7〕李健，任惠峰，陈姝娟，等.微波辅助萃取苦瓜总皂苷工艺研究〔J〕.中国食品学报，2009，9（3）：78-82.

（责任编辑 袁霞）

Content Determination of Momordicoside in Morrnordica charantia L.Wine

CHEN Yanlan,YANG Yunchuan,WANG Chengjun,DENG Shuilai,ZHOU Ping*
（Dali University,Dali,Yunnan 671000,China）

Objective:To determine the content of the momordicoside in Morrnordica charantia L.wine.Methods:Vanillinperchloric acid colorimetry was applied to determine the contents of the total saponin in Morrnordica charantia L.wine,ginsenoside and β-sitosterol were used as the reference substance.Results:The concentration of ginsenoside had good linearity in the range of 0.030-0.240 mg（r=0.999 1）.The average recovery rate was 99.6%,RSD=2.5%（n=6）,the content of sample was 0.151 1-0.563 0 mg. The concentration of β-sitosterol had good linearity in the range of 0.015-0.116 mg（r=0.999 3）.The average recovery was 100.9%，RSD=2.6%（n=6）,the content of sample was 0.065 6-0.247 9 mg.Conclusion:β-sitosterol and ginsenoside are suitable for reference substance to determine the content of saponin in Morrnordica charantia L.wine.The method was accurate which could be used for the quality control of Morrnordica charantia L.Wine.

UV;momordicoside;contents determination

R931.6

A

1672-2345（2013）06-0023-04

10.3969/j.issn.1672-2345.2013.06.007

大理学院应用开发研究基金资助项目（KYYY200904）；大理市科技基金资助项目（DLKJ201001）

2013-01-11

2013-03-08

陈艳兰，教授，主要从事学位与研究生教育管理研究. *通信作者：周萍，教授.