儿童呼吸道嗜血杆菌感染耐药性分析

闫 涛 钱 香 楼正青 吴 琳 柴鸣雷 杭州市中医院 杭州310007

儿童呼吸道嗜血杆菌感染耐药性分析

闫 涛 钱 香 楼正青 吴 琳 柴鸣雷 杭州市中医院 杭州310007

儿童 嗜血杆菌 耐药性 β-内酰胺酶

嗜血杆菌（haemophilus）是一种苛养革兰氏阴性杆菌，主要存在呼吸道中，引起上呼吸道感染、脑膜炎及菌血症等感染性疾病[1]。呼吸道标本分离到的嗜血杆菌主要为流感嗜血杆菌（haemophilus influenzae，Hi）和副流感嗜血杆菌（haemophilus parainfluenzae，HP），在儿科病例中尤为常见，是儿童呼吸系统感染的一种主要病原菌之一。笔者对本院儿科Hi及HP分离及耐药情况做回顾性分析，报道如下。

1 材料与方法

1.1 一般资料 2012年1月—12月从本院儿科住院患者179份痰标本及82份咽拭子标本中共分离出57株嗜血杆菌，分离率为21.84%。其中流感嗜血杆菌（Hi）38株，来自男性患儿24例，平均年龄3.6岁；女性患儿14例，平均年龄3.9岁，男女比例1.7: 1。副流感嗜血杆菌（HP）19株，来自男性患儿10例，平均年龄3.8岁；女性患儿9例，平均年龄4.4岁，男女比例1.1:1。

1.2 试剂与仪器 试剂：哥伦比亚血琼脂平板、MH琼脂平板为自制。嗜血杆菌巧克力培养基、嗜血杆菌和布兰汉球菌药敏试剂盒（ATB HAEMO）、β-内酰胺酶纸片；仪器：ATB Expression，均购自法国梅里埃公司。

1.3 质控菌株 流感嗜血杆菌ATCC 49247及ATCC 49766，购自卫生部临检中心。

1.4 方 法 标本分离按卫生部检验操作规程进行。将痰及咽拭子标本直接接种于嗜血杆菌巧克力培养基中，在35℃、5%CO2条件下培养24h，挑取无色、透明、湿润的可疑菌落在血琼脂平板及MH琼脂平板做卫星试验。在血琼脂平板上生长、MH琼脂平板上不生长鉴定为Hi，血琼脂平板与MH琼脂平板同时生长则鉴定为HP[1]。将分离到的嗜血杆菌用ATB HAEMO进行药敏试验，并用β-内酰胺酶纸片检测β-内酰胺酶。

1.5 统计学方法 应用细菌耐药监测软件WHONET 5.6，耐药率采用χ2检验。

2 结 果

2.1 药敏结果 Hi耐药率（含中介敏感）较高的药物为复方新诺明、氨苄西林及头孢噻吩，耐药率分别为63.16%、50.00%和42.11%。HP耐药率（含中介敏感）较高的药物为复方新诺明、氨苄西林及头孢噻吩，耐药率分别为52.63%、21.05%和26.32%。Hi与HP对11种抗菌药物的耐药率，差异无统计学意义（P＞0.05），见表1。

表1 Hi与HP对11种抗菌药物的耐药率 株（%）

2.2 β-内酰胺酶检测结果 38株Hi中β-内酰胺酶阳性19株，占50.00%；19株HP中β-内酰胺酶阳性5株，占26.32%。19株耐氨苄西林的Hiβ-内酰胺酶均阳性，占100.00%；5株耐氨苄西林的HPβ-内酰胺酶均阳性，占100.00%。未发现β-内酰胺酶阴性的耐氨苄西林 Hi及 HP（β-lactamase-nagative and ampicillin-resistance，BLNAR）。

3 讨论

本研究采用卫星试验对Hi及HP进行鉴定。卫星试验的原理：有溶血性的细菌（如金黄色葡萄球菌）在羊血琼脂培养基上生长时可破坏红细胞释放出血红素（即X因子）和维生素B类物质（即V因子），而金黄色葡萄球菌在生长过程中能合成V因子释放于培养基中，当嗜血杆菌与金黄色葡萄球菌一起培养时，这些因子促进了嗜血杆菌的生长，表现为靠近金黄色葡萄球菌的嗜血杆菌菌落生长较大，而远离葡萄球菌菌落的嗜血杆菌菌落较小，这一现象称为“卫星现象”，这一试验也称为“卫星试验”。在不含血红素的琼脂平板（如MH琼脂平板）上进行卫星试验，因琼脂中不含X因子和V因子，当点种金黄色葡萄球菌后，在其菌落周围只含有V因子而没有X因子存在，因此那些X因子依赖性的嗜血杆菌（Hi）不能在金黄色葡萄球菌菌落周围生长，而V因子依赖性的嗜血杆菌（HP）则会生长[2]。林晓梅等[3]的研究证实，该方法与微生物自动分析系统的鉴定结果符合率为100%。

从药敏结果来看，嗜血杆菌耐药率较高的药物为复方新诺明、氨苄西林及头孢噻吩。近年来，嗜血杆菌对氨苄西林的耐药率有所升高，而且呈现出明显的地区差别。长期以来，阿莫西林、氨苄西林是治疗嗜血杆菌感染最常用的首选药物，1972年嗜血杆菌对氨苄西林耐药首次在欧洲被报道，随后全世界均有报道。而在本院儿科呼吸道感染患儿中的耐药率高达42.1%。因此，不建议使用氨苄西林作为治疗嗜血杆菌感染的首选药物，而建议使用二代、三代头孢为治疗嗜血杆菌感染的首选药物。鉴于头孢菌素易引发I型超敏反应，四环素、氯霉素有较大的副作用，以及喹诺酮类抗菌药物对儿童生长发育的影响，临床医师可选用大环内酯类抗生素如克拉霉素进行治疗。文献[4]报道，克拉霉素对嗜血杆菌有极高的抑菌率。

产生β-内酰胺酶是嗜血杆菌对氨苄西林的主要耐药机制[5]。β-内酰胺酶使氨苄西林水解进而失活而使其丧失杀菌能力。常见的β-内酰胺酶有TEM-1和ROB-1型，其中最常见的是TEM-1型[6]。本研究分离到的Hi及HP耐氨苄西林机制仍然是产生β-内酰胺酶，未发现β-内酰胺阴性的耐氨苄西林Hi及HP。

［1］倪语星，尚红.临床微生物学与检验［M］.第4版.北京：人民卫生出版社，2007：175-178.

［2］东科，孙长贵.实用临床微生物学检验与图谱［M］.北京：人民卫生出版社，2011：473.

［3］林晓梅，周铁丽，李超.仪器法和手工法对副流感嗜血杆菌鉴定和分型的结果比较［J］.上海医学检验杂志，2003，18（2）：72-74.

［4］郭玉芬，张美和，甄景慧，等.嗜血杆菌在儿科的检出特点及药敏研究［J］.中华医院感染学杂志，2001，11（6）：475-477.

［5］Tristram S，Jacobs MR，Appelbaum PC.Antimicrobial resistance in haemophilus influnenzae［J］.Clinical Microbiology Reviews，2007，20（2）：368-369.

［6］桂和翠，王中新，沈纪录.流感嗜血杆菌的耐药性及耐药机制［J］.安徽医药，2011，15（12）：1471-1474.

2013-06-15