鱼腥草稳定性实验中挥发油变化情况的研究

何俊婷王晓博曹爱兰* 翟 帆惠选柱王景峰

（1 陕西新药技术开发中心，陕西 西安 710075；2 陕西中药研究所，陕西 西安 710075；3 陕西医药控股集团山海丹制药有限责任公司，陕西 西安 710075）

鱼腥草稳定性实验中挥发油变化情况的研究

何俊婷1王晓博1曹爱兰2* 翟 帆1惠选柱3王景峰3

（1 陕西新药技术开发中心，陕西 西安 710075；2 陕西中药研究所，陕西 西安 710075；3 陕西医药控股集团山海丹制药有限责任公司，陕西 西安 710075）

目的 研究鱼腥草药材中挥发油量和甲基正壬酮含量随时间变化的规律，为确定鱼腥草适宜的贮藏条件及期限提供科学依据。方法 采用加速和长期稳定性实验考察鱼腥草的稳定性，测定不同贮藏时期鱼腥草中挥发油含量，并采用气相色谱法测定鱼腥草中甲基正壬酮的含量。结果 经加速试验，鱼腥草挥发油含量降幅低于3.85%，甲基正壬酮含量下降4.06%～4.76%。经长期稳定性试验，甲基正壬酮含量下降3.25%～4.76%，挥发油下降1.20%～1.28%。结论 经稳定性实验，鱼腥草中挥发油量和甲基正壬酮含量在考察期内均略有降低，但未发生显著变化。

鱼腥草；稳定性；挥发油；甲基正壬酮

鱼腥草是三白草科植物蕺菜 Houttuynia cordata Thunb.的新鲜全草或干燥地上部分。具有清热解毒，排脓消痈，利尿通淋功能[1]。挥发油是鱼腥草的有效成分之一[2]，通过水蒸气蒸馏得到的挥发油为药效成分的制剂有鱼腥草注射液、鱼金注射液等，广泛应用于消炎抗菌。因挥发油成分的不稳定性，药材的采收、加工、贮藏对其含量影响较大。而药材是药品的源头，原料药质量直接保证终产品的质量，从而影响药品的安全性。鱼腥草药材的挥发油成分的控制研究较少，注射液生产企业使用该原料时缺乏原料选择及贮藏依据，给产品埋下了安全隐患。2006年，国家药品不良反应中心因鱼腥草类制剂的不良反应问题，暂停了7个鱼腥草类制剂的使用，并停止受理和审批其各类制剂的注册申请。为恢复该类产品的生产[3]，保证鱼腥草类注射剂安全、可靠、稳定、可控，企业做了大量的研究工作，首要任务就是控制原料的质量。笔者通过气相色谱法检测甲基正壬酮含量[4]，将其作为指标性成分，对鱼腥草药材加工及储藏过程中挥发油的稳定性进行考察。

1 仪器与试药

1.1 仪器

电子分析天平（AG-135，德国梅特勒）；岛津GC-17A气相色谱仪；PEG毛细管柱（30m×0.25mm×0.25μm）；水分测定管，挥发油提取器，冷凝装置，圆底烧瓶（西安玻璃仪器厂）；WD-A药物稳定性检查仪（天津药典标准仪器厂）。

1.2 试药

干鱼腥草（三白草科植物蕺菜Houttuynia cordata Thunb.干燥地上部分，陕西汉中城固县）；甲基正壬酮（111640-201005，中国药品生物制品检定所）；乙酸乙酯（分析纯，天津市富宇精细化工有限公司）

2 方法与结果

2.1 鱼腥草药材的采收与干燥

鱼腥草2009年9月5日采自陕西汉中城固县，晴天采收，用刀具割取地上部分植株或用手直接拔取地上部分。采收后的药材除去杂质,抖净泥沙，清洗。干燥条件为室温条件下（温度为25℃左右）自然干燥。

2.2 挥发油量测定

取干鱼腥草约300g置圆底烧瓶中，加8倍药材量的水，摇匀。连接挥发油测定装置，回流提取6h，按规定[6]方法操作读取挥发油量。

2.3 甲基正壬酮含量测定

2.3.1 样品处理

精密称取干鱼腥草25g，置圆底烧瓶中，加水250mL，连接挥发油测定器，自测定器上端加水使充满刻度部分，再加乙酸乙酯约3mL，连接回流冷凝管。加热回流2h，停止加热，放置片刻，分取乙酸乙酯层，测定器再用乙酸乙酯洗涤3次，每次1mL，合并洗涤液，定量转移至10mL量瓶中，并加乙酸乙酯稀释至刻度，摇匀。

2.3.2 对照品溶液制备

精密称定甲基正壬酮对照品108.6mg，置于100mL容量瓶中，加乙酸乙酯定容至刻度，制成每1mL中含1.088mg的溶液，作为对照品溶液。

2.3.3 色谱条件及系统适用性试验

以聚乙二醇（PEG）—20M为固定液，涂布浓度为10%；柱温（120±5）℃；进样口温度230℃；检测器温度230℃；分流比为5∶1；程序升温：初始120℃，保持15min，以每分钟5℃升至170℃，保持10min；进样量为4μL；理论板数按甲基正壬酮峰计算，应不低于1000。

2.4 方法学考察

2.4.1 线性关系考察

精密吸取对照品溶液，配置成甲基正壬酮浓度分别为0.034，0.068，0.136，0.272，0.544，1.088mg/mL的对照品梯度溶液，进样，以色谱峰面积和浓度进行分析。表明，甲基正壬酮在浓度为0.034～1.088mg/mL范围内，线性关系良好，线性回归方程为：Y=414.99X-32.12，r=0.9998。

2.4.2 精密度实验

精密吸取同一对照品溶液，按2.3.3色谱条件重复进样5次，通过峰面积计算，得到甲基正壬酮峰面积的RSD为0.94%，表明所用仪器精密度良好。

2.4.3 稳定性实验

取供试品溶液一份，按2.3.3方法，分别于0，2，4，6，8，10，12，24h进样，测得峰面积计算RSD为1.38%，表明该样品在24h内稳定性良好。

2.4.4 重复性实验测

精密取同一批样品（批号100901）5份，按2.3.1方法制备供试品，按2.3.3测定，测定甲基正壬酮平均含量为105μg/g，RSD为1.86%。

2.4.5 加样回收率实验

取已知甲基正壬酮含量的同一批供试品溶液（批号：100901）5份，分别加入对照品适量，混合均匀，测定其中甲基正壬酮峰面积，计算回收率，结果甲基正壬酮平均加样回收率为97.82%，RSD为1.84%。

2.5 稳定性试验

取三个批号（100901、100902、100903）干鱼腥草药材对其进行加速和长期稳定考察[5]。

2.5.1 加速稳定性试验

将鱼腥草药材在40℃±2℃，相对湿度75%±5%条件下储藏6个月，湿度调节选择NaCl饱和溶液（15.5～60℃，RH75%±1%）。在试验期间第0、1、2、3、6个月末取样检测。

经6个月加速试验后，鱼腥草外观无变化，挥发油含量有略微降低（表1），变化率低于3.85%。测定鱼腥草中甲基正壬酮含量（表2），发现其随着贮藏时间延长，含量降低，降幅为4.42%～4.76%。

表1 加速稳定性试验鱼腥草中挥发油含量（%）

表2 加速稳定性试验鱼腥草中甲基正壬酮含量（μg/g）

2.5.2 长期稳定性研究

取三个批号（100901、100902、100903）的干鱼腥草贮存在温湿度控制为25℃±2℃，RH 60%±10%环境下，分别与0、3、6、9、12、18个月取样测定。经18个月长期稳定性试验，测定各阶段鱼腥草中甲基正壬酮含量（表3），结果显示，三个批次样品含量均有一定幅度的降低，最大降幅为4.76%。鱼腥草的挥发油量有较小幅度的降低（表4），变化率低于1.28%。贮藏期限内药材外观无虫蛀、无霉变。

4 讨 论

本文针对鱼腥草存储期间挥发油的变化进行考察。三个批次鱼腥草药材在40℃±2℃，相对湿度75%±5%条件下储藏6个月，其挥发油和甲基正壬酮含量均发生降低，但未发生显著变化，100901批甲基正壬酮降幅最大，为4.76%（＜5%），说明鱼腥草中的挥发油对超常环境条件相对较为稳定。

表3 长期稳定性试验中甲基正壬酮含量（μg/g）

表4 长期稳定性试验挥发油含量（%）

长期稳定性试验，各检验期内挥发油量变化率为1.20%～1.28%，甲基正壬酮含量变化率3.25%～4.76%，二者均＜5%。对比各检测月的气相色谱图，图谱均相似度较高，图谱未见随月份变化发生明显变化。说明鱼腥草在2年有效期内常规条件下贮藏较为稳定。

虽然鱼腥草中挥发油量和甲基正壬酮在考察期内未发生显著变化，但因其含量均随时间有所降低，如将鱼腥草挥发油为主要药效成分的制剂，为防止制剂因原料中有效成分含量的改变而不稳定，建议将其储存在阴凉、干燥处，贮藏期限不宜过长，如经长期储藏过的原料投料前须进行检验。

[1] 中国药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:中国医药科技出版社,2010:208.

[2] 顾静蓉,冯丽丽,罗建伟,等.鱼腥草的药理作用及临床应用新进展[J].海峡药学,2006,8(4):121.

[3] 国家食品药品监督管理局就鱼腥草注射液等7个注射液作出进一步决定:分步骤分阶段有条件的恢复使用[J].中国食品药品监管,2006(10):7.

[4] 彭家敏,李可鹏,晁若冰.鱼腥草注射液中3种主要挥发性成分的测定[J].华西药学杂志,2009,24(4):396-397.

[5] 国家食品药品监督管理局.中药、天然药物稳定性研究技术指导原则[Z].国食药监注[2006]678号.

[6] 中国药典委员会.中华人民共和国药典附录ⅩD(一部)[M].北京:中国医药科技出版社,2010:附录63.

R932

B

1671-8194（2013）26-0062-02

陕西省科技统筹创新工程计划项目(编号：2011KTCG03-03)

*通讯作者：