正交试验优化香菇多糖热水浸提工艺

李 博 朱俊访

（广东食品药品职业学院，广东 广州 510520）

正交试验优化香菇多糖热水浸提工艺

李 博 朱俊访

（广东食品药品职业学院，广东 广州 510520）

利用正交试验优化香菇多糖热水浸提工艺，以提取时间、提取温度、料液比和醇析乙醇量为影响因素，在单因素实验的基础上，设计L9（34）试验。实验结果表明，热水浸提香菇多糖的最佳工艺为：浸提时间为90min、时间为80℃、料液比为1∶45、醇析乙醇量为1∶3，在此条件下多糖得率为24.88%。

正交试验；香菇多糖；提取工艺

香菇（Lentinula edodes）又名香蕈、冬菇，是世界第二大食用菌，具有多种活性成分，尤其是香菇多糖，是一种免疫增强剂，具有抗病毒、抗肿瘤和调节免疫功能[1]。香菇多糖主要的提取方法有热水浸提法、酸浸提法、碱浸提法、微波法、复合酶解法、加压提取法和超声波辅助提取法等[2]。本研究采用热水浸提法提取香菇多糖，并对提取时间、提取温度、料液比和醇析乙醇量进行分析，优化工艺条件。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

香菇：市售，干燥后粉碎过60目筛备用。试剂：均为国产分析纯。电子天平：AUY120，岛津。离心机：TD6-WS型，长沙平凡仪器仪表有限公司。分光光度计：UV2600，尤尼科仪器有限公司。

1.2 实验方法

1.2.1 香菇多糖提取[3]

取一定量的香菇粉末，按照实验设计的浸提时间、浸提温度、料液比进行热水浸提，然后抽滤，加入实验设计的乙醇的量进行醇析，5℃冷冻过夜。醇析液于常温4000r/min离心10min，得香菇粗多糖。

1.2.2 单因素实验设计

称取1g香菇粉末，按浸提时间、浸提温度、料液比和醇析乙醇的量分别进行单因素试验，以确定各因素最佳浸提条件。利用单因素试验结果，设计正交试验，优选出香菇多糖提取的最佳浸提工艺条件。

1.2.3 葡萄糖标准溶液配制

精密称取1g经105℃干燥至恒重的葡萄糖，定容至100mL容量瓶，得到10mg/mL的储备液。准确吸取1mL储备液至100mL容量瓶，加水至刻度，得0.1mg/mL葡萄糖的标准溶液。

1.3 测定与计算

1.3.1 葡萄糖标准曲线制备[4，5]

精密吸取0mL、0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL、1.2mL葡萄糖标准溶液至10mL具塞试管，加蒸馏水至2mL，分别加入5%苯酚1mL，98%硫酸5mL，摇匀静置30min，于489nm测定吸光度。以葡萄糖浓度为横坐标，吸光值为纵坐标，绘制标准曲线，见图1。

图1 葡萄糖标准曲线

1.3.2 香菇多糖测定

取香菇多糖进行稀释，精密吸取2mL稀释液，分别加入5%苯酚1mL，98%硫酸5mL，摇匀静置30min，于489nm测定吸光度。

1.3.3 计算香菇多糖得率。

2 结果与分析

2.1 单因素试验设计[6]

2.1.1 浸提温度对香菇多糖得率的影响

设定浸提时间为90min，料液比为1∶60，醇析乙醇使用量为1∶3，分别选择浸提温度为50℃、60℃、70℃、80℃、90℃，进行单因素试验，测定吸光度，计算多糖得率见图2。随温度的升高，多糖得率逐渐升高。

2.1.2 浸提时间对香菇多糖得率的影响

设定浸提温度为80℃，料液比为1∶60，醇析乙醇使用量为1∶3，分别选择浸提时间为60min、75min、90min、105min、120min，进行单因素试验，测定吸光度，计算多糖得率，见图3。浸提时间在90min前多糖得率逐渐提高，90min后开始降低。

2.1.3 料液比对香菇多糖得率的影响

设定浸提时间为90min，温度为80℃，醇析乙醇使用量为1∶3，分别选择料液比为1∶30、1∶45、1∶60、1∶75、1∶90，进行单因素试验，测定吸光度，计算多糖得率，见图4。料液比在1∶60为多糖得率最高，料液比增加或减少多糖得率都降低。

图2 浸提温度对香菇多糖得率的影响

图3 浸提时间对香菇多糖得率的影响

图4 料液比对香菇多糖得率的影响

2.1.4 醇析乙醇量对香菇多糖得率的影响

设定提时间为90min，温度为80℃，料液比为1∶60，分别选择醇析乙醇使用量为1∶2、1∶2.5、1∶3、1∶3.5、1∶4，进行单因素试验，测定吸光度，计算多糖得率，见图5。多糖得率随乙醇用量的增加而升高，超过1∶3后开始降低。

图5 醇析乙醇量对香菇多糖得率的影响

2.2 热水浸提正交试验

根据单因素试验结果，以提取温度、提取时间、料液比和醇析乙醇量为四个因素，设计L9（34）试验，见表1。正交试验结果见表2。

表1 热水浸提法正交试验设计

表2 热水浸提法正交试验结果

由表2可知，各因素对多糖得率影响顺序为：浸提温度＞醇析乙醇量＞料液比＞浸提时间，A3B2C1D2为浸提香菇多糖的最佳工艺，即浸提时间为90min、时间为80℃、料液比为1∶45、醇析乙醇量为1∶3。此工艺不在正交表的9个工艺中，使用此条件进行验证试验，香菇多糖得率为24.88%。

3 结 论

本文使用热水浸提法提取香菇多糖，选择提取时间、提取温度、料液比和醇析乙醇量4个条件进行单因素试验，并在单因素试验的基础上通过正交试验确定了香菇多糖热水浸提的最佳工艺条件：提取时间90min、提取温度80℃、料液比1∶45和醇析乙醇量1∶3。

[1] 林楠,钟耀广,王淑琴,等.香菇多糖的研究进展[J].食品研究与开发,2007,28(5):174-176.

[2] 朱俊访,李博.香菇多糖提取工艺的研究进展[J].中国民族民间医药,2012,21(1):43.

[3] 魏桢元,钟耀广,刘长江.响应面优化法对香菇多糖提取的工艺研究[J].辽宁农业科学,2010(2):11-14.

[4] 刘洁,吴馨.鲜香菇中香菇多糖含量测定方法的研究[J].科技创业家,2012,(9):230-231.

[5] 钟方晓,任海华,李岩.多糖含量测定方法比较[J].时珍国医国药,2007,18(8):1916-1917.

[6] 王俊颖,都凤华,陈甜甜,等.香菇多糖超声波提取工艺的的研究[J].食品与发酵科技,2010,47(3):96-99.

R9

B

1671-8194（2013）26-0063-03