可舒胶囊对酒精性肝损伤大鼠血清中NF-κB和TNF-α的影响

曾 明，王金萍，丁媛媛，王占庆，邸晓辉

(本文编辑:张仲书; 英文编辑:王建东)

可舒胶囊是以李东垣《脾胃论》中的葛花解酲汤为基础方，由我院研制的中药复方制剂，具有解酒、降脂、保肝等作用，临床应用效果确定。前期实验发现，可舒胶囊可通过抗脂质过氧化反应防治酒精性肝损伤［1-2］，但其作用机制尚不明确。核转录因子 NF-κB(nuclear transcription factor-Kappa B，NF-κB)是一种核细胞基因转录中重要的调控因子，是应激与炎性反应的中枢调节物［3-4］。由于NF-κB是调控多种细胞因子基因表达的枢纽，它在酒精性肝损伤中的作用备受关注［5］。肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)是一个重要的促炎因子和免疫调节因子，肝脏是TNF-α的重要靶器官。TNF-α主要由肝脏激活的枯否细胞产生，并作为一个关键因子参与酒精性肝损伤的发生与发展［6-7］。本研究拟观察可舒胶囊对大鼠急性酒精性肝损伤血清中NF-κB和TNF-α水平的影响，探讨酒精性肝损伤防治机制，为可舒胶囊临床应用提供实验资料和理论依据。

1 材料与方法

1.1 实验材料 健康雄性Wistar大鼠50只，体重150～200 g，由中国医学科学院动物繁殖场提供(合格证号：SCXK11-00-0006)。高脂饲料：标准饲料加1%胆固醇、10%玉米油、5%猪油制成，由中国医学科学院动物繁殖场提供。白酒红星牌56°，北京红星二锅头股份有限公司生产。可舒胶囊：北京军区临床药物研究所自制，0.5 g/粒，批号080822，使用时用0.5% 羧甲基纤维素(CMC-Na)配制。另附TNF-α试剂盒和NF-κB试剂盒(南京建成生物工程研究所)、日立7150型全自动生化分析仪(日本)、MK型酶标仪(芬兰)等。

1.2 实验方法

1.2.1 分组与给药 大鼠适应性喂养1周后，将50只大鼠随机分为5组：正常对照组、模型组、并将可舒胶囊干预组根据临床剂量按体表面积换算，按生药计量，分低剂量组(3.06 g/kg)、中剂量组(6.12 g/kg)、高剂量组(12.24 g/kg)，每组10只。模型组和可舒胶囊干预组：每日上午灌饮56°白酒，每天24 g/kg，下午分别灌胃0.5%CMC-Na及不同剂量的可舒胶囊，喂高脂饲料；正常对照组：每日上午灌胃生理盐水，下午灌胃0.5%CMC-Na，给予正常饲料。给药量均为1 ml/100 g，连续14 d。

1.2.2 标本采集 各组大鼠在最后一次给药后禁食12 h，25%乌拉坦腹腔注射麻醉，无菌消毒下分离颈主动脉插管取血，离心半径8 cm，3000 r/min离心10 min，分离血清，-20℃保存，以备测定之用。

1.2.3 酶学测定 取大鼠血清，全自动生化分析仪测定丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸转移酶(AST)。

1.2.4 血清TNF-α和血清NF-κB的测定 严格按照试剂盒说明书进行操作。

1.3 统计学处理 应用SPSS 11.5软件包进行统计分析，计量资料以均数±标准差()表示，先进行方差齐性检验，满足“方差齐”要求的数据资料用单因素方差分析，组间比较采用LSD法，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 一般情况观察 正常对照组大鼠，食欲佳，被毛光滑，精神状态好，体重增加。模型组大鼠精神萎靡，活动减少，食欲减退，皮毛无光泽，体重较前有所下降。可舒胶囊各干预组大鼠精神、食欲及活动状态介于正常对照组与模型组之间。

2.2 血清ALT、AST值的比较 模型组与对照组比较血清ALT和AST值均明显升高，差异有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05)；可舒胶囊干预组与模型组比较血清ALT和AST值均降低，差异有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05，表1)。

表1 各组大鼠血清ALT、AST值的比较()

表1 各组大鼠血清ALT、AST值的比较()

注：与正常对照组比较，*P＜0.05，＊＊P＜0.01；与模型组比较，#P＜0.05，##P＜0.01

2.3 血清TNF-α和NF-κB含量的测定 与对照组相比，急性酒精性肝损伤大鼠血清中的 NF-κB和TNF-α水平均明显升高(P＜0.01)。与模型组比较，可舒胶囊干预组，血清NF-κB和TNF-α含量明显降低(P＜0.01，表2)。

表2 各组大鼠血清NF-κB与TNF-α水平比较()

表2 各组大鼠血清NF-κB与TNF-α水平比较()

注：与模型组比较，*P＜0.01；与正常对照组比较，#P＜0.01

3 讨论

酒精性肝病在我国的发病率逐年上升，严重危害人们的健康。血清转氨酶水平是临床反映肝细胞损伤的敏感指标。本实验模型组的ALT和AST较正常对照组明显升高，说明酒精和高脂饲料叠加所诱导的酒精性肝损伤造模成功。

酒精性肝损伤的致病因素为长期大量的酒精摄入。但其发病机制尚不完全清楚。研究证实，长期酒精摄入可以使肝组织中NF-κB活化，活化后的NF-κB进入细胞核内与多种炎症因子启动子区域中κB 序列结合，促进炎症细胞因子(TNF-α、L-1、IL-2、IL-6等)、黏附分子以及NO合酶等的转录，引起肝细胞的进一步炎症、坏死、凋亡和纤维化形成［8-10］。此外，酒精在肝脏中代谢产生了大量自由基，当超出了机体的清除能力，则可抑制脂肪酸氧化，使肝内脂肪蓄积，又可导致肝细胞膜脂质过氧化，造成肝细胞损伤。同时，这些活性氧会使内毒素水平升高，炎症介质释放，这些物质又都可以使NF-κB活化，进而产生大量炎性介质，发挥炎性级联放大作用，加重肝脏损害［11］。

TNF-α是最关键的促炎介质，对NF-κB的活化起正反馈调节作用，它既是NF-κB的激活物，也是其激活后的产物。TNF-α一方面具有直接的细胞毒作用，引起肝细胞坏死，另一方面又可引起微循环障碍导致肝细胞坏死，同时，还与其他炎性因子如IL-6相互激发，引起级联放大反应，进一步加重肝损伤。

中医药治疗酒精性肝损伤可以从多环节、多靶点调节机体生理平衡，且不良反应相对较小，近年来已逐渐得到认可［12］。本实验结果表明，经可舒胶囊干预可抑制肝损伤造成的转氨酶升高。可舒胶囊临床用于治疗酒精性肝损伤疗效明确。与对照组相比，急性酒精性肝损伤大鼠血清NF-κB和TNF-α含量明显升高，引起炎性损伤。与模型组相比，应用可舒胶囊后，各剂量组血清中NF-κB和 TNF-α水平含量明显降低，且呈一定的剂量反应关系。通过抑制NF-κB的激活，减少炎症因子的释放，发挥抗炎及抗凋亡作用，从而有效防治酒精诱导的肝脏损伤，改善肝功能指标可能是可舒胶囊防治酒精性肝病的作用机制之一。

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