无氮饲粮法与饥饿法对测定扬州鹅内源性氨基酸排泄量的影响

蒋银屏 王志跃 周春江 杨海明

(扬州大学动物科学与技术学院，扬州 225009)

家禽饲粮中氨基酸消化率的测定方法很多，目前普遍采用体内消化率试验法。Sibbald的真代谢能法是目前测定家禽饲粮氨基酸消化率的主要方法。测定过程中家禽是否去盲肠以及内源性氨基酸测定方法的不同会影响测定结果的可靠性。随着动物氨基酸营养研究越来越深入，国外学者发现，经过内源矫正的饲粮可消化氨基酸比总氨基酸和表观可消化氨基酸具有更好的可加性和重复性［1－2］。家禽采用可消化氨基酸营养体系是必然趋势。对于氨基酸表观消化率和氨基酸真消化率，内源性氨基酸的准确估计是测定饲粮氨基酸消化率的关键。内源性氨基酸的损失是动物生长过程中不可避免的，研究表明，一定条件下，同种动物有一相对稳定的内源性氨基酸基本排泄量［3－4］。目前测定鹅内源性氨基酸排泄量的方法主要有:无氮饲粮法、饥饿法、回归法、肌基蛋白质法、同位素示踪法、一次注射法和无氮饲粮+假定可100%吸收氮源法等。其中，最常用的方法是无氮饲粮法和饥饿法。根据这2种不同的方法，不同学者在不同的家禽上得出不同的结论。国外学者得出的结论表明，2种方法测定的内源性氨基酸排泄量差异不显著［5－6］;而国内的学者得出用无氮饲粮法测定的内源性氨基酸排泄量显著高于饥饿法的结论［7－8］。另外，对于是否应该将盲肠切除，有些研究者认为盲肠切除后，试验禽处于一种非正常生理状态，所以主张不切除盲肠。但是由于禽类盲肠内栖居着大量微生物，为减少盲肠内微生物对氨基酸消化率的干扰，提出了测定饲粮氨基酸消化率时应切除盲肠的观点［9－10］。因此，为了使可消化氨基酸营养体系尽早为我国家禽饲养标准所采用，本试验旨在通过无氮饲粮法和饥饿法测定正常鹅与去盲肠鹅内源性氨基酸排泄量，就2种方法测定值的差异作一比较，为合理配制鹅饲粮提供参考。

1 材料与方法

1.1 试验饲粮

试验饲粮为无氮饲粮，其组成及营养水平见表1。

表1 试验饲粮组成及营养水平(风干基础)Table 1 Composition and nutrient levels of the experimental diet(air-dry basis) %

1.2 试验设计与饲养管理

选择体况良好、体重基本一致的成年扬州鹅公鹅12只，随机分成2组，饲养于不锈钢代谢笼中，每笼1只。其中1组已施行盲肠切除手术，术后恢复4周，且恢复良好。试验前2周驱虫，每2天环境消毒1次。

试验分2期，分别用无氮饲粮法与饥饿法测定内源性氨基酸排泄量，第1期试验结束后，试验鹅休整9 d，试验前与试验结束后将每只鹅的体重都进行称量并记录，当体重达到试验前水平即可进行第2期试验。

代谢试验采用24 h禁食+24 h全收粪法。无氮饲粮法是在正式试验前，试验鹅禁食24 h，自由饮水。随后，每只鹅用漏斗与PVC管做成的强饲器强饲无氮饲粮60 g/只，收集24 h内试验鹅的排泄物，期间正常供水。饥饿法是在试验鹅禁食24 h之后，继续禁食24 h，收取后24 h的排泄物，期间试验鹅正常饮水。收集好的排泄物置于直径20 cm玻璃皿中，60℃鼓风干燥至恒重，自然状态下回潮24 h后称重，粉碎，装入样品袋密封后，于－20℃保存，待测。

1.3 样品分析

风干粪样经过酸水解初处理后，采用PITC柱前衍生高效液相色谱法(日本岛津LC－15C高效液相色谱仪)测定氨基酸(不包括色氨酸)含量。

1.4 数据处理与统计

试验数据采用 Excel 2007进行整理，SPSS 13.0软件one-way ANOVA程序进行方差分析和t检验。

2 结果

2.1 无氮饲粮法与饥饿法对正常鹅与去盲肠鹅24 h内源物排泄量的影响

从表2可以看出，无氮饲粮法测得的内源物排泄量去盲肠组高于正常组(P＞0.05)，饥饿法测得的内源物排泄量去盲肠组略低于正常组(P＞0.05);2种测定方法测得的内源物排泄量，无论是在正常组间还是去盲肠组间，差异均不显著(P＞0.05)。

2.2 无氮饲粮法与饥饿法测定正常鹅与去盲肠鹅24 h内源性氨基酸排泄量

从表3可以看出，同一测定方法的组间比较，饥饿法测定内源性氨基酸排泄量时，除天冬氨酸和缬氨酸在正常组和去盲肠组间差异显著(P＜0.05)外，其他各氨基酸组间差异均不显著(P＞0.05)。无氮饲粮法测定内源性氨基酸排泄量时，正常组的精氨酸极显著低于去盲肠组(P＜0.01)，丝氨酸、亮氨酸和苯丙氨酸显著高于去盲肠组(P＜0.05)，其他氨基酸组间差异不显著(P＞0.05)。

饥饿法与无氮饲粮法之间的比较，在正常组，无氮饲粮法测定的内源性氨基酸排泄量中，除组氨酸(P＞0.05)外，其他氨基酸均极显著高于饥饿法(P＜0.01)。在去盲肠组，无氮饲粮法测得的内源性氨基酸排泄量中，除胱氨酸(P＞0.05)外，其他氨基酸均极显著高于饥饿法(P＜0.01)。

表2 无氮饲粮法与饥饿法测定正常鹅与去盲肠鹅24 h内源物排泄量的比较Table 2 Comparison of the amount of endogenous excreta in 24 h in intact and caecectomized geese determined by nitrogen-free diet method and fasting method g/bird

表3 无氮饲粮法与饥饿法测定正常鹅与去盲肠鹅24 h内源性氨基酸排泄量Table 3 Endogenous amino acid losses in 24 h in intact and caecectomized geese determined by nitrogen-free diet method and fasting method mg/bird

3 讨论

3.1 无氮饲粮法与饥饿法测定正常鹅与去盲肠鹅内源性氨基酸排泄量的比较

无氮饲粮法与饥饿法较其他测定家禽内源性氨基酸排泄量的方法有明显的优势:操作简单、成本较低，目前仍是测定家禽内源性氨基酸排泄量的经典和常用方法。但是关于这2种方法的报道并不一致。Likuski等［5］报道，采食玉米淀粉的无氮饲粮法和饥饿法，公鸡内源性氨基酸排泄量无显著差异;Sibbald［11］也得出相似结论，认为2种方法都可用于饲粮真氨基酸消化率的测定;Green等［6］研究了公鸡对玉米、小麦、大麦中氨基酸的消化率，无氮饲粮法测得的原料中氨基酸的表观利用率和真利用率在去盲肠组和正常组之间差异不显著。李峰娟等［12］发现，无氮饲粮法和饥饿法测定的多种内源性氨基酸排泄量存在显著或极显著差异，无氮饲粮法测定的内源性氨基酸排泄量显著高于饥饿法，试验结果与望丕县等［13］、Parsons［14］、秦学忠等［15］研究结果相似。

Ravindran等［16］研究表明，无氮饲粮法测定内源性氨基酸排泄量具有一定优势。首先，饥饿法测定时，由于试验动物缺乏食物，加重了消化道及胃黏膜表层的脱落，加上试验动物在饥饿过程中内分泌重吸收增加，低估了内源性氨基酸的损失量。其次，无氮饲粮提供一定采食量并含有纤维素，纤维素具有很强的持水能力，强饲后试验动物饮水就会增加，这可以加快饲粮通过肠道，从而降低养分的消化、吸收;另一方面纤维素能包裹住氨基酸及肽，进而阻止了氨基酸的重吸收［17］。纤维素还有一定的摩擦作用，增加肠壁细胞的脱落和消化酶的分泌，从而使试验动物的内源性氨基酸排泄量增加。另外，纤维素和无氮饲粮提供的碳水化合物能一起促进细菌氨基酸的合成［18］。因此，试验动物采食无氮饲粮后，内源性氨基酸排泄量加大。

在本试验中，无论去盲肠与否，饥饿法得到的所有内源性氨基酸排泄量都小于无氮饲粮法。本试验结果表明，对于鹅来说，饥饿法比较好，这是由于以下3点原因:1)本试验中无氮饲粮法测定的内源性氨基酸排泄量测值标准差较大，这说明使用无氮饲粮法时，试验鹅个体间内源性氨基酸排泄量测值变异较大。2)无氮饲粮法测得的内源性氨基酸的排泄量受饲粮中纤维类型、纤维结构、纤维水平等诸多因素的影响。3)无氮饲粮配方使用的原料因为含氮量极低，被认为“无氮”，并非绝对不含氮，检测无氮饲粮会发现其中有不到0.01%的粗蛋白质，但这些微量蛋白质很可能并未被机体吸收而全部进入排泄物中成为测定的内源性氨基酸的组成。所以，采食无氮饲粮后，机体内源性氨基酸损失加大，测定结果较高。

本试验结果与史永军［19］试验结果不完全相同，除了试验鹅年龄、环境等因素外，最重要的一点在于无氮饲粮配方中，史永军［19］使用的纤维源为纤维素粉，本试验使用了羧甲基纤维素钠，纤维的结构不完全相同，所以导致了试验结果的差异。

3.2 鹅盲肠的作用及盲肠切除对内源性氨基酸排泄量的影响

禽盲肠在物质代谢中有一定的作用。每克禽类盲肠食糜中大约有1011个专性厌氧菌［20］，这些微生物能够对进入盲肠或大肠中的氨基酸或非蛋白氮等含氮类物质进行分解和合成作用［21］，改变食糜中氨基酸的组成［22］。进入后段肠道中的食糜有相当数量的未被消化的氨基酸被盲肠中的微生物利用［23］，影响了氨基酸消化率测定值［6，24］。这也是在本试验中有部分氨基酸在正常组和去盲肠组间表现出了显著性差异的原因之一。

4 结论

① 采用饥饿法时，除丝氨酸、精氨酸、胱氨酸、脯氨酸外，其他内源性氨基酸排泄量去盲肠组低于正常组;采用无氮饲粮法时，除天冬氨酸、组氨酸、精氨酸、脯氨酸、苏氨酸、酪氨酸、蛋氨酸和异亮氨酸外，正常组内源性氨基酸排泄量高于去盲肠组。

②采用饥饿法和无氮饲粮法测定鹅内源性氨基酸排泄量时，除了组氨酸与胱氨酸，其余氨基酸的内源性排泄量在2种方法间差异极显著，饥饿法测定的多数内源性氨基酸排泄量低于无氮饲粮法。

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