临床免疫诊断研究进展

姚方成 （山东省临沂市平邑县人民医院检验科，山东平邑 273300）

·综述·

临床免疫诊断研究进展

姚方成 （山东省临沂市平邑县人民医院检验科，山东平邑 273300）

临床免疫诊断是现代发展极其迅速的一门应用科学，涉及检验学中的肿瘤免疫学、变态反应性疾病、自身免疫性疾病、移植排斥反应、传染病等众多领域．与生物各子学科的关系变得越来越密切，同时由于现代医学科技的飞速发展与进步，以及免疫学基础研究成果的不断突破与革新，临床免疫诊断也有了质的飞跃，其应用在不断深入与拓广，现在几乎应用于各科临床疾患的诊断，包括免疫器官本身的疾病抑或是与免疫直接相关性疾病．本文就临床免疫诊断的研究与进展进行深入探讨，做出简要综述．

免疫学；临床免疫诊断；研究进展

免疫标记技术的逐步发展和完善促进了临床免疫诊断相应进步．从 20世纪中期开始，多项免疫标记技术的逐步建立对免疫检测敏感性的提高有着很大的促进作用．1941年Coons等通过异氰酸蒽荧光素标记抗体的方法，检测小鼠组织切片中的可溶性肺炎球菌荚膜多糖抗原，并在此基础上创立了荧光免疫技术，使得抗原能够被定位检测．1959年 Yalow和Berson开创了放射免疫分析技术，将其用于糖尿病人胰岛素的含量测定，使之成为糖尿病的诊断方法之一．1971年 Engvall等把放射性核素用酶替代从而制备了酶标记试剂，至此酶免疫技术得以创立，这大大推动了非放射性标记免疫技术的发展．1983年Czerkinsky、Sedgwick和 Holt通过建立在 ELISA技术的基础上开创了 ELISPOT技术，此技术可用于检测免疫应答细胞分泌的产物，并且分析免疫细胞功能，其特点是具有高度的敏感性．20世纪70年代初期，Faulk和 Taylor创立了胶体金免疫技术，其具有操作简便、采样方便、用量少、结果直观等优点，在感染性疾病、风湿病、自身免疫疾病等的抗原、抗体检测以及诊断中是非常重要的方法．各方法灵敏度由大到小次序为放射免疫测定，荧光免疫测定，酶免疫测定，胶体金测 定［1］．

临床免疫诊断的发展需要依靠免疫学技术的不断革新，而免疫学技术的革新又是建立在其他科学技术发展的基础上．免疫学外的科学技术的的发展，使得临床免疫诊断发生了深刻的变革．随着单克隆抗体技术以及电子自动化等技术的相互发展与融合，新型免疫标记技术也相继问世，如电化学发光免疫技术（ECL）、时间分辨荧光免疫技术（TRFIA）、免疫PCR、以及蛋白芯片标记免疫技术等，可检测出一切具有抗原性或半抗原性的物质，成为目前临床免疫诊断应用的主要技术．

电化学发光免疫分析（ECL）是上世纪末开始兴起的一种新型发光免疫技术，其与化学发光有一定的差异，体现在该法为在电极表面借助电化学反应而引发的特异性化学发光反应，主要有电化学和化学发光两个过程．电化学发光为电促放光，其激发的光具有高效、稳定连续的特点，同时检测步骤与之前的方法相比变得非常简便．其因为原理新颖、不易被干扰、灵敏度高、特异性强、标准物稳定、出结果迅速、易重复等特点，在临床上的应用范围越来越广，主要用于生长激素、肿瘤标志物、甲状腺激素、C-肽、生长激素、绒毛膜促性腺激素、促黄体生成素、催乳素等检测，并有较好的发展前景［2］．

时间分辨荧光免疫技术（TRFIA）属于非放射免疫分析技术，在近几十年来是最具发展前途的一项技术，由于镧系稀土元素的荧光寿命比较长，因此是抗原、抗体、激素等的合适标记物，而且利用时间分辨荧光分析仪延缓测量时间，使之排除非特异性本底荧光的干扰，保证所得信号都为特异荧光．因此此法灵敏度高、特异性好，明显高于其他若干分析方法．TRFIA技术在国外已广泛应用于临床检测，在其基础上不断有新的技术延伸出来．在国内也正逐步得到重视，该技术不断得到推广［3］．

免疫PCR是将免疫反应的特异性与 PCR的敏感性相结合的免疫学检测技术．该方法是通过连接分子把DNA与抗体相连接，再与吸附在固相载体上的待测抗原结合，形成抗原-抗体-DNA复合物，最后用特异性引物对 DNA进行 PCR扩增，并且对扩增产物进行检测．该方法能够定量测定与 DNA标记抗体相对应的抗原［4］．

蛋白芯片标记免疫技术是通过微加工和微电子技术将大量的探针蛋白高密度排列在固相支持物表面，抗体、抗原、受体、酶则作为靶蛋白将探针蛋白特异性地捕获，然后将未结合的其它蛋白洗去，运用相应检测系统对靶蛋白进行定准确、快速、高通量、集成化的分析．蛋白芯片标记免疫技术在感染性疾病、肿瘤、自身免疫疾病等疾病的诊断中有着非常广泛的应用．

综上所述，抗原抗体的特异性结合能够检测某一待测物存在的原理，是早期临床免疫诊断方法的基础，也会是未来各种新方法及新仪器的重要结合部分．在21世纪，随着基因工程、蛋白芯片技术及其他科学技术的高速发展，临床免疫诊断也必将会进行一次又一次的革新，越来越广泛、越来越深入的应用到临床的各类疾病的诊断中．

［1］曹雪涛．免疫学研究的发展趋势及我国免疫学研究的现状与展望［J］．中国免疫学杂志，2009，25（1）：10－23．

［2］周建光，杨 梅．电化学发光免疫分析技术与临床应用［J］．医疗装备，2010，23（5）：23－24．

［3］武学成，何 林，周克元．时间分辨荧光免疫分析技术及临床应用［J］．医学综述，2006，12（7）：434－436．

［4］黄 杰，李金明．免疫PCR技术及其应用研究进展［J］．国际检验医学杂志，2006，27（8）：709－712．

Discussion on research and development of clinical immunology diagnosis

YAO Fang-Cheng
Department of Clinical Laboratory，Pingyi People's Hospital of Shandong Province，Pingyi 273300，China

Clinical Immunology diagnosis is an applied science which develops extremely rapidly in modern times，involving many areas of the laboratory science，such as tumor immunology，allergic diseases，autoimmune diseases，transplant rejection reactions and other infectious diseases．And biochemistry，molecular genetics，molecular biology，cell biology become close．With the rapid development of science and technology of modern medicine，and constant breakthroughs of the immunology in basic research and innovation，clinical immunodiagnostic has also a qualitative leap in its wide application in deepening and extending，now used in almost all subjects in clinical disorders diagnostics，including immune organ itself and immune diseases or directly related diseases．In this paper，a brief overview has been made in respect of the deep research of the clinical immunology diagnostics．

immunology；diagnostic clinical immunology；research and development

2095-6894（2014）05-149-02

R446．1

A

在免疫学发展的早期，Emil von Behring和 Kitasato通过对白喉或破伤风毒素免疫动物的研究确定了抗体（antibody，Ab）、抗原（antigen，Ag）的概念，使得免疫和医学免疫诊断开始变得密不可分．十九世纪末 Kraus通过大量实验发现了沉淀反应．同年Ehrlich首次提出了中和反应．次年 Bordet又建立了补体结合试验，Wassermann等很快将此项技术应用于梅毒的诊断中．1900年 Landsteiner发现人 ABO血型，此后血型鉴定成为临床检验中的重要项目．1945 年Coombs等建立的抗球蛋白试验，应用于溶血性贫血时红细胞不完全抗体的检测．次年Oudin向外界公布了其研发的试管免疫扩散技术．这些经典的血清学方法，提供了为血清抗体检查以及病原菌鉴定的方法，而被广泛应用于传染病的诊断．

2014-08-12；接受日期：2014-08-23

姚方成．本科．Tel：0539-4689085 E-mail：2069461272＠163．com