千斤肾安宁胶囊薄层色谱鉴别

金晓敏,李 耿,吴依娜*

(1.广州中医药大学，广东 广州 510000；2.广州王老吉大健康产业有限公司，广东 广州 510000)



千斤肾安宁胶囊薄层色谱鉴别

金晓敏1,2,李 耿1,吴依娜1*

(1.广州中医药大学，广东 广州 510000；2.广州王老吉大健康产业有限公司，广东 广州 510000)

目的：建立千斤肾安宁胶囊的TLC鉴别方法。方法：采用TLC对千斤肾安宁胶囊中千斤拔、淫羊藿、补骨脂、冬虫夏草、人参、三七等主要成分进行定性鉴别。结果与结论：该方法能明显检测出千斤拔、淫羊藿、补骨脂、冬虫夏草、人参、三七等药物成分，斑点清晰，分离度好，专属性较强，重复性好，可以有效控制千斤肾安宁胶囊的质量。

千斤肾安宁；薄层色谱；药物鉴别

千斤肾安宁是近年来开发的一类治疗慢性肾炎普通型(脾肾两虚证)、氮质血症期慢性肾功能不全的药物，主要功效为健脾补肾、利尿降浊。《中国药典》(2010年版)中收纳了桂林漓江制药公司生产的千斤肾安宁胶囊国家标准[1]，系统介绍了千斤肾安宁的配方组成及工艺制法[2]。

1 实验材料

千斤肾安宁胶囊若干，千斤拔、淫羊藿、补骨脂、冬虫夏草、人参、三七等对照药材，淫羊藿苷对照品(中国食品药品检定研究院，批号：110737-200415)、补骨脂对照品(中国食品药品检定研究院，批号：110739-201115)、异补骨脂对照品(中国食品药品检定研究院，批号：110738-201012)、冬虫夏草对照品(中国食品药品检定研究院，批号：121201-200502)、人参皂苷Rg1(中国食品药品检定研究院，批号：110703-201128)、人参皂苷Rb1(中国食品药品检定研究院，批号：110704-201223)、人参皂苷Re(中国食品药品检定研究院，批号：110754-201324)、三七皂苷R1(中国食品药品检定研究院，批号：110745-200617),阴性对照品。

2 方法与结果

2.1 千斤拔TLC鉴别

取本品内容物2g，加甲醇20mL，加热回流20min，滤过，滤液置分液漏斗中，加石油醚(60～90℃)振摇提取2次，每次15mL，合并石油醚液，浓缩至1mL，作为供试品溶液。另取千斤拔对照药材2.5g，同法制成对照药材溶液。取除千斤拔外根据处方量及其工艺制得的样品约2g，精密称定，按供试品溶液的制备方法，制备阴性样品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2000年版一部附录ⅥB)试验，吸取上述三种溶液各5～10μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯(6∶4)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以磷钼酸试液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点，阴性对照品不显斑点。

2.2 淫羊藿TLC鉴别

取本品内容物6g，加水70mL，加热溶解，滤过，滤液加氯仿40mL，加热回流1h，静置分层，弃去氯仿液，水液挥去氯仿，加水饱和的醋酸乙酯振摇提取3次，每次30mL，合并提取液，用0.5mol/L碳酸氢钠溶液洗涤2次，每次30mL，加水30mL洗涤1次，醋酸乙酯液蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液。另取淫羊藿苷对照品，加甲醇制成1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液。取除淫羊藿外根据处方量及其工艺制得的样品约6g，精密称定，按供试品溶液的制备方法，制备阴性样品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2000年版一部附录Ⅵ B)试验，吸取上述供试品溶液15μL、对照品溶液5μL、阴性对照溶液15μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性对照品不显斑点。

2.3 补骨脂TLC鉴别

取本品内容物3g，加醋酸乙酯20mL，加热回流20min，滤过，滤液蒸干，残渣加醋酸乙酯1mL使溶解，作为供试品溶液。另取补骨脂素、异补骨脂素对照品，分别加醋酸乙酯制成每1mL各含1mg的溶液，作为对照品溶液。取除补骨脂外根据处方量及其工艺制得的样品约3g，精密称定，按供试品溶液的制备方法，制备阴性样品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2000年版一部附录Ⅵ B)试验，吸取上述四种溶液各2～4μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正已烷-醋酸乙酯(6∶4)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%氢氧化钾甲醇溶液，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性对照品不显斑点。

2.4 冬虫夏草TLC鉴别

取本品内容物6g，加乙醚30mL，密塞，时时振摇，浸渍4h，滤过，滤液挥去乙醚，残渣加无水乙醇0.5mL使溶解，作为供试品溶液。另取冬虫夏草对照药材1g，同法制成对照药材溶液。取除冬虫夏草外根据处方量及其工艺制得的样品约6g，精密称定，按供试品溶液的制备方法，制备阴性样品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2000年版一部附录Ⅵ B)试验，吸取上述两种溶液各2～5μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正已烷-醋酸乙酯(8∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茴香醛-浓硫酸试剂，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照品不显斑点。

2.5 人参/三七TLC鉴别

取本品内容物9g，加水18mL搅拌湿润，加水饱和正丁醇90mL,超声处理30min，吸取上清液加3倍量氨试液，摇匀，放置分层，取上层液蒸干，残渣加水适量使溶解。作为供试品溶液。置D101型大孔树脂柱(内径1.5cm×柱高10cm)上，先用水洗脱至洗脱液无色，然后用5%NaHCO3洗4个柱体积，之后用水洗脱至洗脱液呈中性，再用纯甲醇洗脱至树脂无色，收集甲醇洗脱液，置蒸发皿中，蒸干，残渣用甲醇1mL溶解，作为供试品溶液；另取人参对照药材、三七对照药材各1g，同法制成对照药材溶液[3]。取除人参及三七外根据处方量及其工艺制得的样品约9g，精密称定，按供试品溶液的制备方法，制备阴性样品溶液。

照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录ⅥB)试验，吸取上述溶液各2μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-乙酸乙脂-甲醇-水-醋酸(5∶30∶11∶5∶0.2)为展开剂，展距为8cm，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇试液,在110℃加热至斑点清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性对照无干扰。

3 结论与讨论

本文所建立的TLC鉴别方法，可以明显检出千斤拔、淫羊藿、补骨脂、冬虫夏草、人参、三七等药物成分，斑点清晰，分离度好，专属性较强，重复性好，可以有效控制千斤肾安宁胶囊的质量。提供了三七/人参的色谱鉴别方法，文中千斤肾安宁中供试品的处理方法，在常规基础上增加了大孔树脂纯化步骤，有效去除了样品中的杂质，从而使得薄层色谱的斑点更加清晰。通过对目标药材中有效成分的分析，利用溶剂的极性、化合物的吸附性及其在溶剂中的分配系数来选择合适的展开试剂，从而选择毒性低、分离效果好的展开剂。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].第一部. 北京:中国医药科技出版社，2010.

[2] 窦启玲,熊仕芳, 陈珊,等.一种千斤肾安宁药物组合物及其制备方法和制剂：中国，201110265016[P]. 2012-01-04.

[3] 王艳.三七质量评价方法研究[D].沈阳：沈阳药科大学，2003.

(责任编辑：王尚勇)

2014-03-02

金晓敏(1985-)，女，广州中医药大学硕士研究生， 研究方向为中成药质量标准及质量控制。

吴依娜(1965-)，女，广州中医药大学教授，研究方向为中药配伍与临床应用、中药药性理论及岭南药学。

R286.0

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1673-2197(2014)12-0037-02