毛细管气相色谱法测定米氮平原料药中的有机溶剂残留量

霍建富，申云飞，连建科，张慧兰

(山西康宝生物制品股份有限公司，山西 长治 046011)

米氮平是全球首个对去甲肾上腺素能和特异性5-羟色胺能受体双重阻滞作用的的抗抑郁药(NaSSA)。由于该药在合成过程中使用了乙醇、二氯甲烷、三氯甲烷、四氢呋喃、N,N-二甲基甲酰胺，而这5种有机溶剂都是《中国药典》(2010年版)中规定控制限量的溶剂，有必要对其残留量进行检测。作者根据溶剂的性质和初步分离的结果，建立了毛细管气相色谱法测定米氮平原料药中上述5种有机溶剂的残留量。

1　实验

1.1　试药、试剂与仪器

米氮平原料药(批号：110801、110901、110902)，自制。

二甲基亚砜、二氯甲烷、三氯甲烷，上海阿拉丁化学试剂有限公司；N,N-二甲基甲酰胺(DMF)，天津北科化学品有限公司；四氢呋喃、乙醇，天津凯通化学试剂有限公司；以上试剂均为色谱纯。

GC2010 Plus型气相色谱仪，日本岛津公司；GA-380A型低噪音空气泵、GH-300型高纯氢发生器，北京中兴江利科技发展有限公司；F-502型顶空进样器，北京北分瑞利分析仪器有限责任公司；HP-1型毛细管色谱柱(30 m×0.53 mm，3μm)，FID检测器。

1.2　方法

1.2.1色谱条件

HP-1毛细管柱(30 m×0.53 mm，3μm)。程序升温：40 ℃保持8 min；以7 ℃·min-1的速率升温至120 ℃，保持5 min；再以30 ℃·min-1的速率升温至200 ℃，保持2 min。进样口温度200 ℃；检测器温度250 ℃；载气为高纯氮气，流速3 mL·min-1；分流比1∶15；顶空瓶平衡温度90 ℃，平衡时间30 min。顶空进样。

1.2.2对照品溶液的配制

分别精密称取适量乙醇、二氯甲烷、三氯甲烷、四氢呋喃、N,N-二甲基甲酰胺，用二甲基亚砜稀释成每毫升约含乙醇500μg、二氯甲烷60μg、三氯甲烷6μg、四氢呋喃72μg、N,N-二甲基甲酰胺88μg的溶液，作为对照品溶液。

1.2.3供试品溶液的配制

取米氮平适量(约1 000 mg)，精密称定，置于10 mL量瓶中，用二甲基亚砜溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

1.2.4贮备溶液的配制

分别精密称取适量乙醇、二氯甲烷、三氯甲烷、四氢呋喃、N,N-二甲基甲酰胺，用二甲基亚砜稀释成每毫升中约含乙醇5 000.40μg、二氯甲烷606.22μg、三氯甲烷60.08μg、四氢呋喃721.64μg、N,N-二甲基甲酰胺882.96μg的溶液，作为贮备溶液。

2　结果与讨论

2.1　专属性实验

取空白溶剂二甲基亚砜及乙醇、二氯甲烷、三氯甲烷、四氢呋喃、N,N-二甲基甲酰胺分别进样。结果发现，二甲基亚砜、乙醇、二氯甲烷、三氯甲烷、四氢呋喃、N,N-二甲基甲酰胺峰的保留时间分别为18.925 min、3.995 min、5.843 min、9.780 min、10.500min、17.003 min。

取空白溶剂二甲基亚砜及乙醇、二氯甲烷、三氯甲烷、四氢呋喃、N,N-二甲基甲酰胺混合物进样，色谱图如图1所示。

Ⅰ.乙醇　Ⅱ.二氯甲烷　Ⅲ.三氯甲烷　Ⅳ.四氢呋喃　Ⅴ.N,N-二甲基甲酰胺　Ⅵ.二甲基亚砜

由图1可以看出，各溶剂间分离度良好。空白溶剂对测定无干扰。

2.2　检出限实验

取各溶剂精密称定，用二甲基亚砜逐步稀释，按信噪比3∶1进行实验。结果表明，乙醇、二氯甲烷、三氯甲烷、四氢呋喃、N,N-二甲基甲酰胺的检出限(μg·mL-1)分别为1.03、0.83、0.47、0.32、1.04。

2.3　精密度实验

取对照品溶液重复进样6次，测得乙醇、二氯甲烷、三氯甲烷、四氢呋喃、N,N-二甲基甲酰胺峰面积的RSD值分别为0.70％、0.91％、0.30％、0.23％、0.45％。表明该检测方法的精密度良好。

2.4　线性关系

精密量取贮备溶液0.2 mL、0.5 mL、1.0 mL、1.5 mL、2.0 mL，分别置于10 mL量瓶中，用二甲基亚砜稀释，得到含不同浓度(μg·mL-1)乙醇(100.008、250.020、500.040、750.060、1 000.080)、二氯甲烷(12.124、30.311、60.622、90.933、121.244)、三氯甲烷(1.202、3.004、6.008、9.012、12.016)、四氢呋喃(14.433、36.082、72.164、108.246、144.328)、N,N-二甲基甲酰胺(17.659、44.148、88.296、132.444、176.592)的溶液。按色谱条件顶空进样，以峰面积(A)对浓度(c)进行线性回归。线性方程及相关系数见表1。

表1　线性关系实验结果

由表1可知，乙醇、二氯甲烷、三氯甲烷、四氢呋喃、N，N-二甲基甲酰胺的浓度(μg·mL-1)分别在100.008～1 000.080、12.124～121.244、1.202～12.016、14.433～144.328、17.659～176.592范围内与峰面积的线性关系良好。

2.5　回收率实验

取适量(约0.5 g)米氮平原料药(批号：110801)共9份，精密称定，置于5 mL量瓶中，先用适量二甲基亚砜溶解，再分别加入各贮备溶液0.4 mL、0.5 mL、0.6 mL，用二甲基亚砜定容，摇匀，作为高、中、低3个档次浓度的供试品溶液。按色谱条件顶空进样，计算回收率及相对标准偏差，结果见表2。

由表2可看出，乙醇、二氯甲烷、三氯甲烷、四氢呋喃、N,N-二甲基甲酰胺的平均回收率分别为99.21％、98.72％、99.38％、99.03％、99.29％，相对标准偏差(RSD)均小于1％。

2.6　样品检测

取3批米氮平原料药样品(批号110801、110901、110902)按上述方法测定有机溶剂残留量，结果见表3。

2.7　讨论

(1)在人用药物注册技术要求国际协调会(ICH)的有机溶剂残留量指导原则中，规定二氯甲烷、三氯甲烷、四氢呋喃、N,N-二甲基甲酰胺为第二类应该限制使用的溶剂，本实验参照《中国药典》(2010年版)二部的指标要求，规定溶剂的限度为：二氯甲烷0.06％、三氯甲烷0.006％、四氢呋喃0.072％、N,N-二甲基甲酰胺0.088％。虽然乙醇为第三类溶剂，毒副作用很小，但还是应该控制，规定限度为0.5％。

表2　回收率实验结果

表3　样品中有机溶剂残留量测定结果/％

(2)本实验采用HP-1毛细管色谱柱，通过程序升温使5种有机溶剂得到完全分离。40 ℃保持8 min，使沸点低的溶剂乙醇、二氯甲烷、三氯甲烷、四氢呋喃先分离；然后以7 ℃·min-1的速率升温至120 ℃，保持5 min，使沸点高的溶剂N,N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜分离，并尽可能地保证基线平稳；再以30 ℃·min-1的速率升温至200 ℃，保持2 min，使沸点更高的杂质溶剂分离，以确保测量准确。

(3)本实验选用二甲基亚砜作溶剂，其与样品和被测的5种有机溶剂均能互溶，且不干扰被测组分的测定。

(4)要确保供试品溶液气-液相达到平衡，顶空时间不易过长，一般为30～45 min。过长可能导致顶空瓶的气密性变差，过短达不到平衡效果。本实验选择的顶空时间为30 min。

3　结论

建立了米氮平原料药中乙醇、二氯甲烷、三氯甲烷、四氢呋喃、N,N-二甲基甲酰胺等有机溶剂残留量毛细管气相色谱测定法。结果表明：以上5种有机溶剂的含量(μg·mL-1)分别在100.008～1 000.080、12.124～121.244、1.202～12.016、14.433～144.328、17.659～176.592的范围内与峰面积的线性关系良好，检出限(μg·mL-1)分别为1.03、0.83、0.47、0.32、1.04；平均回收率分别为99.21％、98.72％、99.38％、99.03％、99.29％；精密度实验相对标准偏差(RSD)均小于1％。该方法灵敏、准确，可用于米氮平原料药中有机溶剂残留量的测定。

参考文献：

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