内蒙古中西部地区汉族、蒙古族ApoB基因遗传多态性

2014-04-08 07:58刘扬冀军包乌仁吐亚杨帆吴海荣
法医学杂志 2014年1期
关键词:酶切位点汉族等位基因

刘扬,冀军,包乌仁吐亚,杨帆,吴海荣

(1.包头医学院法医学系,内蒙古包头014060;2.包头医学院第一附属医院,内蒙古包头014010)

载脂蛋白(apolipoprotein,Apo)是脂蛋白的重要组分,仅在肝、肠细胞中特异表达,可能与DNA甲基化作用相关,在已知基因中,ApoB基因具有最明显的多态性。本研究选择XbaⅠ和EcoRⅠ位点对内蒙古中西部地区的汉族和蒙古族两个群体的遗传多态性进行调查。

ApoB参与体内的脂质代谢,为乳糜微粒与低密度脂蛋白(LDL)的主要蛋白质成分。XbaⅠ酶切位点多态性是第26个外显子上2488密码子ACC→ACT变异,产生了1个XbaⅠ酶切点,即X+等位基因,但未改变氨基酸序列属静息突变,不直接影响ApoB基因水平;无酶切位点的称X-等位基因。

EcoRⅠ酶切位点位于ApoB基因的第29外显子,由于4154位密码子的第1个碱基G→A突变,使GAA→AAA,原有的EcoRⅠ酶切位点消失,产生E-等位基因,如不发生突变则为E+等位基因。

1 材料与方法

1.1 样本

120例汉族无关个体选自包头医学院第一附属医院体检人群,100例蒙古族无关个体选自自愿献血人群及包头医学院第一附属医院体检人群。常规酚-氯仿法提取基因组DNA。

1.2 引物合成与纯化

PCR引物XbaⅠ上游引物:5′-GGAGACTATTCA GAAGCTAA-3′;下游引物:5′-GAAGAGCCTGAAGA CTGACT-3′。EcoRⅠ上游引物:5′-CTGAGAGAAGTG TCTTCGAAG-3′;下游引物:5′-CTCGAAAGGAAGTGTAATCAC-3′。

1.3 PCR反应体系

20 μL的总反应体系中含:DNA模板2.0 μL,Primer1 0.5μL,Primer2 0.5μL,LA Taq DNA聚合酶0.1 μL,4×dNTP 1.5 μL,10×buffer 2.0 μL,灭菌双蒸水加至20μL。

1.4 PCR反应条件

两个位点复合扩增。95℃5 min;94.5℃1min,58℃1min,72℃1.5min,72℃7min,30个循环。

1.5 PCR产物鉴定

取基因PCR产物5 μL置于1%琼脂糖凝胶(含1/10000 DNA荧光染料)上电泳30min(电压100V),紫外灯下观察结果,拍照记录。

1.6 PCR产物结果判断

所用引物扩增出的ApoB基因PCR产物为710bp和480 bp,对已扩增出的ApoB基因产物再分别用XbaⅠ和EcoRⅠ内切酶进行酶切,进一步鉴定其等位基因型。

1.7 限制性片段长度多态性分析

取PCR扩增产物2 μL,加内切酶0.25 μL,酶切缓冲液1μL,BSA 0.1μL,再加双蒸水至总体积10μL于37℃消化4h,然后进行1%琼脂糖凝胶电泳,电压100V,电泳时间40min,紫外灯下观察并于凝胶成像系统摄影记录。

ApoB基因有一个XbaⅠ酶切位点,切除片段大小分别为433bp(X+)和277bp(X+)为稀有基因,未切开片段710bp(X-)为常见片段;ApoB基因另一个EcoRⅠ酶切位点,切除片段分别为253bp(E+)和227bp(E+)为常见片段,未切开的片段480bp(E-)为稀有基因。

用文献[1]介绍的方法计算杂合度(H)、个体识别率(DP)和非父排除率(PE)等群体遗传学参数。

2 结果与讨论

本研究共调查了内蒙古中西部地区汉族120名和蒙古族100名个体的ApoB基因XbaⅠ和EcoRⅠ位点的遗传多态性。将调查所得的XbaⅠ和EcoRⅠ位点在两个群体中分布频率的数据进行χ2检验,结果均符合Hardy-Weinberg平衡定律(P>0.05)。同时,根据本研究所得到的汉族群体在内蒙古中西部地区ApoB基因XbaⅠ和EcoRⅠ位点的基因型和等位基因频率(表1),计算得出H、DP、PE在XbaⅠ为0.0400、0.0768、0.0192,在EcoRⅠ为0.0800、0.1534、0.0420。

表1 ApoB基因XbaⅠ和EcoRⅠ位点在内蒙古中西部汉族群体中的多态性分布

对内蒙古中西部地区ApoB基因XbaⅠ和EcoRⅠ位点的基因型和等位基因频率的调查结果显示,汉族群体中同时检测出了稀有基因X+和E-,而在蒙古族群体中没有检测出此两种稀有等位基因。将本研究结果与其他种族和地区人群数据进行比较,结果见表2。

表2 ApoB基因XbaⅠ位点基因型频率在不同群体中的比较

如表2所示,在不同的群体中X+等位基因频率不同,在东亚地区是最低的,如内蒙古人群、北京汉族人、上海汉族人、日本人、新加坡汉族人和新加坡印度人,但是在西欧人群中X+等位基因频率较高,如芬兰人、法国人、欧美白人。文献报道,新加坡汉族人EcoRⅠ位点的等位基因(E-)频率为0.07[6],昆明汉族人为0.02[5],国内叶平等[11]报道为0.05,与本研究结果相似。上述结果显示,虽然ApoB基因XbaⅠ和EcoRⅠ位点在法医学中的效能不高,但是等位基因频率分布在不同种族中差异较大,可能与人类种族进化过程中遗传漂变或自然选择有关,因此ApoB基因XbaⅠ和EcoRⅠ位点具有种族鉴定的应用可能。

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