HPLC法测定抗过敏类健康产品中非法添加的马来酸氯苯那敏含量

魏志雄,刘丹丹

(东莞市食品药品检验所，广东 东莞 523109)



HPLC法测定抗过敏类健康产品中非法添加的马来酸氯苯那敏含量

魏志雄*,刘丹丹

(东莞市食品药品检验所，广东 东莞 523109)

目的：建立HPLC法测定抗过敏类健康产品中非法添加的马来酸氯苯那敏含量。方法：采用 Diamonsil C18(4.6mm×250mm，5μm)色谱柱，以0.05mol/L磷酸二氢钾溶液(含1%三乙胺和0.005mol/L的庚烷磺酸钠，用磷酸调节pH至3.0)-甲醇(45∶55)为流动相，流速为1.0mL·min-1，柱温为30℃，检测波长为262nm。结果：马来酸氯苯那敏在0.100 4～4.016 0μg范围内与峰面积呈良好线性关系(r2=0.999 7)，平均回收率为97.8%，RSD=1.6%(n=6)；31批供试品有3批检测到非法添加的马来酸氯苯那敏。结论：该方法专属性强、灵敏度高，适用于测定抗过敏类健康产品中非法添加的马来酸氯苯那敏含量。

抗过敏类健康产品；马来酸氯苯那敏；高效液相色谱

马来酸氯苯那敏又称扑尔敏，是一种重要的抗过敏类非处方药品，临床上广泛用于治疗各种过敏性疾病，但其本身可引发交叉过敏，亦可引起嗜睡、心悸、出血倾向以及肝损伤等副作用。一些不法分子在抗过敏类健康产品中非法添加马来酸氯苯那敏，给人民群众的身体健康带来极大威胁。

本文采用高效液相色谱法测定抗过敏类健康产品中马来酸氯苯那敏的含量，结果表明，该方法重复性好，回收率高，可用于此类产品中非法添加的马来酸氯苯那敏检测。

1 仪器与试药

岛津LC-20AT液相色谱仪(配二极管阵列检测器)；赛多利斯BP211D电子天平；色谱柱：Diamonsil C18(4.6mm×250mm，5μm)；马来酸氯苯那敏对照品(中国食品药品检定研究院，批号100047-200606，含量99.7%)；甲醇、庚烷磺酸钠为色谱纯，水为纯化水，其余试剂均为化学纯。抗过敏类健康产品为市购滴鼻剂(共31批)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱为Diamosil C18(4.6mm×250mm，5μm)；流动相为0.05mol/L磷酸二氢钾溶液(含1%三乙胺和0.005mol/L的庚烷磺酸钠，用磷酸调节pH至3.0)-甲醇(45∶55)；流速为1.0mL/min；进样量为20μL；柱温为30℃；检测波长为262nm。在上述色谱条件下理论板数按氯苯那敏峰计不低于6 000，与周围其他色谱峰分离良好。对照品、供试品及阴性等色谱见图1。

图1 马来酸氯苯那敏对照品(A)、供试品(B-7～B-24)及阴性供试品HPLC色谱

注：*峰1为氯苯那敏。

2.2 对照品溶液制备

精密称取经105℃干燥3h的马来酸氯苯那敏对照品0.010 07g，置25mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，配成浓度约为0.4mg/mL的标准储备液。

精密吸取马来酸氯苯那敏标准储备液适量，加甲醇稀释制成浓度分别为0.2、0.1、0.04、0.02、0.01及0.005mg/mL的标准曲线系列溶液。

2.3 样品溶液制备

精密吸取样品适量体积置分液漏斗中，加40%氢氧化钠溶液10mL，摇匀，用石油醚(60～90℃)振摇提取4次(1次30mL)，合并提取液，蒸干，残渣用甲醇溶解，并定容至10～50mL量瓶中，摇匀，滤过，取续滤液，即得(制得供试品浓度在0.005～0.2mg/mL)。

2.4 线性关系考察

取不同浓度的对照品溶液20μL注入液相色谱仪，测定峰面积，以浓度为横坐标(X)，以峰面积为纵坐标(Y)绘制回归方程，结果表明马来酸氯苯那敏进样量在0.100 4～4.016 0μg范围内峰面积与进样量线性关系良好(Y=1.2×107X+14 210,R2=0.999 7)。

2.5 进样精密度试验

精密吸取0.005及0.1mg/mL的对照品溶液各20μL分别连续6次注入高效液相色谱仪，记录峰面积，RSD为1.1%及0.7%，表明进样精密度良好。

2.6 稳定性实验

按上述制备方法制得供试品溶液，分别在0、2、4、8、16及24h进样20μL，记录峰面积，结果RSD为0.3%，表明供试品溶液在24h内稳定。

2.7 重复性试验

精密吸取样品2 mL置分液漏斗中，按上述制备方法制得6份供试品溶液，取续滤液20μL注入高效液相色谱仪，记录峰面积，RSD为0.5%，表明重复性良好。

2.8 加样回收试验

精密移取已知含量的样品溶液6份各1mL，各加入对照品储备溶液2mL，按上述制备方法制成供试品溶液，测定计算回收率，结果见表1。

表1 加样回收率试验结果

2.9 样品测定

取31批样品，按上述制备方法制备供试品溶液，在上述色谱条件下进样20μL，记录色谱见图1，按标准曲线法计算其含量，结果见表2。

表2 样品测定结果

3 讨论

3.1 色谱峰识别

在选定的流动相pH值内，马来酸氯苯那敏会出现两色谱峰[1]，考虑到马来酸出峰时间短且易与供试品中其它杂质及溶剂峰相互干扰，故选择氯苯那敏峰来定量。

3.2 检测波长确定

对马来酸氯苯那敏对照品溶液的紫外吸收光谱进行测定，发现氯苯那敏在226nm及262nm处有最大吸收峰。考虑到226nm波长下杂质干扰较为严重，同时参照《中国药典》2010版二部品种马来酸氯苯那敏片的含量测定所采用的检测波长，选择262nm 为检测波长。

3.3 流动相条件选择

分别考察了1%乙酸铵溶液-甲醇、0.05mol/L磷酸二氢钾溶液-甲醇、1%磷酸溶液-乙腈及0.05mol/L磷酸二氢钾溶液(含1%三乙胺和0.005mol/L的庚烷磺酸钠，用磷酸调节pH至3.0)-甲醇等多种系统，最终选定0.05mol/L磷酸二氢钾溶液(含1%三乙胺和0.005mol/L的庚烷磺酸钠，用磷酸调节pH至3.0)-甲醇 (45∶55)为流动相。结果显示加入适量的三乙胺有利于消除氯苯那敏中的氨基与C18固定相中的游离硅羟基相互作用而造成的峰拖尾现象[2]，在此条件下，氯苯那敏峰形较好，能达到基线分离，响应值较高，保留时间适中。

3.4 提取方法选择

由于抗过敏类健康产品成分复杂，提取方法选用不当很容易对准确定性及定量造成干扰。参照《中国药典》2010版一部品种鼻炎康片的含量测定所采用前处理方法[4]，本方法利用马来酸氯苯那敏易溶于水，加入强碱后氯苯那敏易游离，用石油醚(60～90℃)萃取，蒸干以后用甲醇溶解进样，这样可有效地消除相关杂质的干扰，方法准确度良好。

4 结语

本实验建立了抗过敏类健康产品中非法添加马来酸氯苯那敏的HPLC测定方法，并对33批样品进行测定，发现有5批样品非法添加马来酸氯苯那敏。该方法专属性强、灵敏度高，结果准确，可用于抗过敏类健康产品中非法添加马来酸氯苯那敏的定性及定量测定。

[1] 纪宇.关于马来酸氯苯那敏色谱峰的识别[J].中国药品标准,2004,5(1):31.

[2] 马春梅,赵变,席荣英,等.高效液相色谱法测定马来酸氯苯那敏[J].理化检验：化学分册,2012,48(10):1244-1246.

(责任编辑：李岚春)

Detection of Chlorphenamine Maleate in Anti-hypertensive Traditional Chinese Medicine and Health Foods by HPLC

Wei Zhixiong, Liu Dandan

(Dongguan Institute for Food and Drug Control，Guandong Dongguan 523109)

Objective:To establish an HPLC method for the detection of chlorphenamine maleate which were illegally added into antihytensive health products. Methods:Diamosil C18(4.6 mm×250 mm, 5 μm) was adopted with the mobile phase of 0.05 mol/L KH2PO4(1% triethylamine and 0.005 mol/L potassium dihydrogen phosphate, pH was adjusted to 3.0 with phosphoric acid)-methanol (45∶55). The flow rate was 1.0 mL·min-1. The column temperature was 30℃. The detection wavelength was set at 262nm. Results:The method showed a good linear relationship within the range of chlorphenamine maleate 0.100 4～4.016 0 μg (r2=0.999 7). The average recovery was 97.8% with RSD=1.6% (n=6). Chlorphenamine maleate was found in 3 samples.Conclusion:The method is selective and sensitive and can be employed in the detection of chlorphenamine maleate in antihypertensive Traditional Chinese Medicine and Health Foods.

Antihypertensive Traditional Chinese Medicine and Health Foods; Chlorphenamine Maleate; HPLC

2014-03-21

广东省促进科技服务业发展计划项目(2012B040304001)

魏志雄(1983-)，男，中药学博士，广东省东莞市食品药品检验所工程师，研究方向为保健食品及药品检验。

R941.1

A

1673-2197(2014)12-0019-03