降脂宁颗粒薄层鉴别研究

莫 冬

(广西润达制药股份有限公司，广西 河池 547000)



降脂宁颗粒薄层鉴别研究

莫 冬

(广西润达制药股份有限公司，广西 河池 547000)

目的：建立降脂宁颗粒中山楂、荷叶、决明子的薄层鉴别方法。方法：采用薄层色谱法，薄层板选用硅胶G板，采用合适的溶剂展开后，在紫外仪下，根据特征峰的位置检测相应药物是否存在。结果：山楂特征成分熊果酸、荷叶和决明子薄层图谱均在相应位置与降脂宁颗粒薄层图谱呈现同样的特征点。在规定的色谱条件下，各峰分离效果好，斑点清晰，阴性样品无干扰。结论：研究建立的方法重现性好，操作简单，特异性强，可用于降脂宁颗粒的质量控制。

降脂宁颗粒；山楂；荷叶；决明子；薄层鉴别

降脂宁颗粒由山楂、荷叶、决明子、制何首乌四味中药组成，原处方收载于《卫生部药品标准中药成方制剂》第13册116页，标准代号为WS3-B-2549-97，原质量标准“鉴别”项下有生物碱类、蒽醌类及黄酮类成分的定性鉴别，但其专属性差。故参考上述质量标准和文献[1]，对本品各药味的薄层鉴别进行研究。

1 仪器与试药

1.1 仪器

硅胶G(层析用)，青岛海洋化工厂生产；ZF-2型三用紫外仪，上海市安亭电子仪器厂生产；HS-10260D超声波清洗器，天津市恒奥科技发展有限公司生产。

1.2 试药

降脂宁颗粒，批号：20121001、20121002、20121003，广西润达制药股份有限公司提供；降脂宁颗粒，批号：20121022，吉林某某药业有限公司生产；熊果酸对照品(批号：110742-201220)、荷叶对照药材(批号：121322-200903)、决明子对照药材(批号：121011-201005)、何首乌对照药材(批号：120934-201009)均购于中国食品药品检定研究院；甲醇、盐酸、乙酸乙酯、羧甲基纤维素钠、甲苯、甲酸、硫酸、乙醇、氢氧化钠、乙醚、丙酮、石油醚、氨水、三氯甲烷、环己烷、二氯甲烷、碘化铋钾、茚三酮、磷钼酸均为分析纯，购自南宁蓝天实验设备公司；蒸馏水为实验室自制。

2 方法与结果

2.1 山楂特征成分熊果酸薄层色谱鉴别

2.1.1 供试品溶液制备 取4批降脂宁颗粒(20121001、20121002、20121003、20121022)样品各10g，研细，加甲醇30mL，超声处理30min，过滤，滤液蒸干，残渣加水20mL溶解，用稀盐酸调节pH值至2，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加乙酸乙酯lmL溶解，作为供试品溶液。

2.1.2 对照品溶液制备 取熊果酸对照品适量，加乙酸乙酯制成每lmL含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。

2.1.3 阴性样品溶液制备 按处方工艺制成不含山楂的降脂宁颗粒阴性样品，按照“2.1.1”项制备方法制成阴性对照溶液。

2.1.4 鉴别方法 按照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录Ⅵ B)试验步骤[2]，吸取上述供试品溶液各5μL、对照品溶液2μL、阴性对照溶液5μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(20∶4∶0.5)为展开剂展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，于105℃下加热至斑点显色清晰，分别置于日光及紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，分别显相同颜色的斑点或荧光斑点。薄层色谱分离效果好，斑点清晰，圆整，比移值适中(Rfa=0.48)，重现性和专属性好，阴性对照无干扰。见图1。

2.1.5 其它提取纯化方法研究 曾参照文献[1]和2010年版药典“山楂”项下的鉴别对以下提取纯化方法进行了对比试验研究：①取本品100g，研细，加乙醚250mL，浸渍约6h，不时振摇，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇lmL溶解，作为供试品溶液；②取本品100g，研细，加石油醚(60～90℃)250mL，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇lmL溶解，作为供试品溶液；③取本品4g，研细，加乙酸乙酯20mL，超声处理15min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇lmL溶解，作为供试品溶液；④取本品4g，研细，加乙醇40mL，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加水20mL溶解，用盐酸调节pH值至2，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加乙酸乙酯1mL溶解，作为供试品溶液。结果表明提取方法①和②与上述“2.2.1”提取方法效果相差不大，但上述两种方法取样量大，提取时间较长；提取方法③提取效果不及方法④，但方法④的取样量偏小，斑点不够清晰。故优选出上述“2.1.1”提取方法。

2.2 荷叶薄层色谱鉴别研究

2.2.1 供试品溶液制备 取4批降脂宁颗粒(20121001、20121002、20121003、20121022)样品各5g，研细，加甲醇30mL，加热回流30min，滤过，滤液蒸干，残渣加水25mL，用10%氢氧化钠溶液调节pH值至10，用乙醚振摇提取3次，每次15mL，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇1mL溶解，作为供试品溶液。

2.2.2 对照药材溶液制备 取荷叶对照药材2g，按照供试品溶液制备方法制成对照药材溶液。

2.2.3 阴性样品溶液制备 按处方工艺制成不含荷叶的降脂宁颗粒阴性样品，按照供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。

2.2.4 鉴别方法 参照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录Ⅵ B)试验步骤[2]，吸取上述供试品溶液各10μL、对照药材溶液6μL、阴性对照溶液10μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-丙酮-甲醇(10∶3∶3∶0.5)为展开剂展开，取出，晾干，置于紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。薄层色谱分离效果好，斑点清晰，圆整，比移值适中(Rfa=0.44)，重现性和专属性好，阴性对照无干扰。见图2。

2.2.5 其他提取纯化方法、不同展开系统及检视条件研究 曾有参照文献[1]对以下提取纯化方法进行了对比试验研究：①取本品10g，研细，加乙醇40mL，加热回流30min，滤过，滤液加10%氢氧化钠溶液5mL调成碱性，加三氯甲烷30mL，振摇提取，分取三氯甲烷液，水浴蒸干，残渣加三氯甲烷1mL溶解，作为供试品溶液；②取本品10g，研细，加稀乙醇40mL，加热回流30min，滤过，滤液加10%氢氧化钠溶液5mL调成碱性，加乙醚30mL，振摇提取，分取乙醚液，水浴蒸干，残渣加三氯甲烷1mL溶解，作为供试品溶液；③取本品5g，研细，加甲醇50mL，加热回流30min，滤过，滤液蒸干，残渣加水25mL，用40%氢氧化钠溶液调节pH值至10，用三氯甲烷振摇提取3次，每次15mL，合并三氯甲烷，蒸干，残渣加甲醇1mL溶解，作为供试品溶液。实验结果表明提取方法①、②提取效果不及上述“2.2.1”项提取方法，而“2.2.1”项方法提取效果较方法③略差，但考虑到三氯甲烷毒性太大，故优选出“2.2.1”提取方法。

另试用了不同的展开系统：①三氯甲烷-甲醇-浓氨试液(20∶3∶1)；②三氯甲烷-甲醇-浓氨试液(20∶3.5∶0.5)；③环己烷-三氯甲烷-二乙胺(7∶2∶1)；④二氯甲烷-甲醇-浓氨试液(20∶3∶1)。试验结果表明上述展开系统分离效果均不及“2.2.1”展开系统。

检视条件：①以稀碘化铋钾试液喷雾，日光下检视；②以0.5%茚三酮溶液喷雾，105℃加热后日光下检视，试验结果表明上述显色效果均不及“2.2.1”检视方法。

2.3 决明子薄层色谱鉴别

2.3.1 供试品溶液制备 取4批降脂宁颗粒(20121001、20121002、20121003、20121022)样品各10g，研细，加甲醇30mL，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加水20mL溶解，用稀盐酸调节pH值至2，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加乙酸乙酯1mL溶解，作为供试品溶液。

2.3.2 对照药材溶液制备 取决明子对照药材1g，加甲醇20mL，加热回流30min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1mL溶解，作为对照药材溶液。

2.3.3 阴性样品溶液制备 按处方工艺制成不含决明子的降脂宁颗粒阴性样品，按照供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。

2.3.4 鉴别方法 按照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录Ⅵ B)实验步骤[2]，吸取上述供试品溶液各10μL、对照药材溶液5μL、阴性对照溶液10μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚 (60～90℃)-乙酸乙酯-甲酸(15∶2∶1)的上层溶液为展开剂展开，取出，晾干，置于紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同的橙黄色荧光斑点，置于氨蒸气中后，斑点变为红色。薄层色谱分离效果好，重现性和专属性好，阴性对照无干扰。见图3。

2.3.5 其它提取纯化方法研究 参照2010年版中国药典“决明子”鉴别项对以下提取纯化方法进行了对比试验研究：取本品10g，研细，加甲醇30mL，浸渍1h，滤过，滤液蒸干，残渣加水10mL溶解，再加盐酸1mL，置于水浴中加热30min，立即冷却，用乙醚振摇提取2次，每次20mL，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇1mL溶解，作为供试品溶液。试验结果表明两种提取方法效果差不多，但“2.3.1”项提取方法所用的时间较短，故选用“2.3.1”项提取方法。将决明子对照药材的提取方法与文献[1]的提取方法作了对比：取决明子对照药材1g，加三氯甲烷50mL，加热回流30min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1mL溶解，作为对照药材溶液。试验结果表明该法与“2.3.1”项对照药材的方法提取效果差不多，但三氯甲烷毒性太大，故选用“2.3.1”项提取方法。

2.4 制何首乌薄层色谱鉴别研究

参照2010年版药典对制何首乌进行鉴别研究：取本品10g，研细，加乙醇50mL，加热回流1h，滤过，滤液浓缩至3mL，作为供试品溶液。另取何首乌对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。上述样品点样于G板上，以甲苯-乙醇(2∶1)为展开剂，紫外光灯365nm下检视或以10%磷钼酸硫酸溶液喷雾，稍加热后置于紫外光灯365nm下检视。试验结果表明样品斑点较弱，故暂不列入降脂宁颗粒质量标准中。

3 讨论

山楂提取纯化方法较多，但还不十分全面，有待进一步研究；荷叶薄层色谱鉴别的展开系统和检视条件还有待完善；决明子的薄层色谱鉴别要进一步考察特征成分的对比；制何首乌的薄层色谱鉴别要借鉴前人研究经验，进行耐用性考察，建立更完善的薄层色谱鉴别法。近年来，关于降脂宁颗粒的质量标准研究较多，本文实验研究对降脂宁颗粒质量控制和标准制定具有一定的参考意义。

图1 降脂宁颗粒山楂薄层色谱

注：1～3降脂宁颗粒(20121001,20121002,20121003)；4.降脂宁颗粒(20121022,吉林某某药业)；5.熊果酸对照品；6.阴性对照(缺山楂)(温度：31℃；相对湿度：78%)。

图2 降脂宁颗粒荷叶薄层色谱

注：1～3.降脂宁颗粒(20121001,20121002,20121003)；4.降脂宁颗粒(20121022,吉林某某药业)；5.荷叶对照药材；6.阴性对照(缺荷叶)(温度：32℃；相对湿度：78%)。

图3 降脂宁颗粒决明子薄层色谱

注：1～3.降脂宁颗粒(20121001,20121002,20121003)；4.降脂宁颗粒(20121022,吉林某某药业)；5.决明子对照药材；6.阴性对照(缺决明子)(温度：32℃；相对湿度：78%)。

[1] 降脂宁胶囊试行标准.中成药地方标准上升国家标准·内科心系分册[S].标准代号：WS-11287(ZD-1287),2002:143.

[2] 国家药典委员会.中国药典[M].一部.北京:中国医药科技出版社,2010:附录34-35.

(责任编辑：尹晨茹)

Identification Research of Thin Layer in Jiangzhining Granules

Mo Dong

(Guangxi Runda Pharmaceutical Co., Ltd.,Guangxi Hechi 547000,China)

Objective:To establish an identification method of thin layer of hawthorn, lotus leaf and cassia seed in the Jiangzhining Granules.Methods:Using thin layer chromatography, silica G plate for thin layer plate.Results:Selecting identification methods for thin layer of constituents with hawthorn characteristic like ursolic acid, lotus leaf and cassia seed. Under the specified chromatographic condition, the separation is good, spots are clear, and there is no interference in negative sample. Conclusion:The method established in the research is with good reproducibility and easy to operate, which can be used to identify the thin layer of Jiangzhining Granules.

Jiangzhining Granules; Hawthorn; Lotus Leaf; Cassia Seed; Thin Layer Identification

2014-03-18

R284.1

A

1673-2197(2014)12-0029-03