葡聚糖凝胶G-10凝胶色谱系统测定头孢地尼颗粒中高分子聚合物含量

张宇佳,方夏琴,相莉,陈少华,郑稳生

(中国医学科学院药物研究所,药物传输技术及新型制剂北京市重点实验室,北京 100050)

葡聚糖凝胶G-10凝胶色谱系统测定头孢地尼颗粒中高分子聚合物含量

张宇佳,方夏琴,相莉,陈少华,郑稳生

(中国医学科学院药物研究所,药物传输技术及新型制剂北京市重点实验室,北京 100050)

目的 建立凝胶色谱法测定头孢地尼颗粒中聚合物的方法。方法色谱柱为葡聚糖凝胶G-10柱(400 mm×13 mm,40～120μm),流动相A为pH7.0的0.01mol·L-1磷酸盐缓冲液,流动相B为水。流速1.5 mL·min-1,检测波长254 nm,进样量为20μL。结果该方法在0.247～1.728 mg·mL-1范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=1.000 0),头孢地尼颗粒中聚合物含量＜0.1%。结论该方法简便、准确、灵敏度高,适用于头孢地尼颗粒聚合物的控制。

头孢地尼颗粒;聚合物;色谱法,凝胶

β-内酰胺抗生素是目前临床上最常用的抗感染药物,但同时也是临床上时常引发变态反应的药物[1-2]。研究证明,β-内酰胺类抗生素变态反应的发生率与制剂中高分子聚合物及内源性聚合物的含量有关[3-4]。因此,对聚合物的控制是该类药物质量控制的关键。《中华人民共和国药典》2010年版收载了15种需控制聚合物含量的β-内酰胺类抗生素,多为供注射用原料及其制剂[5]。研究表明,口服抗生素类药物同样会引起变态反应[6-7]。头孢地尼为口服第3代头孢菌素,抗菌谱广。《中华人民共和国药典》2010年版对头孢地尼颗粒所含相似聚合物的测定方法笔者未见有关报道,现利用葡聚糖凝胶G-10凝胶色谱系统实现了对头孢地尼颗粒中高分子聚合物的分离分析,为该药的质量控制提供了一个新的检测方法。

1 仪器与试药

1.1 仪器 SPD-10A泵LC-10AD检测器(日本岛津公司),色谱柱:葡聚糖凝胶(sephadex)G-10柱(TIANG400,TIANHE,400 mm×13 mm,40～120μm)。

1.2 试药 头孢地尼颗粒(中国医学科学院药物研究所自制,批号:110401,110402,110403),头孢地尼对照品(USPReference Standard,Cefdinir),200 mg CAT. NO.1097614 USP ROCKVILLE,MD LOT FOG231。高效液相色谱法测得含量:99.2%;紫外分光光度法测得含量:99.9%。磷酸二氢钠、磷酸氢二钠均为分析纯,蓝色葡聚糖2000为Pharmacia公司产品,实验用水为娃哈哈纯净水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性 用葡聚糖凝胶G-10 (40～120μm)为填充剂,柱长400 mm×13 mm,40～120μm。以pH7.0的0.01 mol·L-1磷酸盐缓冲液[0.01 mol·L-1磷酸氢二钠溶液-0.01 mol·L-1磷酸二氢钠溶液(61∶39)]为流动相A,以水为流动相B,流速1.5 mL·min-1,检测波长254 nm。分别以流动相A、B为流动相,取1 mg·mL-1蓝色葡聚糖2000溶液20μL,注入液相色谱仪,理论板数按蓝色葡聚糖2000峰计算均应不低于700,拖尾因子均应＜2.0。在两种流动相系统中蓝色葡聚糖2000峰保留时间的比值应在0.93～1.07之间,对照溶液主峰和供试品溶液中聚合物峰与相应色谱系统中蓝色葡聚糖2000峰保留时间的比值均应在0.93～1.07之间。称取头孢地尼约10 mg,置10 mL量瓶中,用磷酸盐溶液[0.1 mol·L-1磷酸氢二钠溶液-0.1 mol·L-1磷酸二氢钾溶液(2∶1)]溶解,再用1 mg·mL-1的蓝色葡聚糖溶液稀释至刻度,精密量取20μL,注入液相色谱仪,以流动相A进行测定,记录色谱图。高聚体的峰高∶单体与高聚体之间的谷高应＞2.0。

2.2 线性关系考察 取头孢地尼对照品溶液0.5, 1.0,1.5,2.0,2.5,3.0,3.5 mL,分别置7个100 mL量瓶中,加水稀释至刻度,即得头孢地尼系列溶液,分别进样分析,记录色谱图。以浓度为横坐标,以峰面积为纵坐标,进行线性回归。得线性回归方程:Y= 24 272.051 0X+79.750 8,r=1.000 0。结果表明,在0.247～1.728 mg·mL-1浓度范围内线性关系良好。

2.3 系统适用性实验 称取蓝色葡聚糖2000适量,加水溶解并稀释成每毫升中含1 mg的溶液,精密量取20μL,分别以流动相A、B为流动相,注入液相色谱仪,记录色谱图;取小试样品约0.1 g,置10 mL量瓶中,用磷酸盐溶液[0.1 mol·L-1磷酸氢二钠溶液-0.1 mol·L-1磷酸二氢钾溶液(2∶1)]溶解,再用1 mg·mL-1的蓝色葡聚糖溶液稀释至刻度,精密量取20μL,以流动相A为流动相,依法测定;取头孢地尼对照品适量,用磷酸盐溶液[0.1 mol·L-1磷酸氢二钠溶液-0.1 mol·L-1磷酸二氢钾溶液(2∶1)]溶解制成1 mg·mL-1的溶液,作为对照品溶液,精密量取20μL,以流动相B为流动相,依法测定。从实验结果可以看出:流动相B中,葡聚糖与对照液主峰的保留时间比值为0.93;流动相A中,葡聚糖与供试液聚合物峰的保留时间比值为1.0。葡聚糖在流动相B与流动相A中保留时间的比值为0.97,高聚体的峰高与高聚体与单体之间的谷高的分离度达到了51,分离度良好。此方法的系统适用性良好。见表1。

表1 聚合物检查系统适用性实验结果 min

2.4 检测限 取小试样品溶液(按头孢地尼计, 0.05 mg·mL-1)20μL,注入液相色谱仪,记录色谱图,根据样品中聚合物含量计算可得,头孢地尼聚合物的检测限(S/N≥3)为1.1 ng。

2.5 稳定性考察 取本品适量,用磷酸盐溶液[0.1 mol·L-1磷酸氢二钠溶液-0.1mol·L-1磷酸二氢钾溶液(2∶1)]溶解并稀释至每毫升中约含头孢地尼1 mg的溶液,室温放置,分别于0,1.5,3.0,4.5,6.0, 7.5 h进样分析,记录色谱图。结果表明,放样7.5 h后,聚合物峰面积无明显变化趋势,溶液稳定性较好。

2.6 重复性实验 取本品约0.1 g,精密称定,置10 mL量瓶中,用磷酸盐溶液[0.1 mol·L-1磷酸氢二钠溶液-0.1 mol·L-1磷酸二氢钾溶液(2∶1)]溶解并稀释至刻度,摇匀,作为供试品溶液,平行制备供试品溶液6份,分别取20μL,注入液相色谱仪,进样测定。结果表明,本方法的测定重复性良好。

2.7 样品测定 取本品适量(约含头孢地尼10 mg),精密称定,置10 mL量瓶中,用磷酸盐溶液[0.1 mol·L-1磷酸氢二钠溶液-0.1mol·L-1磷酸二氢钾溶液(2∶1)]溶解并稀释至刻度,摇匀,精密量取20μL注入液相色谱仪,以流动相A为流动相进行测定,记录色谱图。另精密量取对照溶液20μL注入液相色谱仪,以流动相B为流动相,同法测定。按外标法以峰面积计算,含头孢地尼聚合物以头孢地尼计不得超过2.0%。检查了3批头孢地尼颗粒的聚合物,结果均符合规定。见表2。

表2 头孢地尼颗粒聚合物测定结果 %,n=2

3 讨论

溶解度实验表明,头孢地尼不溶于水,易溶于N,N-二甲基甲酰胺、二甲亚砜和1 mol·L-1的氢氧化钠。以葡聚糖凝胶G-10为填料时,不宜使用有机溶剂,且强碱条件下,样品降解产生的杂质干扰聚合物测定,故上述溶剂均不适用。通过研究发现,用磷酸盐溶液[0.1 mol·L-1磷酸氢二钠溶液-0.1 mol·L-1磷酸二氢钾溶液(2∶1)]作为溶剂,既解决了溶解度的问题,又能满足葡聚糖凝胶G-10凝胶柱的适用范围。因为磷酸盐溶液为流动相中使用部分,有效避免了干扰。用葡聚糖凝胶G-10凝胶色谱系统实现了对本品中高分子杂质的分离分析。本法操作简便,结果准确,重复性好,可作为头孢地尼颗粒中高分子聚合物检测的常规方法。

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DOI 10.3870/yydb.2014.12.025

R978.1;R927.2

B

1004-0781(2014)12-1634-02

2013-12-12

2014-03-21

张宇佳(1977-),女,北京人,助理研究员,学士,从事药物制剂及质量研究工作。电话:010-63165233,E-mail:zhyj@imm.ac.cn。

郑稳生(1966-),男,安徽潜山人,副研究员,博士,从事药物制剂及质量研究工作。电话:010-63165233,E-mail:zhengwensheng@imm.ac.cn。