2008—2009年白城市沙门菌流行特征及脉冲场凝胶电泳分子分型

王宏

摘 要：分析2008—2009年白城市沙门菌流行特征及脉冲场凝胶电泳（PFGE）分子分型。发现沙门菌的流行具有明显季节性，6～9月份高发，患者年龄多为18～40岁，男女比例为2∶1，肠炎沙门茵和鼠伤寒沙门菌为优势菌型。得出的结论是2008—2009年白城市沙门菌的流行具有性别、年龄和季节性分布特征。

关键词：沙门菌 流行特征 分子分型

中图分类号：R378 文献标识码：A 文章编号：1674-098X（2014）01（a）-0254-01

沙门菌是我国食源性传染病最常见的致病菌，血清型复杂，可以分为2700多个血清型。目前脉冲场凝胶电泳是国际上公认的确认食源性传染病暴发流行的重要手段，已被应用于多种病原体的监测分析中。与传统的血清分型方法相比，PFGE具有更高的敏感度与分辨力，能够分析同一时段不同时期菌株之间的内在联系，根据菌株基因组问的相似程度可以解释流行的内在规律，早期识别是否暴发。通过PFGE分型方法对2008—2009年白城市沙门菌分离株的分子特征进行研究和分析，为今后暴发疫情的分子诊断和溯源提供资料。

1 材料与方法

菌株：实验所用菌株主要包括2008—2009年来自白城市肠道门诊监测系统中散发腹泻患者，聚集性疫情的人源、食品中分离到的沙门菌株共计141株，其中5株来源于食品，包括牡蛎（3株）及凉拌菜（2株），其余136株均来自患者的粪便。在136例患者中，个别患者信息缺失，其中129例患者季节分布和性别分布信息齐全；131例年龄分布信息齐全。

主要试剂与仪器：

（1）主要试剂：培养基SS和LB琼脂、微量生化管、Seakem Gold琼脂糖、蛋白酶K、限制性内切酶Xba I、VITEK GNI鉴定板、沙门菌诊断血清。

（2）主要仪器：SW22型水浴摇床、5415D型台式高速离心机、VITEK浊度仪、实验用去离子水系统、凝胶成像系统、脉冲场凝胶电泳仪及配套设备。

方法：

（1）菌株的生化鉴定和血清分型：从SS选择性平板上直接挑取数个可疑菌落，接种在三糖铁琼脂，接种方法先于斜面划线后穿刺直立段，36 ℃培养过夜。底层黄色产气、斜面红色、硫化氢阳性为可疑沙门菌。用VITEK伞自动生化分析仪进行鉴定，确定为沙门菌属后，用沙门菌诊断血清进行分型，有些菌株需要连续诱导，才能确定鞭毛第2相H抗原的型别。根据Kauffman-White血清分型标准，确定每株菌的血清型别。（2）PFGE分型：按照美国CDC公布的沙门菌脉冲场电泳标准分型方法，对141株沙门菌菌株进行分子分犁。沙门菌标准株H9812做为分子量标记。内切酶Xba I（40 u），37 ℃酶切3 h。电泳条件：脉冲时间从2.2～63.8 S，电压6 V/cm，线性转换，转换角度1200，电泳温度14 ℃，电泳时间19 h。PFGE电泳图谱中，每条泳道代表l株菌，在限制性内切酶的切割下，不同的菌株会呈现不同的条带数和片段大小。电泳图像经过统一的分子量标准进行校准，将条带数和位置相同的菌株归为同一PFGE型别。然后按照食源性疾病监测网络带型命名规则命名为JABx01.CN，其中JPX代表鼠伤寒沙门菌、JEG代表肠炎沙门菌，以此类推，C表示是中国分离株的分析带型，N表示带型的编号，X01表示限制性内切酶Xba I。

沙门菌的血清型及流行特征：

（1）菌株的血清型分布：141株菌分为20种血清型。肠炎沙门菌和鼠伤寒沙门菌分别占47.2%和19.1%，是近2年白城市沙门菌中感染的优势血清型。

（2）时间分布：从肠道门诊监测系统记录的腹泻患者发病时间和菌株分离时间可知沙门菌感染的时间分布特点。全年12个月份均能分离到菌株，感染的高发季节为6、7月份，共分离到92株菌，占65.25%。

（3）患者性别、年龄分布：2008—2009年沙门菌感染的患者中，男件84例，女性57例，男女比例为1.47∶l。发病年龄多集中在18～40岁，占50.2%；其次为0～6岁的儿童，占23.7%。

2 讨论

该研究显示，白城地区2008—2009年沙门菌感染以鼠伤寒沙门菌和肠炎沙门菌为优势血清型，该结果与近10年白城地区流行的主要沙门菌血清型相符合。沙门菌感染者的人群特征是18～40岁成年组高发，可能是因为这个年龄段人群在外就餐几率大，频率多，所以，感染率高；至于儿童组也有一定的发病比例，可能是由于自身的免疫系统不够完善较为易感。通过对141株沙门菌进行PFGE分型，共得到71种PFGE带型，反映了沙门菌的PFGE型别较多，呈现多样性。endprint