山莨菪碱和芬太尼后处理联合缺血后适应对兔心肌缺血再灌注损伤SOD、MDA 的影响

李方江，张文婷，杜美玲，王晓元，李宝亮，李 清，李慧敏，陈莉峰，要 彤

（1.河北北方学院附属第一医院心血管内科，河北 张家口075000；2.河北北方学院附属第一医院心电图室，河北 张家口075000；3.河北北方学院研究生部，河北 张家口075000；4.河北北方学院附属第一医院检验科，河北 张家口075000；5.河北北方学院附属第一医院导管手术室，河北 张家口075000；6.河北省张家口市宣化区医院眼科，河北 张家口075000）

随着介入治疗的开展，心肌缺血再灌注损伤 （myocardial ischemia and reperfusion injury，MIRI）成为心血管领域的重要问题。缺血后适应 （ischemic post－conditioning，IPOC）能提高心肌对之前较长时间I／R 的耐受性，从而减轻MIRI［1］。药物后处理 （pharmacologic post－conditioning，PPOC）是在不同的干预时间 （再灌注期间或再灌注后）给予药物可对MIRI起到保护作用［2］。本研究拟观察山莨菪碱和芬太尼PPOC与IPOC联合对兔心肌缺血再灌注心肌细胞氧化应激相关指标超氧化物歧化酶 （superoxide dismutase，SOD）酶蛋白活力浓度、丙二醛 （manlondialdehyde，MDA）浓度的影响。

1 材料与方法

1.1 动物与试剂

1.1.1 实验动物 健康日本大耳白兔32只，体质量2.5～3.5kg。雌雄各半，河北北方学院动物实验中心提供。

1.1.2 主要药品及试剂 盐酸消旋山莨菪碱 （规格：10mg·mL－1，生产批号6923671403472山西晋新双鹤药业有限责任公司）；芬太尼 （规格：0.1mg·2mL－1，生产批号1130705A1宜昌人福药业有限公司生产）；乌拉坦 （北京笃信精细制剂厂）；96孔板超氧化物歧化酶 （superoxide dismutase，SOD）测定试剂盒、96孔板丙二醛 （manlondialdehyde，MDA）测定试剂盒 （武汉博士德生物科技有限公司）。

1.1.3 仪器 LEAD－2000多道电生理记录仪 （四川锦江电子科技有限公司）；动物呼吸机 （TOPO，美国Kent公司）；Rayto酶标仪 （RT－2100C，美国Rayto公司）；中佳中低速台式离心机 （KDC－40，浙江科大创新股份有限公司中佳分公司）；恒温水浴箱 （美国Thermo公司）；医用DW－86W420低温冷冻冰箱（－86 ℃，山东海尔）。

1.2 实验方法

1.2.1 动物模型的制备 实验动物应用20%乌拉坦5mL·kg－1麻醉并固定。四肢及胸前皮下置入电极，连接LEAD－2000多道电生理记录仪。气管插管接动物呼吸机，频率45次·min－1，氧流量0.8L·min－1。沿胸骨左缘3～4肋间隙作切口，逐层分离，切开心包。拨开左心耳可见左冠状动脉自主动脉根部发出，确认左冠状动脉前降支 （left anterior descending coronary artery，LAD）即沿左室间沟下行的动脉分支，在LAD 根部穿双股2－0号丝线，结扎其中一股造成心肌梗死，采用缺血30min，复灌120min建立心肌I／R 模型。缺血后处理采用推管法，复灌30s／缺血30s，重复3次。

1.2.2 实验动物分组 32只健康日本大耳白兔按随机区组法随机分为4组 （每组8只），分别为： （1）假手术组 （sham－operated group，S组）：仅开胸并分离LAD，但不阻断血流； （2）缺血再灌注组 （ischemia－reperfusion，I／R 组）：结扎LAD30min后，复灌120 min； （3）缺血后适应组 （ischemic postconditioning，IPOC组）：结扎LAD 30min后，于复灌即刻，给予3轮复灌30s／缺血30s作为后处理，复灌120min； （4）联合用药后处理＋缺血后适应组 （anisodamine and fentanyl post－conditioning combined with ischemic post－conditioning group，A＋F＋IPOC组）：结扎LAD 28min时，沿兔耳缘静脉注射山莨菪碱5mg·kg－1、芬太尼5μg·kg－1，30min时给予3轮复灌30s／缺血30s作为后处理。

1.3 监测指标

SOD 酶蛋白活力浓度及MDA 浓度：各组于再灌注结束即刻颈动脉抽取动脉血1 mL，以4500r·min－1分离血清，－80 ℃冰箱保存，解冻后以黄嘌呤氧化酶法用SOD 测定试剂盒测定SOD 酶蛋白活力，MDA 浓度以硫代巴比妥酸盐 （thiobarbituricacid，TBA）法用MDA 测定试剂盒测定。

1.4 统计学方法

采用SPSS 17.0统计软件进行分析，计量资料用均数±标准差 （±s）表示。心肌细胞氧化损伤指标行单因素方差分析，组间比较采用SNK－q检验。P＜0.01为差异有统计学意义。

2 结 果

与S组比较，I／R 组、IPOC组的SOD 酶蛋白活力浓度显著降低 （P＜0.01）；与I／R 组比较，IPOC组、A＋F＋IPOC组SOD 酶蛋白活力浓度明显升高 （P＜0.01）；与IPOC组比较，A＋F＋IPOC组SOD酶蛋白活力浓度明显升高 （P＜0.01）。与S组比较，I／R 组、IPOC组的MDA 浓度显著升高（P＜0.01）；与I／R 组比较，IPOC 组、A＋F＋IPOC 组MDA 浓度明显降低 （P＜0.01）；与IPOC 组比较，A＋F＋IPOC组MDA 浓度明显降低 （P＜0.01）。S组同A＋F＋IPOC组比较SOD 酶蛋白活力浓度、MDA 浓度差异无显著性 （P＞0.05）（表1）。

表1 不同处理组外周血SOD 酶蛋白活力、MDA 浓度比较 （±s）

注：与S组比较，＊P＜0.01；与I／R 组比较，▲P＜0.01；与IPOC组比较，△P＜0.01。

n SOD （U·mL－1） MDA （nmol·mL－1）8 226.75±20.84 2.13±0.47 I／R 组 8 81.63±20.84＊ 6.28±0.59＊IPOC组 8 130.18±20.44＊▲ 4.42±0.47＊▲A＋F＋IPOC组 8 213.44±18.22▲△ 2.39±0.40 S组▲△

3 讨 论

心肌梗死是危害人类健康的重要疾病之一，其最有效的治疗措施是及时恢复血运重建，挽救存活缺血心肌，但恢复血流后由于自由基大量生成、钙离子超负荷、能量代谢障碍等原因引起心肌超微结构、电生理、功能及代谢的进一步损害。再灌注损伤导致心肌和微血管功能顿抑，心律失常及心肌梗死，严重影响缺血后心脏功能的恢复，危及病人生命。研究表明：抗心肌缺血再灌注损伤的措施包括IPOC 和PPOC，其中IPOC已有大量的动物实验及小样本临床研究证实其具有临床可控性和广泛的临床应用价值［3］。山莨菪碱具有降低血小板聚集从而抑制血栓形成、改善微循环、提高冠脉灌注压保护心肌作用［4］，山莨菪碱可激活KATP通道，阻止细胞外钙离子内流，减轻细胞内钙超载，减轻心肌缺血再灌注损伤；并可增加Bcl－2 mRNA 表达，抗血管内皮凋亡［5－6］。芬太尼通过作用于ATP敏感性钾通道，降低氧化损伤，减少心律失常的发生，减少心肌梗死面积，减轻MIRI［7］。

缺血再灌注后，因活性氧产生过多或抗氧化酶类活性下降，氧自由基大量生成，介导脂质过氧化物反应增强，通过与生物膜磷脂中的多不饱和脂肪酸发生反应，形成以MDA 为代表的一系列脂质过氧化产物，导致组织损伤［8］，因此，MDA 作为血清代谢指标可间接反映心肌细胞损伤的严重程度。SOD 是体内的主要抗氧化酶，可通过清除氧自由基，保护细胞免受自由基的损伤。

本研究通过对SOD 和MDA 水平的测定，评价不同处理方式对缺血再灌注心肌的保护作用，表明山莨菪碱与芬太尼后处理联合心肌缺血后适应可显著降低心肌缺血再灌注兔外周血丙二醛浓度、提高超氧化物歧化酶酶蛋白活力浓度，具有减轻心肌缺血再灌注损伤的作用。

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