血清p185蛋白检测在乳腺癌诊断及预后判断中的价值

孙 峰，林 兰，刘继斌（南通市肿瘤医院／南通大学附属南通肿瘤医院，江苏南通 226361）

近年来，乳腺癌发病率显著上升，且发病年龄呈年轻化趋势，严重威胁女性健康［1］。原癌基因 Her－2是p185蛋白的编码基因，也是乳腺癌的主要致病相关基因。20%～30%的乳腺癌患者过表达p185蛋白，且转移性乳腺癌患者肿瘤组织中的p185蛋白更易进入外周血中，导致血清p185蛋白水平的升高［2－3］。本研究采用免疫聚合酶链反应（PCR）技术检测健康者及乳腺癌患者血清p185蛋白水平，分析了血清p185蛋白检测在乳腺癌早期诊断及预后判断中的临床价值，结果报道如下。

1 资料与方法

1．1 一般资料 2008～2010年于本院经病理学检查确诊并接受手术治疗的乳腺癌初诊患者60例，术前均未接受任何抗癌治疗。同期于本院体检健康的女性60例纳入健康对照组。

1．2 仪器与试剂 德国Biometra公司温度梯度PCR扩增仪，美国Pharmacia公司ECPS3000／150型电泳仪，美国Beckman公司Allegra 64R型高速低温离心机，美国BIO－RAD公司凝胶图像分析仪，上海复生生物工程公司紫外反射透射仪，上海华美生物工程公司酶标软板（96孔）。琼脂糖购自中国科学院上海药物研究所，溴化乙锭（EB）购自华美生物工程公司，鼠抗人p185单克隆抗体购自北京中山生物技术有限公司，超敏SP（鼠）试剂盒、DAB显色试剂盒、苏木素复染试剂盒购自福州迈新生物技术开发公司，IgG－DNA探针购自上海闪晶生物公司。

1．3 方法 （1）采集所有受试对象静脉血，常规离心后分离血清标本。（2）取酶标软板，每孔加入10g／mL p185单克隆抗体100μL，4℃孵育过夜；洗涤液洗涤3次后每孔加入200μL封闭液，37℃封闭3h；洗涤液洗涤3次后每孔加入100μL血清，37℃孵育40min；洗涤液洗涤3次后每孔加入1∶1 000稀释的IgG－DNA探针50μL，37℃孵育45min；洗涤液洗涤10次后加入PCR混合物，覆盖70μL石蜡油，在PCR扩增仪上进行扩增（94℃2min，94℃40s、55℃40s、72℃60s循环35次，72℃5min）；取PCR扩增产物20μL加入2%琼脂糖凝胶中电泳，EB染色后在紫外反射透射仪上观察结果并照相。同时设PCR阳性对照，采用相同方法进行PCR扩增。（3）对每位患者进行随访，生存期计算从治疗开始到患者死亡或2011年4月底末次随访日终止。

1．4 统计学处理 采用SPSS12．0统计软件对计数资料进行卡方检验，检验水准α＝0．05，P＜0．05为比较差异有统计学意义。

2 结 果

2．1 血清p185蛋白检测阳性率比较 乳腺癌患者血清p185蛋白阳性率为41．7%（25／60），健康对照组阳性率为0．0%（0／60），组间比较差异有统计学意义（χ2＝31．578，P＜0．05）。

2．2 肿瘤组织与血清p185蛋白的关系 26例肿瘤组织p185蛋白阳性乳腺癌患者中，25例为血清p185蛋白阳性，阳性率为96．15%（25／26），34例肿瘤组织p185蛋白阴性患者血清p185蛋白均为阴性，二者血清p185蛋白阳性率比较差异有统计学意义（χ2＝56．043，P＜0．05）。

2．3 血清p185蛋白与患者临床病理特征的关系 乳腺癌患者血清p185蛋白与肿瘤大小（χ2＝11．421，P＜0．05）、临床分期（χ2＝9．145，P＜0．05）关系密切，但与绝经状态、雌激素受体（ER）状态、孕激素受体（PR）状态、淋巴结转移等均无相关性（P＞0．05），见表1。

表1 乳腺癌患者血清p185蛋白与临床病理特征的关系

2．4 血清p185蛋白与乳腺癌复发或转移的关系 60例乳腺癌患者在随访期中，28例复发或转移，占46．7%（28／60）；25例血清p185阳性患者中，19例复发或转移，占76．0%（19／25），35例血清p185阴性患者中，9例复发或转移，占25．7%（9／35），复发率或转移率组间比较差异有统计学意义（χ2＝14．816，P＜0．05）。

3 讨 论

原癌基因Her－2是乳腺癌的主要致病相关基因，95%以上的Her－2基因扩增阳性乳腺癌组织标本可检出p185蛋白的过度表达。目前，血清p185蛋白和肿瘤组织p185蛋白表达一致性还存在争议［4］。免疫PCR技术能检出血清中极微量的p185蛋白，为乳腺癌早期诊断及病情监测提供了新的方法［5－6］。本研究采用该技术检测了乳腺癌患者血清p185蛋白，结果显示血清p185蛋白和乳腺癌组织p185蛋白具有一定的相关性。

有研究显示，乳腺癌肿瘤组织p185蛋白表达与ER、PR表达呈负相关，与肿瘤大小、淋巴结转移状态、临床分期无相关性［7］。但也有学者认为，乳腺癌肿瘤组织p185蛋白表达与ER、PR表达呈负相关，与临床分期、腋下淋巴结转移显著相关，与患者年龄、肿瘤大小无相关性［8］。本研究结果显示，乳腺癌患者血清p185蛋白与肿瘤大小、临床分期关系密切，但与绝经状态、ER、PR、淋巴结转移情况等均无关系。由此可见，乳腺癌组织中的p185蛋白可以分泌进入外周血，且乳腺癌肿瘤组织越大、临床分期越高，分泌进入外周血中的p185蛋白越多，而分泌量的多少和绝经状态、ER、PR、淋巴结转移情况等均无关系。

乳腺癌预后评估主要依据肿瘤部位与大小、临床分期、病理组织分期及有无淋巴结转移，临床分期高、病理组织低分化以及淋巴结转移通常提示预后不良。肿瘤组织p185蛋白过度表达的乳腺癌患者容易复发，并且总体生存率和无复发生存率都低，其预后意义仅次于腋下淋巴结转移，是独立于其他预后因子之外的预后因子［9－10］。本结果显示，血清p185蛋白阳性乳腺癌患者复发率或转移率明显高于血清p185蛋白阴性患者，提示血清p185蛋白检测亦用于监测肿瘤复发或转移。

综上所述，乳腺癌患者血清p185蛋白阳性率较高，与肿瘤大小、临床分期关系密切，血清p185蛋白阳性患者较阴性患者更易出现复发或转移；免疫PCR技术检测血清p185蛋白可用于乳腺癌早期诊断、病情监测及预后判断。

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