豪猪致病性大肠杆菌的分离鉴定与药敏试验

张保平

摘要：从腹泻病死仔豪猪的心血、肝脏、脾脏和腹泻粪便中分离到2株细菌，染色镜检革兰氏阴性，细菌在麦康凯培养基上呈红色菌落。生化试验结果显示分离到的2株细菌对葡萄糖、乳糖、麦芽糖产酸产气，不分解尿素，无硫化氢产生。药敏试验结果表明，分离到的2株细菌对头孢噻吩、头孢曲松、先锋霉素、庆大霉素、卡那霉素、链霉素、万古霉素、复方新诺明等高度敏感。动物致病性试验结果表明，分离到的2株细菌对小鼠有强致病性。

关键词：豪猪；大肠埃希菌；分离；鉴定

中图分类号： S855.1+2文献标志码： A文章编号：1002-1302（2014）09-0189-02

1材料和方法

1.1材料

1.1.1药品麦康凯培养基，购于北京奥博星生物技术责任有限公司；普通营养肉汤培养基，自制；营养琼脂培养基，购于北京奥博星生物技术责任有限公司；细菌微量发酵管，杭州天和微生物试剂有限公司生产；药敏纸片，北京天坛药物生物技术开发公司生产。

1.1.2试验动物20～22 g小白鼠：购自湖南农业大学小动物房。

1.1.3病料来源湖南常德市桃源县堆金豪猪养殖基地发生仔豪猪黄痢的病死豪猪的心血、肝脏、脾脏和腹泻粪便。

1.2方法

1.2.1细菌分离取病死仔豪猪的心血、肝、脾和粪便，分别接种于普通营养肉汤中，37 ℃培养24 h，取有细菌生长的普通营养肉汤接种于麦康凯琼脂平板，37 ℃培养24 h，观察并记录。

1.2.2细菌纯培养将以上麦康凯培养基中的红色菌落接种于普通营养肉汤中37 ℃培养24 h，再将肉汤接种于麦康凯琼脂37 ℃培养24 h，进行细菌纯化。

1.2.3油镜镜检取普通营养肉汤及麦康凯培养基中的细菌，涂片，革兰氏染色镜检。

1.2.4生化试验按文献[9]的方法进行，取分离菌接种于细菌微量发酵管中，37 ℃培养，每隔24 h观察1次，连续7 d，并做好记录。

1.2.5动物试验用20只20～22 g健康正常的小白鼠，进行致病性测定，将小鼠分为2组，实验组14只，对照组6只，实验组每只小白鼠腹腔注射分离菌肉汤培养物0.2 mL，对照组每只小白鼠腹腔注射灭菌肉汤培养物0.2 mL。饲养并观察，同时对死亡小鼠剖检，心血接种于普通营养肉汤中37 ℃培养24 h，染色镜检，观察是否为接种菌。

1.2.6药敏试验将分离菌株按Kirthybeuer建立的K-B纸片法[10]进行药敏试验，依次将药敏纸片均匀贴于琼脂平板表面并做好标记，37 ℃培养24 h，测量抑菌圈的直径。

2结果与分析

2.1细菌的形态

该豪猪场病死仔豪猪的心血、肝、脾和粪便，接种于普通营养肉汤中，发现营养肉汤均匀浑浊，管底有沉淀；接种在麦康凯琼脂平板上长出圆形、表面光滑、湿润的红色菌落。涂片染色镜检可见红色、中等大小、短小的革兰氏阴性杆菌。

2.2生化特性

从生化试验结果可以看出，分离的2株细菌都能发酵葡萄糖、甘露糖、蔗糖、乳糖、麦芽糖和鼠李糖，并产酸产气；均不产生硫化氢，不分解尿素，不利用枸橼酸盐；吲哚和甲基红试验（MR）均为阳性，VP试验为阴性（表1），由此可判定分离的2株细菌为大肠埃希菌。

2.3动物试验结果

每只小白鼠腹腔注射分离菌肉汤的试验组小白鼠全部死亡，而每只小白鼠腹腔注射灭菌肉汤的对照组小白鼠存活。从死亡的小白鼠的心血中分离到接种菌。

2.4药敏试验结果

2株分离菌对头孢曲松等15种供试药物存在不同的反应性，其中分离菌对阿莫西林、吡哌酸、青霉素G、羧苄青霉素和环丙沙星等耐药；分离菌对头孢噻肟和诺氟沙星敏感性中等；高敏药物分别为头孢曲松、头孢噻吩、链霉素、万古霉素、卡那霉素、复方新诺明、先锋霉素和庆大霉素（表2）。

表1豪猪致病细菌生化试验结果

试验名称结果试验名称结果葡萄糖+卫茅醇-甘露糖+山梨醇+麦芽糖+VP试验-蔗糖+甘露醇+乳糖5+甲基红（MR） 试验+鼠李糖+赖氨酸脱羧酶-棉籽糖-鸟氨酸脱羧酶-β-半乳糖苷-尿素-七叶苷吲哚试验+蛋白胨-H2S试验-枸橼酸盐-氨基酸对照-注：“+”表示阳性或有反应，“-”表示阴性或无反应。

3讨论

从湖南常德地区病死仔豪猪中分离的细菌经革兰氏染色镜检，为两端钝圆的革兰氏阴性短小杆菌；麦康凯琼脂培养基上，长出圆形、凸起，光滑半透明的红色菌落。生化试验结果显示，对葡萄糖、乳糖、麦芽糖产酸产气，不分解尿素，无硫化氢产生，与大肠杆菌的生化特征[11]相符。接种小白鼠，小鼠全部死亡，由此证实从病死仔豪猪病料中分离到的2株细菌均是致病性大肠杆菌。另外由于试验设备欠缺，是否由病毒引起腹泻未能进行试验，但在仔豪猪腹泻病的诊断、治疗和防治过程中也不能忽视这些因素的影响。

经调查，该豪猪场在仔豪猪发生腹泻病时，曾使用了大量环丙沙星进行治疗，但效果不明显。通过药敏试验发现，该菌已经对环丙沙星、阿莫西林、吡哌酸、青霉素G、羧苄青霉素产生耐药性，而头孢曲松、头孢噻吩、链霉素、万古霉素、卡那霉素、复方新诺明、先锋霉素和庆大霉素是高敏药物，在治疗时应作为首选药。因此在应用抗生素药物进行治疗时应进行药敏试验，避免不必要的经济损失。

豪猪大肠杆菌病跟其他动物大肠杆菌病一样，也是一种条件性疾病，本病最主要的防治措施是搞好豪猪舍环境卫生，改善饲养管理条件，防止水源污染，搞好清洁卫生和消毒工作。由于豪猪野性明显，听觉、嗅觉敏感，视觉发达，在饲养管理上，尽量保持环境安静，由专人负责，减少对豪猪的应激刺激有利于防止大肠杆菌病的发生。

参考文献：

[1]张荣祖. 中国哺乳动物分布[M]. 北京：中国林业出版社，1997：172.

[2]王玉玺，张淑云. 中国兽类分布名录（四）[J]. 野生动物，1993，14（5）：10-11.

[3]王酉之，胡锦矗. 四川兽类原色图鉴[M]. 北京：中国林业出版社，1999：251.

[4]彭孟德，张晓梅. 特种药用动物养殖与加工技术[M]. 长沙：湖南科学技术出版社，1994：65-68.

[5]常祖光. 药用豪猪可大力养殖[J]. 农村实用科技信息，2005（9）：40.

[6]郑国英. 豪猪人工养殖技术[J]. 云南农业，2005（3）：12.

[7]武深秋. 豪猪的养殖技术[J]. 当代畜禽养殖业，2004（7）：44.

[8]崔盛平. 豪猪的驯养特性[J]. 经济动物学报，2001，5（3）：59-61.

[9]方定一，侯从远，杜念兴，等. 兽医微生物实验指导[M]. 北京：中国农业出版社，2001.

[10]盛彤笙. 兽医微生物学实验指导[M]. 南京：畜牧兽医图书出版社，1957.

[11]陆承平. 兽医微生物和免疫学[M]. 3版.北京：中国农业出版社，2001：215.李玉全. 盐度对脊尾白虾生长、摄食及饵料转化率的影响[J]. 江苏农业科学，2014，42（9）：191-193.endprint

摘要：从腹泻病死仔豪猪的心血、肝脏、脾脏和腹泻粪便中分离到2株细菌，染色镜检革兰氏阴性，细菌在麦康凯培养基上呈红色菌落。生化试验结果显示分离到的2株细菌对葡萄糖、乳糖、麦芽糖产酸产气，不分解尿素，无硫化氢产生。药敏试验结果表明，分离到的2株细菌对头孢噻吩、头孢曲松、先锋霉素、庆大霉素、卡那霉素、链霉素、万古霉素、复方新诺明等高度敏感。动物致病性试验结果表明，分离到的2株细菌对小鼠有强致病性。

关键词：豪猪；大肠埃希菌；分离；鉴定

中图分类号： S855.1+2文献标志码： A文章编号：1002-1302（2014）09-0189-02

1材料和方法

1.1材料

1.1.1药品麦康凯培养基，购于北京奥博星生物技术责任有限公司；普通营养肉汤培养基，自制；营养琼脂培养基，购于北京奥博星生物技术责任有限公司；细菌微量发酵管，杭州天和微生物试剂有限公司生产；药敏纸片，北京天坛药物生物技术开发公司生产。

1.1.2试验动物20～22 g小白鼠：购自湖南农业大学小动物房。

1.1.3病料来源湖南常德市桃源县堆金豪猪养殖基地发生仔豪猪黄痢的病死豪猪的心血、肝脏、脾脏和腹泻粪便。

1.2方法

1.2.1细菌分离取病死仔豪猪的心血、肝、脾和粪便，分别接种于普通营养肉汤中，37 ℃培养24 h，取有细菌生长的普通营养肉汤接种于麦康凯琼脂平板，37 ℃培养24 h，观察并记录。

1.2.2细菌纯培养将以上麦康凯培养基中的红色菌落接种于普通营养肉汤中37 ℃培养24 h，再将肉汤接种于麦康凯琼脂37 ℃培养24 h，进行细菌纯化。

1.2.3油镜镜检取普通营养肉汤及麦康凯培养基中的细菌，涂片，革兰氏染色镜检。

1.2.4生化试验按文献[9]的方法进行，取分离菌接种于细菌微量发酵管中，37 ℃培养，每隔24 h观察1次，连续7 d，并做好记录。

1.2.5动物试验用20只20～22 g健康正常的小白鼠，进行致病性测定，将小鼠分为2组，实验组14只，对照组6只，实验组每只小白鼠腹腔注射分离菌肉汤培养物0.2 mL，对照组每只小白鼠腹腔注射灭菌肉汤培养物0.2 mL。饲养并观察，同时对死亡小鼠剖检，心血接种于普通营养肉汤中37 ℃培养24 h，染色镜检，观察是否为接种菌。

1.2.6药敏试验将分离菌株按Kirthybeuer建立的K-B纸片法[10]进行药敏试验，依次将药敏纸片均匀贴于琼脂平板表面并做好标记，37 ℃培养24 h，测量抑菌圈的直径。

2结果与分析

2.1细菌的形态

该豪猪场病死仔豪猪的心血、肝、脾和粪便，接种于普通营养肉汤中，发现营养肉汤均匀浑浊，管底有沉淀；接种在麦康凯琼脂平板上长出圆形、表面光滑、湿润的红色菌落。涂片染色镜检可见红色、中等大小、短小的革兰氏阴性杆菌。

2.2生化特性

从生化试验结果可以看出，分离的2株细菌都能发酵葡萄糖、甘露糖、蔗糖、乳糖、麦芽糖和鼠李糖，并产酸产气；均不产生硫化氢，不分解尿素，不利用枸橼酸盐；吲哚和甲基红试验（MR）均为阳性，VP试验为阴性（表1），由此可判定分离的2株细菌为大肠埃希菌。

2.3动物试验结果

每只小白鼠腹腔注射分离菌肉汤的试验组小白鼠全部死亡，而每只小白鼠腹腔注射灭菌肉汤的对照组小白鼠存活。从死亡的小白鼠的心血中分离到接种菌。

2.4药敏试验结果

2株分离菌对头孢曲松等15种供试药物存在不同的反应性，其中分离菌对阿莫西林、吡哌酸、青霉素G、羧苄青霉素和环丙沙星等耐药；分离菌对头孢噻肟和诺氟沙星敏感性中等；高敏药物分别为头孢曲松、头孢噻吩、链霉素、万古霉素、卡那霉素、复方新诺明、先锋霉素和庆大霉素（表2）。

表1豪猪致病细菌生化试验结果

试验名称结果试验名称结果葡萄糖+卫茅醇-甘露糖+山梨醇+麦芽糖+VP试验-蔗糖+甘露醇+乳糖5+甲基红（MR） 试验+鼠李糖+赖氨酸脱羧酶-棉籽糖-鸟氨酸脱羧酶-β-半乳糖苷-尿素-七叶苷吲哚试验+蛋白胨-H2S试验-枸橼酸盐-氨基酸对照-注：“+”表示阳性或有反应，“-”表示阴性或无反应。

3讨论

从湖南常德地区病死仔豪猪中分离的细菌经革兰氏染色镜检，为两端钝圆的革兰氏阴性短小杆菌；麦康凯琼脂培养基上，长出圆形、凸起，光滑半透明的红色菌落。生化试验结果显示，对葡萄糖、乳糖、麦芽糖产酸产气，不分解尿素，无硫化氢产生，与大肠杆菌的生化特征[11]相符。接种小白鼠，小鼠全部死亡，由此证实从病死仔豪猪病料中分离到的2株细菌均是致病性大肠杆菌。另外由于试验设备欠缺，是否由病毒引起腹泻未能进行试验，但在仔豪猪腹泻病的诊断、治疗和防治过程中也不能忽视这些因素的影响。

经调查，该豪猪场在仔豪猪发生腹泻病时，曾使用了大量环丙沙星进行治疗，但效果不明显。通过药敏试验发现，该菌已经对环丙沙星、阿莫西林、吡哌酸、青霉素G、羧苄青霉素产生耐药性，而头孢曲松、头孢噻吩、链霉素、万古霉素、卡那霉素、复方新诺明、先锋霉素和庆大霉素是高敏药物，在治疗时应作为首选药。因此在应用抗生素药物进行治疗时应进行药敏试验，避免不必要的经济损失。

豪猪大肠杆菌病跟其他动物大肠杆菌病一样，也是一种条件性疾病，本病最主要的防治措施是搞好豪猪舍环境卫生，改善饲养管理条件，防止水源污染，搞好清洁卫生和消毒工作。由于豪猪野性明显，听觉、嗅觉敏感，视觉发达，在饲养管理上，尽量保持环境安静，由专人负责，减少对豪猪的应激刺激有利于防止大肠杆菌病的发生。

参考文献：

[1]张荣祖. 中国哺乳动物分布[M]. 北京：中国林业出版社，1997：172.

[2]王玉玺，张淑云. 中国兽类分布名录（四）[J]. 野生动物，1993，14（5）：10-11.

[3]王酉之，胡锦矗. 四川兽类原色图鉴[M]. 北京：中国林业出版社，1999：251.

[4]彭孟德，张晓梅. 特种药用动物养殖与加工技术[M]. 长沙：湖南科学技术出版社，1994：65-68.

[5]常祖光. 药用豪猪可大力养殖[J]. 农村实用科技信息，2005（9）：40.

[6]郑国英. 豪猪人工养殖技术[J]. 云南农业，2005（3）：12.

[7]武深秋. 豪猪的养殖技术[J]. 当代畜禽养殖业，2004（7）：44.

[8]崔盛平. 豪猪的驯养特性[J]. 经济动物学报，2001，5（3）：59-61.

[9]方定一，侯从远，杜念兴，等. 兽医微生物实验指导[M]. 北京：中国农业出版社，2001.

[10]盛彤笙. 兽医微生物学实验指导[M]. 南京：畜牧兽医图书出版社，1957.

[11]陆承平. 兽医微生物和免疫学[M]. 3版.北京：中国农业出版社，2001：215.李玉全. 盐度对脊尾白虾生长、摄食及饵料转化率的影响[J]. 江苏农业科学，2014，42（9）：191-193.endprint

摘要：从腹泻病死仔豪猪的心血、肝脏、脾脏和腹泻粪便中分离到2株细菌，染色镜检革兰氏阴性，细菌在麦康凯培养基上呈红色菌落。生化试验结果显示分离到的2株细菌对葡萄糖、乳糖、麦芽糖产酸产气，不分解尿素，无硫化氢产生。药敏试验结果表明，分离到的2株细菌对头孢噻吩、头孢曲松、先锋霉素、庆大霉素、卡那霉素、链霉素、万古霉素、复方新诺明等高度敏感。动物致病性试验结果表明，分离到的2株细菌对小鼠有强致病性。

关键词：豪猪；大肠埃希菌；分离；鉴定

中图分类号： S855.1+2文献标志码： A文章编号：1002-1302（2014）09-0189-02

1材料和方法

1.1材料

1.1.1药品麦康凯培养基，购于北京奥博星生物技术责任有限公司；普通营养肉汤培养基，自制；营养琼脂培养基，购于北京奥博星生物技术责任有限公司；细菌微量发酵管，杭州天和微生物试剂有限公司生产；药敏纸片，北京天坛药物生物技术开发公司生产。

1.1.2试验动物20～22 g小白鼠：购自湖南农业大学小动物房。

1.1.3病料来源湖南常德市桃源县堆金豪猪养殖基地发生仔豪猪黄痢的病死豪猪的心血、肝脏、脾脏和腹泻粪便。

1.2方法

1.2.1细菌分离取病死仔豪猪的心血、肝、脾和粪便，分别接种于普通营养肉汤中，37 ℃培养24 h，取有细菌生长的普通营养肉汤接种于麦康凯琼脂平板，37 ℃培养24 h，观察并记录。

1.2.2细菌纯培养将以上麦康凯培养基中的红色菌落接种于普通营养肉汤中37 ℃培养24 h，再将肉汤接种于麦康凯琼脂37 ℃培养24 h，进行细菌纯化。

1.2.3油镜镜检取普通营养肉汤及麦康凯培养基中的细菌，涂片，革兰氏染色镜检。

1.2.4生化试验按文献[9]的方法进行，取分离菌接种于细菌微量发酵管中，37 ℃培养，每隔24 h观察1次，连续7 d，并做好记录。

1.2.5动物试验用20只20～22 g健康正常的小白鼠，进行致病性测定，将小鼠分为2组，实验组14只，对照组6只，实验组每只小白鼠腹腔注射分离菌肉汤培养物0.2 mL，对照组每只小白鼠腹腔注射灭菌肉汤培养物0.2 mL。饲养并观察，同时对死亡小鼠剖检，心血接种于普通营养肉汤中37 ℃培养24 h，染色镜检，观察是否为接种菌。

1.2.6药敏试验将分离菌株按Kirthybeuer建立的K-B纸片法[10]进行药敏试验，依次将药敏纸片均匀贴于琼脂平板表面并做好标记，37 ℃培养24 h，测量抑菌圈的直径。

2结果与分析

2.1细菌的形态

该豪猪场病死仔豪猪的心血、肝、脾和粪便，接种于普通营养肉汤中，发现营养肉汤均匀浑浊，管底有沉淀；接种在麦康凯琼脂平板上长出圆形、表面光滑、湿润的红色菌落。涂片染色镜检可见红色、中等大小、短小的革兰氏阴性杆菌。

2.2生化特性

从生化试验结果可以看出，分离的2株细菌都能发酵葡萄糖、甘露糖、蔗糖、乳糖、麦芽糖和鼠李糖，并产酸产气；均不产生硫化氢，不分解尿素，不利用枸橼酸盐；吲哚和甲基红试验（MR）均为阳性，VP试验为阴性（表1），由此可判定分离的2株细菌为大肠埃希菌。

2.3动物试验结果

每只小白鼠腹腔注射分离菌肉汤的试验组小白鼠全部死亡，而每只小白鼠腹腔注射灭菌肉汤的对照组小白鼠存活。从死亡的小白鼠的心血中分离到接种菌。

2.4药敏试验结果

2株分离菌对头孢曲松等15种供试药物存在不同的反应性，其中分离菌对阿莫西林、吡哌酸、青霉素G、羧苄青霉素和环丙沙星等耐药；分离菌对头孢噻肟和诺氟沙星敏感性中等；高敏药物分别为头孢曲松、头孢噻吩、链霉素、万古霉素、卡那霉素、复方新诺明、先锋霉素和庆大霉素（表2）。

表1豪猪致病细菌生化试验结果

试验名称结果试验名称结果葡萄糖+卫茅醇-甘露糖+山梨醇+麦芽糖+VP试验-蔗糖+甘露醇+乳糖5+甲基红（MR） 试验+鼠李糖+赖氨酸脱羧酶-棉籽糖-鸟氨酸脱羧酶-β-半乳糖苷-尿素-七叶苷吲哚试验+蛋白胨-H2S试验-枸橼酸盐-氨基酸对照-注：“+”表示阳性或有反应，“-”表示阴性或无反应。

3讨论

从湖南常德地区病死仔豪猪中分离的细菌经革兰氏染色镜检，为两端钝圆的革兰氏阴性短小杆菌；麦康凯琼脂培养基上，长出圆形、凸起，光滑半透明的红色菌落。生化试验结果显示，对葡萄糖、乳糖、麦芽糖产酸产气，不分解尿素，无硫化氢产生，与大肠杆菌的生化特征[11]相符。接种小白鼠，小鼠全部死亡，由此证实从病死仔豪猪病料中分离到的2株细菌均是致病性大肠杆菌。另外由于试验设备欠缺，是否由病毒引起腹泻未能进行试验，但在仔豪猪腹泻病的诊断、治疗和防治过程中也不能忽视这些因素的影响。

经调查，该豪猪场在仔豪猪发生腹泻病时，曾使用了大量环丙沙星进行治疗，但效果不明显。通过药敏试验发现，该菌已经对环丙沙星、阿莫西林、吡哌酸、青霉素G、羧苄青霉素产生耐药性，而头孢曲松、头孢噻吩、链霉素、万古霉素、卡那霉素、复方新诺明、先锋霉素和庆大霉素是高敏药物，在治疗时应作为首选药。因此在应用抗生素药物进行治疗时应进行药敏试验，避免不必要的经济损失。

豪猪大肠杆菌病跟其他动物大肠杆菌病一样，也是一种条件性疾病，本病最主要的防治措施是搞好豪猪舍环境卫生，改善饲养管理条件，防止水源污染，搞好清洁卫生和消毒工作。由于豪猪野性明显，听觉、嗅觉敏感，视觉发达，在饲养管理上，尽量保持环境安静，由专人负责，减少对豪猪的应激刺激有利于防止大肠杆菌病的发生。

参考文献：

[1]张荣祖. 中国哺乳动物分布[M]. 北京：中国林业出版社，1997：172.

[2]王玉玺，张淑云. 中国兽类分布名录（四）[J]. 野生动物，1993，14（5）：10-11.

[3]王酉之，胡锦矗. 四川兽类原色图鉴[M]. 北京：中国林业出版社，1999：251.

[4]彭孟德，张晓梅. 特种药用动物养殖与加工技术[M]. 长沙：湖南科学技术出版社，1994：65-68.

[5]常祖光. 药用豪猪可大力养殖[J]. 农村实用科技信息，2005（9）：40.

[6]郑国英. 豪猪人工养殖技术[J]. 云南农业，2005（3）：12.

[7]武深秋. 豪猪的养殖技术[J]. 当代畜禽养殖业，2004（7）：44.

[8]崔盛平. 豪猪的驯养特性[J]. 经济动物学报，2001，5（3）：59-61.

[9]方定一，侯从远，杜念兴，等. 兽医微生物实验指导[M]. 北京：中国农业出版社，2001.

[10]盛彤笙. 兽医微生物学实验指导[M]. 南京：畜牧兽医图书出版社，1957.

[11]陆承平. 兽医微生物和免疫学[M]. 3版.北京：中国农业出版社，2001：215.李玉全. 盐度对脊尾白虾生长、摄食及饵料转化率的影响[J]. 江苏农业科学，2014，42（9）：191-193.endprint