干扰素α治疗JAK2V617F阳性的真性红细胞增多症的疗效观察

郭慧梅，薛华，王静，田明杰，赵雪莲

（河北大学附属医院血液内科，河北 保定 071000）

干扰素α治疗JAK2V617F阳性的真性红细胞增多症的疗效观察

郭慧梅，薛华，王静，田明杰，赵雪莲

（河北大学附属医院血液内科，河北 保定 071000）

目的分析干扰素α（IFN-α）治疗JAK2V617F阳性的真性红细胞增多症（PV）的疗效。方法采用IFN-α治疗21例JAK2V617F阳性的PV患者，以同期羟基脲（HU）治疗18例为对照，观察血细胞计数和脾脏变化，并应用荧光定量PCR方法检测JAK2V617F表达水平变化，比较两种治疗的血液学和分子学缓解率。结果IFN-α组血液学总缓解率（CHR+PHR）85.71%，显著高于HU组（55.56%）。IFN-α组总分子学缓解率（CMR+PMR）为71.43%，显著高于HU组（5.56%）。结论相比于HU，IFN-α可使PV患者获得更高的血液学缓解率，且可降低JAK2V617F负荷，达到分子学缓解。

真性红细胞增多症；JAK2V617F；干扰素α

本文引用：郭慧梅,薛华,王静,等.干扰素α治疗 JAK2V617F阳性的真性红细胞增多症的疗效观察[J].医学研究与教育,2015,32(3): 36-39.

真性红细胞增多症（PV）是一种BCR/ABL阴性的慢性骨髓增殖性肿瘤，是恶性克隆性疾病。近期，在绝大多数的PV患者中发现了高致病性的获得性JAK2V617F点突变。JAK2是一种组成性酪氨酸激酶，能激活JAK-STAT信号传导途径。干扰素α（IFN-α）已广泛应用于PV患者，观察IFN-α治疗后PV患者的血液学缓解率，并检测IFN-α治疗前后JAK2V617F突变负荷的变化，以观察IFN-α治疗的分子学疗效，指导临床治疗。

1 资料与方法

1.1 研究对象

选自2008年9月至2014年1月在河北大学附属医院血液科住院及门诊随访的PV患者39例，所有患者JAK2V617F阳性，诊断及疗效判定参照2001年WHO标准。IFN-α组21例，男性12例，女性9例，平均年龄50（42～78）岁。羟基脲（HU）组18例，男性10例，女性8例，平均年龄52（45～80）岁。

1.2 治疗方案

IFN-α组：确诊后给予IFN-α，起始剂量为100万单位，每日1次，3 d后改为300万单位，每周3次，如达到血液学缓解，可减量至1～2次/周，应用6个月以上。HU组：0.25～2.00 g/d，根据血细胞计数水平调节用量。

1.3 疗效评价

参考WHO 2001年标准。完全血液学缓解（CHR）定义为：脾大消失；血细胞计数正常，白细胞＜10.00×109/L、血小板＜400.00×109/L，红细胞压积＜45%（男）、42%（女）（持续3 个月以上）。部分血液学缓解（PHR）定义为：血细胞计数较初诊时下降50%，可伴有脾大。治疗无效判断标准：达不到部分缓解者。完全分子学缓解（CMR）定义为 JAK2V617F基因突变经PCR测不到。部分分子学缓解（PMR）定义为JAK2V617F突变负荷较前减少≥50%。微小分子学反应（MMR）定义为JAK2V617F突变负荷减少20%～49%。

1.4 分子学检测

采用实时荧光定量PCR测定JAK2V617F突变。

（1）留取PV患者的骨髓液，提取单个核细胞。

（2）提取细胞总RNA，逆转录合成cDNA。

（3）引物和探针：由上海生工生物工程公司合成，标准品为包含突变核苷酸在内的447 bp的质粒。JAK2的引物和探针序列如下：下游突变引物5’-CCAGAATATTCTCGTCTCCACTGAA-3’,下游未突变引物5’-TGAACCAGAATA TTCTCGT CTCCAC-3’,上游公共引物5’-CAGCAAGTATGATGAGCAAGCTTT-3’,MGB探针5’-FAM-TCACAAGCATTTGGTTTT-MGB-3’。

（4）PCR反应体系：体系共25 µl。PCR反应条件为94 ℃ 预变性5 min，94 ℃变性45 s，60 ℃退火1 min，共40个循环。设标准品和空白对照。PCR反应前3～15个循环的荧光信号是荧光本底信号，调节基线，各荧光曲线与基线交叉点的循环数是Ct值。根据标准品计算JAK2和JAK2V617F的绝对拷贝数量，计算JAK2/JAK2V617F比值。

1.5 统计学分析

应用SPSS11.5统计软件处理资料，采用卡方检验。检验水准取α=0.05。

2 结果

2.1 血液学反应

IFN-α组血液学总缓解率（CHR+PHR）85.71%， CHR 61.90%，PHR 23.81%，达CHR时间（4.20±1.40）个月。HU组血液学总缓解率（CHR+PHR）55.56%， CHR 22.22%，PHR 33.33%，达CHR时间（6.80±1.60）个月。IFN-α组显著高于HU组，P=0.037。见表1。

表1 IFN-α组与HU组患者血液学缓解率的比较

2.2 分子学反应

IFN-α组分子学总缓解率（CMR+PMR）71.43%，CMR 28.57%，PMR 42.86%，达CMR时间（21.20±5.40）个月。HU组只有1例达到PMR，分子学缓解率为5.56%。IFN-α组显著高于HU组，P＜0.001。见表2。

表2 IFN-α组与HU组患者分子学缓解率的比较

3 讨论

随着BCR/ABL阴性的骨髓增殖性肿瘤发病机制的研究发现，JAK2V617F已经成为其诊断标记、治疗靶点。绝大多数的PV患者存在JAK2V617F[1]。对于真性红细胞增多症的治疗，传统治疗方法包括HU的应用可降低血细胞，但长期应用有转化为白血病的风险，也不能在分子水平上使患者获益。JAK激酶抑制剂正在进行临床实验，尚未进入临床。早在20余年前就证实了IFN-α可有效治疗PV患者[2]，且其无致白血病作用，目前，IFN-α仍为治疗PV的一线药物。

研究对比了HU和IFN-α治疗PV的血液学及分子学缓解率，发现与HU相比，IFN-α有更高的血液学缓解率，且有较高的分子学缓解率。目前更多的临床试验也证实了除了可以达到血液学缓解，IFN-α可以使PV患者达到分子学完全缓解[3-4]。而且，有报道显示IFN-α停药后仍可有长时间的分子学缓解，认为携带JAK2V617F突变的造血干细胞被IFN-α根除[5]。而且近期动物实验也显示JAK2V617F突变的造血干细胞对IFN-α治疗更敏感[6]。

总之，IFN-α可选择作用于PV恶性克隆，降低JAK2V617F突变负荷，使PV患者发生血液学缓解的同时可达分子学缓解，是目前PV患者治疗的优先选择。

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[2]SILVER R T.Recombinant interferon-alpha for treatment of polycythaemia vera[J].Lancet,1988,2(8607): 403.

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[4]QUINTAS-CARDAMA A,KANTARJIAN H,MANSHOURI T,et al.Pegylated interferon alfa-2a yields high rates of hematologic and molecular response in patients with advanced essential thrombocythemia and polycythemia vera[J].J Clin Oncol,2009,27(32): 5418-5424.

[5]LARSEN T S,MOLLER MB,D E STRICKER K,et al.Minimal residual disease and normalization of the bone marrow after long-term treatment with alpha-interferon2b in polycythemia vera.A report on molecular response patterns in seven patients in sustained complete hematological remission[J].Hematology,2009,14(6): 331-334.

[6]MULLALLY A,BRUEDIGAM C,POVEROMO L,et al.Depletion of Jak2V617F myeloproliferative neoplasm-propagating stem cells by interferon-alpha in a murine model of polycythemia vera[J].Blood,2013,121(18): 3692-3702.

(责任编辑：高艳华)

The effcacy evaluation of interferon alpha on JAK2V617F positive polycythemia vera

GUO Huimei,XUE Hua,WANG Jing,TIAN Mingjie,ZHAO Xuelian
(Department of Hematology,Affliated Hospital of Hebei University,Baoding 071000,China)

ObjectiveTo observe the clinical effcacy of interferon alpha(IFN-α) in the treatment of polycythemia vera(PV) patients with JAK2V617F mutation.Methods21 patients of PV with JAK2V617F mutation were treated with IFN-α,and 18 patients were treated with hydroxyurea(HU) as a control.The changes of blood cell counts and spleen sizes were observed.The expression levels of JAK2V617F were detected by real-time fluorescent quantitative PCR.The hematologic remission rate and molecular remission rate were compared between two groups.ResultsThe overall hematologic remission rate(complete and partial remission) of IFN-α group was 85.71%,which was significantly higher than that of HU group(55.56%).The overall molecular remission rate(complete and partial remission) of IFN-α group was 71.43%,and HU group was 5.56%,the difference was statistically signifcant.ConclusionCompared with HU,IFN-α not only can make PV patients get a higher hematologic remisson rate,but also can reduce the load of JAK2V617F to reach molecular remisson.

polycythemia vera; JAK2V617F; interferon alpha

10.3969/j.issn.1674-490X.2015.03.008

R55

A

1674-490X(2015)03-0036-04

2015-03-25

郭慧梅（1979—），女，河北邯郸人，主治医师，在读博士，主要从事恶性血液病的研究。E-mail: guohuimei2006@163.com

田明杰（1980—），女，河北保定人，主管护师，主要从事恶性血液病患者的护理。

E-mail: tianmingjie@foxmail.com