胃癌组织环指蛋白43表达变化及意义

于艺，赵滢，刘严峰(大连医科大学附属第一医院，辽宁大连60;中国医科大学附属盛京医院)

胃癌组织环指蛋白43表达变化及意义

于艺1，赵滢2，刘严峰1
(1大连医科大学附属第一医院，辽宁大连116011;2中国医科大学附属盛京医院)

摘要:目的探讨环指蛋白43(RNF43)在胃癌发生、发展中的作用机制。方法取180例胃癌患者手术切除肿瘤组织及其癌旁组织标本。采用免疫组织化学方法检测RNF43表达，分析RNF43表达水平与胃癌临床病理特征及患者预后的关系。结果胃癌组织RNF43高表达率为46.1%(83/180)，癌旁组织为28.6%(51/180)，两者比较P＜0.05。发生远处转移、淋巴结转移及TNM分期高(Ⅲ+Ⅳ)的胃癌患者RNF43高表达率高(P均＜0.01)。RNF43蛋白高表达及低表达者总生存期分别为44.7个月(95%CI:39.5～49.9个月)、61.1个月(95%CI:55.6～66.6个月)，两者比较P＜0.01。结论胃癌组织RNF43高表达可能是胃癌侵袭、转移及不良预后的原因之一。

关键词:胃肿瘤;环指蛋白43;侵袭;转移;生存分析

Expression changes and significance of RNF43 in gastric cancer tissues

YU Yi，ZHAO Ying，LIU Yan-feng
(The First Affiliated Hospital ofdalianmedical University，Dalian 116011，China)

Abstract:Objective To investigate the effect of ring finger proteins 43(RNF43)in the occurrence anddevelopment of gastric cancer tissues.Methods The expression of RNF43 wasdetected in 180 gastric cancer tissues and corresponding adjacent tissues by immunohistochemistry.The correlations of RNF43 expression with the clinicopathological features and prognosis of patients were analyzed.Results The high expression rate of RNF43 in the gastric cancer tissues was 46.1%(83/180)，and 28.6%(51/180)in the adjacent tissues(P = 0.020).The high expression rate of RNF43 in gastric cancer patients withdistantmetastases，lymph nodemetastasis and TNM stage(Ⅲ+Ⅳ)was higher(all P＜0.01).The overall survival(OS)of RNF43 high protein expression and low expression were respectively 44.7months(95% CI: 39.5-49.9months)and 61.1months(95% CI: 55.6-66.6months)，and significantdifference was found(P =0.004).ConclusionThe high expression of RNF43 in gastric cancer tissuesmay be one of the reasons of invasion，metastasis and poor prognosis in gastric cancer.

Key words:stomach neoplasms; ring finger proteins 43; invasion;metastasis; survival analysis

环指蛋白(RNF)家族在生物体内通过泛素-蛋白酶作用降解特定的蛋白，参与细胞周期、凋亡、信号传导以及DNA修复等生物过程。环指蛋白43(RNF43)是RNF家族新成员，其在直肠癌组织中高表达，促进直肠癌细胞增殖，抑制细胞凋亡［1～5］。近年来研究证实，RNF43是结直肠癌中最常见的突变基因之一，促进肿瘤的发生、发展［6］。但其与胃癌发生发展的关系鲜见报道。为此我们于2009年6月～2013年11月进行了如下研究。

1　资料与方法

1.1临床资料选取2009～2013年大连医科大学附属第一医院诊治的胃癌患者180例，男101例、女79例，年龄29～72岁。180例患者均行手术治疗，经组织病理学检查确诊。收集到有可用资料记录的病例分别为:肿瘤大小144例、浸润深度178例、腹水175例、远处转移117例、淋巴结转移172例、TNM分期125例、总生存期(OS)117例。随访3～78个月，OS平均54.5个月。

1.2胃癌及其癌旁组织RNF43表达检测取患者手术切除的肿瘤组织及其相应的癌旁组织标本，－80℃冰箱保存，采用免疫组织化学染色法检测RNF43表达。具体步骤:取出冻存的组织样本，室

温解冻，4%多聚甲醛固定，常规制作石蜡包埋组织块，4 μm连续切片，固定于多聚赖氨酸化防脱载玻片上，依次进行脱蜡、脱苯、水化，在pH 6.0柠檬酸盐缓冲液中进行高压修复(80 kPa)。修复后切片经过氧化氢、正常山羊血清处理后，滴加多克隆兔抗人RNF43抗体(ab129401，Abcam，UK，1∶200稀释)于4℃孵育过夜;次日，切片依次滴加生物素标化二抗、亲和去-辣根过氧化酶复合物后，进行DAB染色;经苏木素复染后观察。同步以PBS液代替RNF43抗体作为阴性对照。由两位临床病理医生分别对染色结果进行盲法判读。染色结果评价采用积分法，即染色强度与细胞着色百分率相乘得最终总积分。每张切片计数200个细胞，RNF43表达于细胞核。染色强度为无染色0分、弱强度1分、中等强度2分、高强度3分。总积分≤155%定义为低表达，＞155%定义为高表达。

1.3统计学方法采用SPSS11.5统计软件。RNF43表达水平及其与胃癌临床病理参数关系的分析采用Pearson χ2检验或Fisher确切概率法。P ＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1胃癌及其癌旁组织RNF43表达胃癌组织RNF43高表达率为46.1%(83/180)，癌旁组织为28.6%(51/180)，两者比较P＜0.05。

2.2 RNF43表达与胃癌临床病理特征的关系发生远处转移、淋巴结转移及TNM分期高(Ⅲ+Ⅳ)的胃癌患者RNF43高表达率高(P均＜0.01)。见表1。

2.3RNF43表达对胃癌患者生存期的影响RNF43蛋白高表达者(62例)OS为44.7个月(95% CI: 39.5～49.9个月)，低表达者(55例)OS为61.1个月(95% CI: 55.6～66.6个月)，两者比较P＜0.01。

3　讨论

研究证实，RNF43参与了细胞周期、凋亡等生物学行为，对结直肠癌的发病、侵袭转移有显著影响。RNF43对不同肿瘤可能通过不同机制发挥不同作用。RNF43可通过与NEDL1基因结合，进而抑制其下游蛋白p53功能，从而引发促癌作用［5］; RNF43可作为负反馈调控因子抑制Wnt/β-catenin信号通路活性，从而抑制该通路促增殖作用，亦起到抑癌作用［7～9］; RNF43可与PSF/p54nrb与HAP95等结合形成复合体发挥其生物学作用［10］。本研究结果显示，胃癌组织中RNF43表达水平显著高于癌旁正常组织，且发生远处转移、淋巴结转移及TNM分期高者RNF43高表达率更高。由此可见，RNF43可能参与了胃癌的发病、侵袭及转移。

表1　RNF43高表达与胃癌临床病理特征的关系［例(%)］

本研究中RNF43蛋白高表达的胃癌患者OS较低表达患者显著缩短，说明RNF43高表达预示胃癌患者预后不良，在大肠癌的研究中也得到类似结果［11］;但是，Xi等［12］对神经胶质瘤的研究却得到相反的结果，RNF43低表达与神经胶质瘤患者不良预后相关。这也验证了RNF43对不同肿瘤可能通过不同机制发挥不同作用。

近年的研究认为，RNF43有望作为恶性肿瘤的标志物之一，可为肿瘤的治疗提供新的靶点［4～7］。鉴于本研究的发现，可以预见，进一步深入研究RNF43蛋白在胃癌发生、发展过程中的作用及机制将能够为胃癌的治疗提供新的思路。

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收稿日期:( 2015-07-02)

通信作者:刘严峰，E-mail:dlliuyf@126.com

基金项目:辽宁省科学计划项目(2013225021)。

文章编号:1002-266X(2015)36-0032-03

文献标志码:B

中图分类号:R735.2

doi:10.3969/j.issn.1002-266X.2015.36.011