Access化学发光仪测定尿液睾酮的可行性分析

桂勇 ，廖朝青 ，夏琴

(新余市中医院，1、检验科；2、乳腺病科，江西 新余,338025；3、分宜县农医局，江西 分宜，336600)

化学发光免疫分析仪在临床应用广泛,可对血清肿瘤标志物、微量蛋白、性激素、甲状腺激素等多个项目进行测定，具有结果快速、准确、灵敏度高、特异性好、对环境无污染可代替放射免疫(RIA)等优点[1-7]。近年来国内曾有学者尝试用放射免疫、高效液相色谱(HPLC)、时间分辨荧光免疫(TRFIA)等多种方法测定尿液中的睾酮含量,并作了探讨和报道[8-10]。本实验对应用Access化学发光仪测定尿液睾酮作实验评价,供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1 .1混合尿液 由多份健康未成年男性的尿液混合而成,酸碱度(pH)7.8,睾酮浓度0.50nmol/L。

1.1 .2混合血清 由多份健康未成年男性的血清混合而成,睾酮浓度1.50nmol/L。

1.1 .3 高浓度睾酮尿液 取临床睾酮浓度为380.50nmol/L的尿液标本，代替睾酮冻干标准品，以制备不同睾酮浓度的尿液标本。

1.1 .4 睾酮冻干标准品 睾酮浓度分别为1.74、5.20、13.88、27.76、55.52nmol/L， 由 Beckman-Coulter公司提供，用于制备睾酮标准液。

1.1 .5尿隐血阳性、尿糖阳性、尿蛋白阳性、高白细胞尿液样品 血尿(Hb5.0g/L)、尿糖(45.0mmol/L)、尿蛋白(8.5 g/L)、高白细胞(WBC>10个/HP)尿液。

1.2 检测方法 所有测定均使用Beckman-Coulter-Access2型全自动微粒子化学发光免疫分析仪，试剂由Beckman-Coulter公司提供。

1.3 统计学方法 采用相关分析和t检验，以P<0.05为两样本呈相关关系，相关系数r的绝对值愈接近于1，相关愈密切；愈接近于0，相关愈不密切。

2 结果

2.1 精密度 取高浓度睾酮尿液,用混合尿液稀释成低(稀释 1：100,预计 3.82nmol/L)、中(稀释 1：20,预计 18.60nmol/L)、高(稀释 1:10，预计 35.04nmol/L)三种浓度睾酮尿液标本各1管,低、高浓度标本各测20次,测得睾酮浓度分别为3.80±0.13nmol/L和34.50±0.86nmol/L,批内变异系数CV分别为3.50%和2.50%。取中浓度睾酮尿液标本,分装30支小试管后置-25℃低温贮存,每天取出1支测试,连测30天,睾酮浓度为18.45±0.86nmol/L,批间变异系数CV为4.65%。

2.2 准确度 (回收试验)在0.9m l睾酮浓度为0.50nmol/L的混合尿液中加入0.1ml睾酮标准液。测定标本中睾酮浓度，以回收浓度/加入浓度计算百分回收率，结果见表1。

表1 尿液睾酮回收试验

2.3 线性范围 取高浓度睾酮尿液,用混合尿液从1:4倍起稀释成76.50~0.50nmol/L不同浓度系列的尿液睾酮浓度，其线性范围0.80~54.78nmol/L，比血清标本的线性范围0.35~55.52nmol/L略小。

2.4 同一浓度睾酮在血清和尿液中测得值的比较取高浓度睾酮冻干标准品,用混合尿液稀释成系列浓度的40份尿液标本，测得的睾酮浓度值为Y，用混合血清稀释成相应浓度的系列标本40份，测得的睾酮浓度值为X。回归方程为Y=0.96X+0.32，相关系数r=0.9918,t=47.91,P<0.001。

2.5 尿隐血阳性、尿糖阳性、尿蛋白阳性、高白细胞尿液样品对睾酮测定的干扰观察 取高浓度睾酮冻干标准品,分别用血尿 (Hb5.0g/L)、尿糖(45.0mmol/L)、尿蛋白(8.5 g/L)、高白细胞(WBC>10个/HP)尿液样品离心后尿液从1：1倍起稀释成不同浓度系列的尿液睾酮溶液各10管，每管各测4次，取均值，测定值为Y，理论值为X，回归方程分别为 Y=0.95X+0.35，r=0.9725,t=11.80,P<0.001；Y=0.96X+0.30，r=0.9740,t=12.18,P<0.001；Y=0.97X+0.33，r=0.9856,t=16.43,P<0.001；Y=0.96X+0.42，r=0.9811,t=14.30,P<0.001。

3 讨论

在临床上睾酮测定一般都用血清或血浆标本,在临床工作中经常会发现多囊卵巢综合征患者,血清睾酮水平与临床症状并不完全吻合。这可能与血清睾酮测定方法及抽血时间点的选择有关,测定血清或血浆中的睾酮易受性激素结合蛋白(SHBG)和白蛋白等的影响,同时睾酮分泌呈脉冲式释放,尤以夜间显著,睾酮分泌常伴随于促黄体生成素(LH)脉冲释放约30min后,故血睾酮水平在夜间睡眠后升高,因此测定24h尿睾酮含量较常规性日间一次采血测睾酮更为合理而有意义[9]。

实验结果提示应用Access化学发光仪测定尿液睾酮与测定同水平的血清睾酮相关性良好，抗干扰能力强，精密度较好，但准确度稍差，线性范围较小，当尿液睾酮含量大于54.78nmol/L时需要对尿液标本进行稀释后再进行测定。其主要原因是尿液与血清基质存在差异所致。临床个体因生理、病理情况不同尿液差异很大，即使同一受试对象的尿液在不同的昼夜、时间段也会有一些差别。尿量、pH值等受采样时患者的饮食、服药情况影响较大。基质的差异既影响碱性磷酸酶催化发光剂的活性，又影响到免疫反应中抗原抗体的结合，使结果出现偏差，并且偏离的趋势和幅度并不一致[11]。

综上所述，应用Access化学发光仪测定尿液睾酮可行，但须与血清同时进行测定结果更有参考价值。

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