复方五味子制剂中总磷量质控方法的研究

胡 青，于 泓，孟 茜，季 申

(上海市食品药品检验所，上海 201203)

复方五味子制剂分为片剂和糖浆两种剂型，均由五味子、维生素B1、甘油磷酸铁和甘油磷酸钠、甘油磷酸钾(糖浆)或甘油磷酸钙(片剂)以及其他辅料等制成的中西复方制剂，用于改善神经衰弱所致头晕、头痛、乏力、心悸以及失眠等症状［1，2］，其中甘油磷酸等具有营养中枢神经，补充人体对磷的需求，调节人体正常生理机能的作用。两个品种现行标准均为国家药品监督管理局国家药品标准(试行)，标准中均仅进行五味子的鉴别检验，缺乏对制剂中总磷含量测定方法，总体上难以对制剂质量进行有效控制。

总磷量测定广泛应用于水体、饲料、烟草、药品等领域，测定前须先将样品消化，将不同形态的磷转化成磷酸根后检测。消化方法一般有酸消化法［3］、微波消解法［4］、高温炽灼［5］等。检测方法以紫外光谱法［5］最为常见，磷酸根与钼酸铵等显色剂作用后检测，专属性强，简单准确，易于推广，适用于药品常规总磷含量检测。此外基于近红外漫反射光谱和化学计量学的近红外光谱法［6］，可在不破坏样品的情况下分析总磷含量，但易受基质影响。离子色谱法［7］结果准确，灵敏度高，但对于复杂基质样品须固相萃取柱［3］等手段净化，检测成本高。Szyk等［8］使用毛细管等速电泳检测豆制品中总磷量，灵敏度更高，检测限低(约 0.17mg·kg－1)，结果更准确(RSD≤1%，回收率99%)。本试验参考《中国药典》2010 年版［9］和有关文献［10～12］，并结合中西复方药基质复杂特点，且须适用于不同剂型检测，选择建立高温炽灼后紫外分光光度法测定制剂中总磷量，以达到全面有效地对复方五味子制剂进行质量控制。

1 材料与仪器

岛津UV2550紫外分光光度计;磷酸二氢钾对照品(Merck公司，优级纯，批号:104873);其余试剂均为分析纯［中国医药(集团)上海化学试剂公司］;超纯水(Milli－Q纯化系统);复方五味子糖浆(A厂，批号:1005101、1005102、100319;B 厂，批号:20100314、20100401、20090201;C 厂，批号:110401、110201);复方五味子片(D 厂，批号:20111201、20111202、20111203)。

2 方法与结果

2.1 供试品溶液制备 对照品溶液:精密称取105℃干燥至恒重的磷酸二氢钾对照品0.143 g，置100mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取10mL，置500mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀(每1mL磷酸二氢钾溶液相当于20 μg的磷酸根)。

样品溶液:精密量取糖浆2mL或片剂研细后精密称取0.3 g，加水2mL，置预先加入氢氧化钙0.2g的坩埚中，搅拌后用小火蒸干灼烧至无烟，转移至马弗炉600℃炽灼3 h，至残渣呈灰白色，放冷，用稀盐酸10mL溶解并转移至250mL量瓶中，坩埚用水洗净，洗液并入量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。精密量取3mL，置50mL量瓶中，加磷显色剂［3 mol·L－1硫酸溶液－水－2.5%钼酸铵溶液－10%抗坏血酸溶液(1∶5∶1∶1)］10mL，摇匀，于70 ℃水浴中加热10min，放冷，用水稀释至刻度，摇匀即得。

2.2 线性关系考察 精密量取对照品溶液0、2、3、4、5、6、7mL，分别置50mL 量瓶中，按照样品溶液制备方法，自“2.1”项下“加入磷显色剂10mL”起依法操作。以加入0mL显色剂溶液作空白，在829 nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。进行回归分析，结果表明，以磷酸根计在 0.800 ～2.800 μg·mL－1范围内浓度与吸光度呈良好线性关系(r=1.0000)。

2.3 精密度试验

2.3.1 重复性试验 精密量取糖浆品(批号:110201)2mL一式6份;片剂样品(批号:110201)0.3 g各6份照样品溶液制备方法操作。以纯水作空白，测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液的磷酸根浓度，计算含量。糖浆样品测定结果RSD为1.18%，片剂样品测定结果为0.58%，平均RSD=0.88%。结果表明，本方法适用于两种剂型重复性较好，结果见表1。

表1 重复性试验(n=6)

2.3.2 中间精密度 由不同的分析人员在不同的日期、不同仪器设备对3批样品进行了含量测定，结果RSD在1.07% ～1.82%。结果表明，由不同的分析人员在不同的日期、不同仪器设备上测得的结果一致，方法的中间精密度良好。

2.4 稳定性试验 精密量取糖浆品(批号:110201)2mL、片剂样品(批号:20111201)0.3 g各2份照样品溶液制备方法操作。分别于0、3、6、12 h测定样品。结果表明，12 h内磷酸根与显色剂反应后稳定性良好。

2.5 加样回收试验 精密量取糖浆品(批号:110201，测得含量为0.365%)1mL或片剂(批号:20111201，测得含量为21.71mg·g－1)细粉0.15 g，各一式9份，分别置预先加入氢氧化钙0.2g的坩埚中。糖浆分别精密加入1mg·mL－1标准磷酸根溶液3、4、5mL，片剂分别精密加入600 μg·mL－1标准磷酸根溶液4、5、6mL，按照样品处理方法操作，测定吸光度，从标准曲线上读出的磷酸根浓度，计算加样回收率。结果表明，拟定方法准确度较高，结果见表 2、3。

2.6 样品测定 按照拟定的方法，对4个厂家生产的11批样品进行测定，结果见表4。

表2 加样回收试验－糖浆

表3 加样回收试验－片剂

表4 样品测定(n=2)

3 讨论

3.1 检测波长选择 分别取磷酸二氢钾对照品溶液，糖浆样品，片剂样品，以纯水作为空白对照，照样品溶液制备方法，自“2.5”项下“置预先加入氢氧化钙0.2g的坩埚中”起依法操作。含磷样品高温灼烧后，以酸溶解生成磷酸根，在酸性条件下与钼酸铵和抗坏血酸作用生成亮蓝色的络合物钼蓝［9］。在600～900 nm范围内扫描溶液吸光度。829 nm处有最大吸收，且空白溶液无干扰，即确定829 nm作为本方法检测波长。

3.2 炽灼时间考察 仅适用电热板灼烧样品，受热不均匀，表层以及坩埚壁上的样品无法消化完全，导致回收率偏低。因此需要在马弗炉中炽灼至灰化完全，对比1、2、3、4 h炽灼效果，炽灼 3 h可将样品中全部磷转化成5价，回收率达到95%以上。

3.3 磷显色剂量考察 本试验应保证磷显色剂加入量为过量，以保证磷显色完全，试验中根据磷酸根的浓度推算加入磷显色剂远远超过反应需要量。

复方五味子糖浆为中西复方制剂成分复杂，采用该法炽灼后测定总磷量，操作简单，稳定性重复性均较好，不易受基质干扰。同时，该方法还可作为其他药品品种总磷量测定方法参考。

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