健脾消食1号对脾虚大鼠胃排空及胃肠激素的影响

潘程程，李 岩

健脾消食1号对脾虚大鼠胃排空及胃肠激素的影响

潘程程，李 岩*

目的 建立功能性消化不良脾虚大鼠的模型，研究健脾消食1号对其胃排空及血清胃肠激素的影响，探讨该方可能的作用机制。方法 60只SD大鼠，随机分为4组：空白对照组、模型恢复组、莫沙必利组、健脾消食1号组。除空白对照组外，其余大鼠均采用劳倦过度加饮食失节法建立脾虚证大鼠模型，连续25 d，各组分别进行生理盐水、莫沙必利、健脾消食1号灌胃，连续1周，取材，测量胃排空率、胃肠激素。结果 与模型恢复组比较，健脾消食1号组胃排空增加，血清GAS增加，SS下降。结论 健脾消食1号可影响脾虚大鼠血清胃肠激素释放，促进胃排空，这可能是其临床作用的机制之一。

健脾消食1号；功能性消化不良；脾虚；胃肠激素；胃排空率

0 引言

功能性消化不良(Functional dyspepsia,FD)指上腹部疼痛和/或烧灼感、餐后饱胀不适和早饱感的症状源于胃十二指肠区域,但缺乏可能解释上述症状的器质性、系统性和代谢性疾病的一组临床综合征。不同国家的流行病学研究调查显示,FD发病率高，疗效不佳，已成为困扰人们生活和工作的疾病[1-3]。其发病机制复杂，与胃动力异常、内脏高敏感性、幽门螺杆菌感染、心理因素、胃肠激素、胃酸分泌过多、基因因素等多种因素相关，其中胃肠动力异常和胃肠激素在发病过程中起重要作用[4-5]。本文以FD脾虚大鼠为研究对象，观察健脾消食1号对其胃排空及血清胃泌素(GAS)、P物质(SP)、生长抑素(SS)的影响，从而探讨该方治疗FD脾虚证的可能作用机制。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 动物 健康SPF级雄性SD大鼠60只，体重(200±20)g，由中国医科大学附属盛京医院实验动物中心提供[许可证号：SCXK(辽)2003-0013]。

1.1.2 药物与制备 健脾消食1号，由太子参10 g、茯苓20 g、炒白术15 g、炙甘草10 g、砂仁10 g、炒鸡内金10 g、厚朴15 g、炒麦芽10 g、焦山楂10 g组成，购于辽宁中医药大学药局，按照中药常规煎法制成相当于生药1.1 g/mL的煎剂，4 ℃冰箱保存备用； 枸橼酸莫沙必利，5 mg/片，住友制药有限公司，批号:2814C，每日给药前用蒸馏水配制成0.15 g/L的溶液； 硫喷妥钠，上海新亚药业有限公司，批号：020102，使用前用灭菌注射用水配制成2.5%溶液。

1.1.3 实验试剂与仪器 羧甲基纤维素，宜兴市通达化学有限公司，批号:1107013； 营养性半固体糊的制备[6]：取5 g羧甲基纤维素溶于100 mL蒸馏水中，分别加入奶粉8 g、糖4 g、淀粉4 g,2 mL碳素墨水及蒸馏水，配成半固体糊150 mL，置冰箱中冷藏保存，使用前2 h取出，恢复常温。Rat GAS Elisa 试剂盒(R&D Systems Inc.,USA)；Rat SS Elisa 试剂盒(R&D Systems Inc.,USA)；Rat SP Elisa 试剂盒(R&D Systems Inc.,USA)；电子天平(0.01 g)：TE612-L，北京赛多利斯仪器系统有限公司；低速离心机：SC-3612，安徽中科中佳科学仪器有限公司； 吸收光酶标仪：ELx808，Biotek,USA。

1.2 方法

1.2.1 造模方法 采用饮食失节+力竭游泳方法造模：双日自由进食水，喂饲精炼猪油(1.5 mL/100 g)1次，单日禁食不禁水，喂饲甘蓝10～15 g/只，以达到饮食不节；并在单日将大鼠置于盛有温水[水温(22±1) ℃，水深50 cm]的塑胶桶中游泳至力竭(大鼠水中旋转、运动协调性明显下降，水淹没鼻尖，身体下沉，至再次浮出水面超过10 s，连续3次[7-8])1次，以达到劳倦过度，共25 d。大鼠出现活动减少、倦卧少动、扎堆、眯眼、拱背、反应迟钝、皮毛干枯欠光泽,捉拿时反抗无力,进食减少、渐见体型瘦弱、体重下降或增长缓慢，软便或便溏,造模成功[9]。

1.2.2 分组及处理 大鼠适应性喂养1周后，随机分为空白对照组、模型恢复组、莫沙必利组和健脾消食1号组,每组15只。除空白对照组正常饲养外,其余三组均造模，造模成功后给药，健脾消食1号、莫沙必利根据人和鼠给药剂量换算公式[10]进行计算，健脾消食1号组予健脾消食1号7.2 mL/(kg·d)，莫沙必利组予莫沙必利7.2 mL/(kg·d)，模型恢复组和空白对照组予生理盐水7.2 mL/(kg·d)，共1周。

1.2.3 观察指标及方法 胃肠激素测定:末次给药后禁食不禁水，24 h后予半固体糊2 mL灌胃，1 h后硫喷妥钠(40 mg/kg)腹腔内注射麻醉,迅速打开腹腔，于腹主动脉采血,静置,3 000 r/min离心15 min,取上清液,-20 ℃保存。参照试剂盒步骤用ELISA法检测血清中GAS、SP、SS的浓度。胃排空率测定: 采血后立即结扎贲门和幽门,剪取胃,称胃全质量,沿胃大弯剪开胃体,洗去胃内容物后,拭干后称胃净质量。按公式：胃排空率=1-[(胃全质量-胃净质量)/灌胃质量]×100%。

2 结果

2.1 各组大鼠胃排空率比较 与空白对照组比较，模型恢复组胃排空率降低(P<0.01)；莫沙必利组、健脾消食1号组虽略有降低，但差异无统计学意义(P>0.05)。与模型恢复组比较，莫沙必利组、健脾消食1号组胃排空率提高(P<0.01，P<0.05)。莫沙必利组与健脾消食1号组比较，差异无统计学意义(P>0.05)。

表1 各组大鼠胃排空率比较

注：与空白对照组比较，**P<0.01；与模型恢复组比较，#P<0.05，##P<0.01

2.2 各组大鼠血清胃肠激素比较 与空白对照组比较，模型恢复组的血清GAS、SP降低(P<0.05)，SS升高(P<0.01)。与模型恢复组比较，莫沙必利组的GAS、SP升高(P<0.01，P<0.05)，SS降低(P<0.05)；健脾消食1号组的GAS升高(P<0.05)，SS降低(P<0.05)。见表2。

表2 各组大鼠血清胃肠激素比较

注：与空白对照组比较，*P<0.05，**P<0.01；与模型恢复组比较，#P<0.05，##P<0.01

3 讨论

FD是临床常见的功能性胃肠疾病，包括餐后饱胀不适、早饱、上腹痛、上腹烧灼感，可分为餐后不适综合征(PDS)和上腹痛综合征(EPS)。一项全球性调查统计显示，以上腹痛为诊断标准的消化不良患病率为7%～34.2%，以上消化道症状为标准的消化不良患病率高达23%～45%[11]。因其病情反复、疗效欠佳，严重影响人们生活质量并增加患者的精神及经济负担。FD的发病机制亦成为学者们研究的热点，目前认为主要与胃动力异常、心理因素、胃酸分泌过多、内脏高敏感性、幽门螺杆菌感染、基因因素、成长环境、饮食、生活方式等因素有关，治疗上主要为促动力药、抑酸药、抗抑郁药等[12-13]。

现代中医认为，FD可归于嘈杂、胃脘痛、痞证等范畴[14]，其病位在胃，涉及肝、脾，目前研究多认为FD与脾胃关系最为密切，因劳倦伤脾、饮食伤胃等多因素使脾胃运化失职、脾胃气机升降失常所致，脾胃虚弱是发病基础，因而补益脾胃应贯穿本病整个治疗过程[15-18]。我们根据多年的临床经验以及既往的药理研究[19-23]、参照《太平惠民和剂局方》的经典方剂四君子汤加减组方，拟定健脾消食1号，本方以太子参、白术、茯苓健脾益气，焦山楂、炒麦芽、鸡内金健胃消食，砂仁、厚朴行气导滞，炙甘草调和诸药，共奏健脾渗湿、消食行气之功效，使脾气健运，恢复脾胃受纳与健运之职，进而改善脾虚症状。 胃肠激素是由胃肠内分泌细胞合成和释放的多种活性物质,对胃肠运动调节的机制比较复杂，主要通过内分泌、旁分泌、自分泌方式及神经递质作用调节胃肠运动，其分泌紊乱是功能性胃肠病的发病机制之一。GAS是调节胃肠动力的一种激素[24]，其既可以增强食管下括约肌的收缩活动[25]，减少胃食管反流，又可以促进胃蠕动[26]。有研究发现，内源性胃泌素的释放可升高餐后胃电频率，进而增强胃收缩性[27-28]。胃泌素对胃体、胃窦、幽门均有收缩作用，其中胃窦最强，胃体最弱[29-30]，这与近端胃保持紧张性收缩、远端胃的节律性收缩相吻合，进而促进胃排空[31]。SP作为神经递质调节因子发挥作用，其对胃肠纵行肌和环行肌有双重收缩效应[32-33]，有研究表明，SP能显著增加大鼠的内脏敏感性，促进排泄[34],进一步研究发现，SP主要是作用于小肠Cajal细胞(ICC)[35]，通过NK-1受体[36]影响小肠移行性复合运动(MMC)的发生频率和持续时间[37]，发挥对胃肠运动的调节作用，进而促进粪便排泄。SS是一种广泛分布于消化道系统的脑肠肽，对多种生理功能均具有抑制性作用。其既可以通过神经内分泌作用直接起效，还可通过抑制其他胃肠激素而间接性抑制胃肠[38]。大量研究证实，生长抑素可延缓胃排空，对全肠道推进活动有强大的抑制效应，进而降低排便次数[39-42]。Abdu等[43]通过鼠离体空肠研究发现，生长抑素可通过影响启动胃肠运动的肠道神经元电活动,减少小肠的移行性复合运动。

本研究结果显示，模型恢复组大鼠胃排空率减慢，血清GAS、SP含量明显下降，血清SS含量明显升高，与空白对照组相比，差异有统计学意义，这与文献报道一致[30-31，44]，而经1周治疗后,健脾消食1号组、莫沙必利组胃排空率显著增加，血清GAS、SP含量增加，SS含量下降，除血清SP外，均有统计学意义。综上所述，FD的发病与胃肠动力障碍和胃肠激素分泌紊乱有关，健脾消食1号可以调节脾虚大鼠血清GAS、SP、SS含量，这可能是其治疗FD的作用之一，为临床上应用健脾消食1号治疗FD提供了一定的理论和实验依据，但其具体是通过哪条调节通路而发挥作用有待于进一步实验探讨。

[1] Kumar A,Pate J,Sawant P. Epidemiology of functional dyspepsia[J].J Assoc Physicians India,2012,60: 9-12.

[2] Miwa H,Ghoshal UC,Fock KM,et al. Asian consensus report on functional dyspepsia[J].J Gastroenterol Hepatol,2012,27(4): 626-641.

[3] 吴柏瑶,张法灿,梁列新.功能性消化不良的流行病学[J].胃肠病学和肝病学杂志,2013,22(1): 85-90.

[4] Voisu TA,Guyrcab R,Voiosu AM,et al.Functional dyspepsia today[J].Maedica,2013,8(1): 68-74.

[5] Futagami S,Shimpuku M,Yin Y,et al.Pathophysiology of functional dyspepsia[J].J Nippon Med Sch,2011,78(5): 280-285.

[6] 迟鹏,李岩,陈苏宁,等.消食和胃冲剂对小鼠胃肠动力的影响[J].世界华人消化杂志,2010,18(23): 2464-2468.

[7] Tanaka M,Nakaraura F,Mizokawa S.Establishment and assessment of a rat model of fatigue[J].Neurosci Lett,2003,352: 159-162.

[8] 郭庆军,常耀明,李金声,等.大鼠游泳运动性疲劳模型力竭标准的研究[J].现代生物医学进展,2010,10(15):2855-2858.

[9] 邹世洁,周永生,樊雅莉,等.脾气虚证动物模型规范化的初步研究宏观症征部分[J].中国中西医结合消化杂志,2001,9(5): 264-267.

[10]陈奇.中药药理研究方法学[M].北京: 人民卫生出版社,2006: 31.

[11]Mahadeva S,Goh KL.Epidemiology of functional dyspepsia: a global perspective[J].World J Gastroenterol,2006,12(17): 2661-2666.

[12]邓琴,陈明锴.枳术宽中胶囊治疗功能性消化不良的疗效观察[J].中国医师杂志,2013,15(9):1278-1280.

[13]关庆才,王邦茂.氟哌噻吨美利曲辛片辅助治疗功能性消化不良的Meta分析[J].中国医药,2014,9(1):77-80.

[14]吴昕霞,姚树坤.常见功能性胃肠病的中医诊治[J].中国临床医生,2011,39(3): 26-28.

[15]许卫华,姚树坤,李妮娇,等.功能性消化不良中医辨证论治的临床疗效观察[J].中国中西医结合消化杂志,2013,(5): 225-228.

[16]孙莉.中西医结合治疗功能性消化不良[J].实用中医内科杂志，2013,27(2s)：54-55.

[17]张声生,杨静.中医药治疗功能性胃肠病大有可为[J].世界华人消化杂志,2007,15(33): 3457-3461.

[18]马忠金,王淑芳.茯苓神志爽心丸联合全面干预治疗功能性消化不良的疗效[J].实用医学杂志,2014,30(14):2318-2320.

[19]朱红欣,李岩.消痞 I 号对小鼠胃肠排空作用研究[J].辽宁医学杂志,2008,22(5): 237-238.

[20]肖琳,李岩.加减半夏厚朴汤治疗伴心理因素功能性消化不良随机对照研究[J].中国中西医结合杂志,2013,33(3): 298-302.

[21]王贺玲,白菡,王学清,等.厚朴对实验大鼠的胃动力影响[J].实用药物与临床,2007,10(2): 65-66.

[22]李岩.中药对胃肠动力影响的基础与临床研究[J].实用药物与临床,2009,11(6): 377-378.

[23]王贺玲,李岩,白菡,等.理气中药对鼠胃肠动力的影响 [J][J].世界华人消化杂志,2004,12(5): 1136-1138.

[24]Ozturk AS,Guzel M,Askar TK,et al.Evaluation of the hormones responsible for the gastrointestinal motility in cattle with displacement of the abomasum; ghrelin,motilin and gastrin[J].Veterinary Record,2013,172(24): 636.

[25]Konturek SJ,Konturek PC,Brzozowska I,et al.Localization and biological activities of melatonin[J].Journal of Physiology and Pharmacology,2007,58(3): 381-405.

[26]Zhang Q,Yu JC,Kang WM,et al.Effect of ω-3 fatty acid on gastrointestinal motility after abdominal operation in rats[J].Mediators of Inflammation,2011,152137.

[27]翟宏丽.功能性消化不良胃肠动力障碍与胃肠激素的关系[J].胃肠病学和肝病学杂志,2003,12(4):318.

[28]Takayasu H,Harasawa S,Miwa T.Effect of exogenous tetragastrin on gastric myoelectrical activity in humans[J].Tokai J Exp Clin Med,1999,24(3): 117-123.

[29]李志,徐州,段国勋,等.香砂六君颗粒与丸剂对脾虚胃肠动力及胃肠激素影响的对比观察[J].中国中西医结合消化杂志,2009,17(2): 118-119.

[30]张吉仲,李利民,黄利,等.半夏泻心汤及其拆方对脾虚大鼠胃泌素和生长抑素的影响[J].中药药理与临床,2013,29(1): 15-17.

[31]郁保生,石晓理,张国山,等.小柴胡汤对消化不良模型大鼠胃动素和胃泌素的影响[J].世界华人消化杂志,2013,21(5)：440-444.

[32]郭喜军.槟榔对大鼠胃运动及神经递质的影响[J].中国中西医结合消化杂志,2009,(5): 300-303.

[33]Li C,Micci MA,Murthy KS,et al.Substance P is essential for maintaining gut muscle contractility: a novel role for coneurotransmission revealed by botulinum toxin[J].Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol,2014,306(10): G839-G848.

[34]Okano S,Nagaya H,Ikeura Y,et al.Effects of TAK-637,a novel neurokinin-1 receptor antagonist,on colonic function in vivo[J].J Pharmacol Exp Ther,2001,298(2): 559-564.

[35]Kim BJ,Chang IY,Choi S,et al.Involvement of Na+-leak channel in substance P-induced depolarization of pacemaking activity in interstitial cells of Cajal[J].Cellular Physiology and Biochemistry,2012,29(3-4): 501-510.

[36]Jun JY,Choi S,Yeum CH,et al.Substance P induces inward current and regulates pacemaker currents through tachykinin NK1 receptor in cultured interstitial cells of Cajal of murine small intestine[J].Eur J Pharmacol,2004,495(1): 35-42.

[37]D′Antonio C,Wang B,McKay C,et al.Substance P activates a non-selective cation channel in murine pacemaker ICC [J].Neurogastroenterology & Motility,2009,21(9): 985-e79.

[38]Adriaensen D,Van Nassauw L,Timmermans JP.The role (s) of somatostatin,structurally related peptides and somatostatin receptors in the gastrointestinal tract: a review[J].Regulatory Peptides,2009,156(1): 1-8.

[39]Corleto VD,Severi C,Romano G,et al.Somatostatin receptor subtypes mediate contractility on human colonic smooth muscle cells[J].Neurogastroenterol Motil,2006,18(3): 217-225.

[40]Foxx-Orenstein A,Camilleri M,Stephens D,et al.Effect of a somatostatin analogue on gastric motor and sensory functions in healthy humans[J].Gut,2003,52(12): 1555-1561.

[41]De Man JG,Chatterjee S,De Winter BY,et al.Effect of somatostatin on gastrointestinal contractility in Schistosoma mansoni infected mice [J].In J Parasitol,2002,32(10): 1309-1320.

[42]Gregersen T, GrΦnbk H,Worsφe J,et al.Effects of Sandostatin LAR on gastrointestinal motility in patients with neuroendocrine tumors[J].Scand J Gastroentero,2011,46(7-8): 895-902.

[43]Abdu F,Hicks GA,Hennig G,et al.Somatostatin sst2 receptors inhibit peristalsis in the rat and mouse jejunum[J].Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol,2002,282(4): G624-G633.

[44]徐寅,郭璇,弭艳红,等.舒胃汤对功能性消化不良大鼠 P 物质与胃窦 Cajal 间质细胞的影响[J].中国实验方剂学杂志,2012,18(6): 206-209.

Effect of Jianpixiaoshi Ⅰ decoction on gastrointestinal hormones and gastric emptying rate of rat with spleen deficiency

PAN Cheng-cheng, LI Yan*

( Department of Gastroenterology, Shengjing Hospital of China Medical University,Shenyang 110004,China)

Objective To observe the effect of Jianpixiaoshi I decoction (JPXS-1)on serum levels of gastrin (GAS),substance P(SP),somatostatin(SS) and gastric emptying rate (GER) in ratswith spleen deficiency-functional dyspepsia (FD),and to analyze the mechanisms.Methods Sixty male SD rats were randomly divided into four groups: blank control group(BCG,n=15),model recovery group(MRG,n=15),mosapride group(MG,n=15),Jianpixiaoshi I group(JPXSG,n=15).Except the BCG,FD was induced in rats of another groups by swimming to exhaustion every other day and alternative feeding of cabbage and lard for 25 d.MG and JPXSG rats were then intragastrically administered with mosapride and JPXS-1 for 7d (once daily),BCG and MRG rats were given equal volume of physiological saline.All rats were fasted for 24h with free access to water when the treatment was discontinued.The GER was detected,the concentration of serum GAS,SP and SS were measured by ELSIA.Results The GER and level of GAS in JPXSG were higher than those of MRG (P<0.05),and the level of SS in JPXSG was lower than that of MRG (P<0.05).Conclusion JPXS-1 could influence the release of gastrointestinal hormones (included GAS and SS)and promote gastric emptying in FD rats,and it might be the mechanism for the treatment of FD.

Jianpixiaoshi I(JPXS-1);Functional dyspepsia(FD);Spleen deficiency; Gastrointestinal hormones;Gastric emptying rate (GER)

2014-12-23

中国医科大学附属盛京医院消化内科，沈阳 110004

辽宁省科学技术厅药物源头科研基金

10.14053/j.cnki.ppcr.201506003

*通信作者