不同产地乌药质量研究

朱发伟孙乙铭王彬辉王海英沈晓霞王志安俞旭平

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不同产地乌药质量研究

朱发伟1孙乙铭2王彬辉1王海英1沈晓霞2王志安2俞旭平2

乌药；有效成分；产地；含量

乌药为樟科植物乌药Lindera aggregate（Sims）Kosterm.的干燥块根，具有行气止痛，温肾散寒。用于寒凝气滞，胸腹胀痛，气逆喘急，膀胱虚冷，遗尿，尿频，疝气疼痛，经寒腹痛[1]。乌药在国内许多地区均有分布，其中以浙江天台所产的品质最佳，故称为台乌药，被认为是乌药的道地产区。药理研究表明，乌药具有广泛的药理活性，其主要有效成分为异喹啉类生物碱及呋喃倍半萜。本实验采用高效液相测定不同产区乌药醚内酯、异乌药内酯及去甲异波尔定的含量，以探讨不同产地乌药药效成分的差异，以评价不同产地乌药质量，并为浙产乌药的开发利用提供科学依据，也为乌药的质量评价奠定基础。

1 仪器与试剂

1.1 仪 器[2]安捷伦Agilent1100高效液相色谱仪及Agilent化学工作站，DAD检测器；伊利特公司Hypersil ODS2 Cl8分析柱（4.6mm×250mm×5μm）；去离子水。

1.2 试 药[3]乌药醚内酯、异乌药内酯、去甲异波尔定标准品（批号分别为：12061303、12061302、12021704，四川成都曼思特生物科技有限公司）；乌药药材采集于浙江、江西、湖南等地，经浙江省中药研究所药材室鉴定为樟科植物乌药 Lindera aggregate（Sims）Kosterm.的干燥块根；乙腈、甲醇均为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为纯净水。

2 方法

2.1 乌药醚内酯与异乌药醚内酯含量测定

2.1.1 色谱条件 色谱柱：伊利特公司Hypersil ODS2 C18分析柱（4.6mm×250mm，5μm）；流动相：乙腈（A）-水（B）；流速：1.0mL/min；检测波长：235nm；柱温：25℃；进样量：10μL。采用梯度洗脱，分时流动相比例A为0～5min：35%（A）；25～30min:55～75%（A）；30～45min：75～100%（A）。理论板数按乌药醚内酯和异乌药醚内酯计算不低于3000。乌药醚内酯对照品、异乌药醚内酯对照品和乌药样品色谱图见图1。

2.1.2 对照品溶液的制备 分别精密称定乌药醚内酯和异乌药醚内酯标准样品适量，用甲醇溶解并稀释，配成每1mL含0.11mg的乌药醚内酯和异乌药醚内酯的标准品溶液。

2.1.3 供试品溶液的制备 取本品粉末（过三号筛）约1.5g，精密称定，置索氏回流提取器中，加入乙醚溶液70mL，加热回流4h，提取液挥干，残渣用甲醇分次溶解，转移至10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2 方法学考察

2.2.1 线性关系的考察 精密吸取该对照品溶液2、4、6、8、10、12μL，按上述色谱条件测定峰面积，分别以峰面积为纵座标（Y），对照品进样量为横座标（X）。绘制标准曲线，并计算回归方程，乌药醚内酯的回归方程为：Y=122.87X+7.33，r=0.9999，线性范围：0.11～1.32μg。异乌药醚内酯回归方程为Y=84.969X+ 4.22，r=1.0，线性范围：0.11～1.32g。

图1 HPLC图谱（a乌药醚内酯对照品色谱图；b异乌药醚内酯对照品色谱图；c乌药样品的HPLC色谱图，1峰为乌药醚内酯，2峰为异乌药醚内酯）

2.2.2 精密度试验 精密吸取含乌药醚内酯和异乌药醚内酯的标准品溶液，重复进样5次，每次10μL，考察测定的精密度，乌药醚内酯面积相对标准偏差为0.97%，乌药醚内酯面积相对标准偏差为0.59%。2.2.3 稳定性试验 取同一标准品溶液，室温下放置，分别在0、4、8、12、24h进样10μL测定，乌药醚内酯峰面积RSD为0.58%，异乌药醚内酯峰面积相对标准偏差为0.73%，表明标准品溶液在室温下比较稳定。

2.2.4 重复性试验 取同一乌药样品6份，依“2.1.1.1 色谱条件”条件测定乌药醚内酯和异乌药醚内酯含量，样品乌药醚内酯含量，相对标准偏差RSD为2.95%；异乌药醚内酯含量相对标准偏差RSD为3.35%，表明该方法的重复性较好。

2.2.5 加样回收率试验 取已知含量的乌药样品，分别添加乌药醚内酯和异乌药醚内酯对照品后，同上述条件，进行测定，见表1～2。

表1 乌药醚内酯加样回收率

表2 异乌药醚内酯加样回收率

2.3 去甲异波尔定的含量测定 取乌药粉末0.5g，精密称定，按照2010年版《中国药典》一部[1]乌药含量测定项下进行含量测定。去甲异波尔定对照品、乌药样品色谱图见图2。

3 结果

图2 HPLC图谱（a.去甲异波尔定对照品色谱图；b.乌药样品的HPLC色谱图，3峰为去甲异波尔定）

天台乌药中乌药醚内酯、异乌药醚内脂、去甲异波尔定3种成分含量均较高，质量最好，作为乌药的道地产区具有一定的科学性。见表3，图3。

表3 不同产地乌药样品检测结果（mg/g）

图3 不同产地乌药三种有效成分含量比较图

4 结 语

不同产地乌药的乌药醚内酯、异乌药醚内脂、去甲异波尔定含量差异较大，说明市场上乌药药材内在质量参差不齐，因此应尽快制定或完善乌药饮片的质量控制标准，同时还需对不同产地的栽培条件进行考察，建立乌药的GAP基地，从源头上保证乌药的质量。

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典［S］.一部.北京：中国医药科技出版社，2010：71-72.

［2］徐建中，俞旭平，孙乙铭，等.元胡饮片初加工实验研究［J］.中药材，2011，34（7）：1040-1043.

［3］康立，徐建中，俞旭平，等.鲜白术一体化加工与炮制工艺研究初探［J］.浙江中西医结合杂志，2014，24（4）：361-363.

（收稿：2015-06-29 修回：2015-07-23）

1台州学院医学院附属市立医院中药房（台州318000）；2浙江省中药研究所有限公司（杭州 310000）

朱发伟，Tel：13626666266；E-mail：zhufawei88@126.com