乳腺癌手术前后血液中Rab5a基因表达与其预后复发的相关性

张 锋 宋张骏 陆建荣 汪存涛 陈 楠 韩丕华

·基础研究·

乳腺癌手术前后血液中Rab5a基因表达与其预后复发的相关性

张 锋 宋张骏 陆建荣 汪存涛 陈 楠 韩丕华

目的探讨乳腺癌手术前后血液中Rab5a基因的表达与预后复发的相关性。方法选择乳腺癌患者100例，予乳腺单纯切除术或乳腺癌改良根治术，检测手术前后血液中Rab5a基因的表达情况，随访调查术后复发情况。结果100例患者术前Rab5a基因表达阳性67例，阳性率为67.0%。Rab5a基因阳性表达与术前乳腺癌患者的T分期、组织学分级、淋巴结转移情况有明显相关性(P<0.05)。在术后6个月进行随访，复发16例，复发率为16.0%。Spearman等级相关分析显示Rab5a基因表达与预后复发存在明显的正向相关性(γ=0.459,P<0.05)。多元回归logistic分析显示肿瘤T分期、组织学分级、淋巴结转移与Rab5a基因表达是影响乳腺癌患者预后复发的主要独立危险因素(P<0.05)。结论Rab5a基因在乳腺癌中呈现高表达状况，与T分期、组织学分级、淋巴结转移有明显相关性，能影响术后患者的复发。

乳腺癌；复发；Rab5a基因；相关性

(ThePracticalJournalofCancer,2015,30:1581～1583)

乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤，北方的发病率多于南方，近年来国内乳腺癌的发病率呈逐年上升且发病年龄更趋年轻化的趋势[1]。目前认为乳腺癌的病因包括遗传、 吸烟、饮酒、空气污染等因素有关，随着医学诊断技术的提高，乳腺癌多在早期就可以被检出，但是死亡率一直没有明显降低[2-3]。研究显示，早期乳腺癌治疗后的五年生存率为75%左右，主要死亡原因是术后复发，从而影响患者生命健康和生活质量[4-5]。任何肿瘤的发生与发展涉及多中心、多环节、多通路，目前乳腺癌侵袭和转移的分子机制研究逐渐受到重视[6]。Rab5a蛋白是囊泡运输的早期效应蛋白，参与胞内物质运输、蛋白分选,与信号转导、受体下调、病原体吞噬、细胞迁移及肿瘤侵袭性等密切相关[7-8]。本文旨在探讨乳腺癌手术前后血液中Rab5a基因的表达与预后复发的相关性，为乳腺癌的生物治疗策略提供理论依据。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 研究对象

2013年7月到2014年7月在我院接受治疗的乳腺癌患者100例，纳入标准：术前经活组织病理学检查确诊为乳腺癌；年龄<70岁；预计生存期大于6个月；具有手术指征，行乳腺单纯切除术或乳腺癌改良根治术；患者及家属知情同意。排除标准：合并严重内外科疾病或多器官功能衰竭、重度营养不良；既往恶性肿瘤病史者；标本损坏患者。年龄23～69岁，平均年龄(51.33±6.33)岁；病理类型：浸润性导管癌73例，导管内癌12例，髓样癌5例，浸润性小叶癌10例。T分期：T1 期34例，T2 期56例，T3 期10例；组织学分级：Ⅰ级(高分化)20例，Ⅱ级(中分化)60例，Ⅲ级(低分化)20例；淋巴结转移情况：转移40例，未转移60例。

1.2 标本取材

根据患者分期予乳腺单纯切除术或乳腺癌改良根治术，据诊疗规范相应的病例选择术后化疗及放疗。选择瘤体组织与瘤旁组织进行取材，新鲜标本立即用10%甲醛固定，石蜡包埋得到标准。

1.3 血液中Rab5a基因的表达

所有患者在手术前后采集空腹静脉血5～10 ml，4 ℃下3 000 rpm/min离心10 min，取上层血清。采用RT-PCR方法检测Rab5a基因的表达情况，每次检测均设阴性和阳性对照，阳性对照：用已知Rab5a基因的表达PCR实验作对照及做预试验。阴性对照：用不表达Rab5a基因的样本进行实验。严格按照RT-PCR试剂盒要求步骤进行操作。

1.4 统计方法

应用SPSS 14.00软件进行数据分析，采用χ2检验分析Rab5a表达水平与乳腺癌患者相关指标的关系，相关等级资料对比采用轶和检验，P<0.05代表差异显著。单因素分析及多因素分析均采用Spearman等级相关分析与logistic回归分析。

2 结果

2.1 Rab5a基因表达情况

经过RT-PCR分析，100例患者术前Rab5a基因表达阳性67例，阳性率为67.0%。

2.2 Rab5a基因表达与临床病理特征的相关性

经过判定，Rab5a基因阳性表达与术前乳腺癌患者的T分期、组织学分级、淋巴结转移有明显相关性(P<0.05)，见表1。

表1 Rab5a基因阳性表达与乳腺癌病理特征的相关性/例

2.3 预后情况

所有患者都顺利完成手术，在术后6个月进行随访，复发转移16例，其中局部复发5例，远处转移11例，复发率为16.0%。同时在术后6个月对所有患者进行Rab5a基因表达检测，阳性12例，阳性率为12.0%，而复发患者中Rab5a基因表达阳性为11例，阳性率为68.9%。

2.4 Rab5a基因表达与预后复发的相关性

经过Spearman等级相关分析，Rab5a基因表达与预后复发存在明显正向相关性(γ=0.459,P<0.05)，见表2。

表2 Rab5a基因表达与乳腺癌预后复发的相关性/例

2.5 影响预后复发的多因素分析

在多元回归logistic分析中，把乳腺癌患者的临床资料、Rab5a基因表达情况作为自变量，把预后复发作为因变量，结果显示T分期、组织学分级、淋巴结转移与Rab5a基因表达是影响其预后复发的主要独立危险因素(P<0.05)。见表3。

3 讨论

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，发病率逐年提高[9]。具有局部浸润和远处转移的能力是恶性肿瘤最重要的特点并且是其致患者死亡的主要原因，肿瘤的局部浸润与转移在肿瘤转移的每一个环节上都有不同的作用因素，也涉及到不同基因的参与[10]。Rab5a是1种原癌基因，基因的突变或表达异常导致其编码蛋白数量或功能异常可引起细胞生长调控紊乱，最终导致细胞癌变。目前发现Rab5a蛋白表达于肺脏、脑、肌肉、骨髓、胸腺、脾脏、胰腺心脏、肝脏、前列腺和肾脏等组织中[11]。Rab5a蛋白的一级结构通过螺旋和片层相互折叠围绕而形成近似球形的空间结构，Rab5a蛋白的独特结构与其功能密切相关。

表3 影响预后复发的多因素分析

本研究中经过RT-PCR分析，100例乳腺癌患者术前Rab5a基因表达阳性67例，阳性率为67.0%，也表明Rab5a基因在乳腺癌中呈现高表达状况。而Rab5蛋白为RAB家族成员之一，作为细胞内囊泡运输的调控因子，结合GTP时表现出GTP酶的活性，调节早期囊泡的形成、运输，参与膜成分的运输及分选。Rab5a蛋白的功能异常可使生长因子持续作用于细胞，引起细胞增生，形成肿瘤[12]。Rab5a基因已经在多个其它肿瘤中证实为肿瘤转移相关基因，并且是与肿瘤的浸润转移呈正相关。相关研究表明Rab5a在具有高转移潜能的肺腺癌细胞系Anip973中高表达，并且在转移的非小细胞肺癌组织和转移灶中均有不同程度的表达，且转移程度越高表达越强[13]。本研究显示Rab5a基因阳性表达与术前乳腺癌患者的T分期、组织学分级、淋巴结转移情况有明显相关性(P<0.05)。也有研究显示Rab5a基因在宫颈良性病变组织中表达最低，随着宫颈病变恶性程度的增加和浸润转移的发生，其表达量呈上升趋势。

早期乳腺癌的治疗效果均比较好，但是在术后6个月内，有约10.0%的患者出现复发或转移。而细胞癌变的多基因协同理论认为至少有两个或两个以上功能不同的癌基因的激活才会引起细胞的癌变，乳腺癌的发生发展是一个多因素多步骤逐渐累积的过程。本研究所有患者都顺利完成手术，在术后6个月进行随访，复发16例，复发率为16.0%。Spearman等级相关分析，Rab5a基因表达与预后复发存在明显的正向相关性(γ=0.459,P<0.05)。有学者研究显示Rab5a基因在人大肠癌细胞的侵袭及转移特性的形成中具有重要的作用。在胃癌中也发现此基因的表达与胃癌的分化程度及转移程度有关[14]。Rab5a蛋白可参与膜成分的分选，调节早期囊泡的形成、运输，Rab5a蛋白的激活依赖于EGFR羧基端的酪氨酸残基，Rab5a蛋白可能是调控受体内化和某些信号转导的中间环节，从而对于术后复发有一定的影响[15-16]。本研究多元回归logistic分析显示T分期、分化程度、淋巴结转移与Rab5a基因表达是影响乳腺癌患者预后复发的主要独立危险因素(P<0.05)。也表明乳腺癌的复发与基因密切相关，癌基因的激活和抑癌基因的失活在乳腺癌的复发中起着重要的作用。

总之，Rab5a基因在乳腺癌中呈现高表达状况，T分期、分化程度、淋巴结转移情况有明显相关性，能影响术后患者的复发。

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(编辑：吴小红)

Relation between Prognosis and Recurrence and Blood Rab5a Gene Expression in Breast Cancer before and after Surgery

ZHANGFeng,SONGZhangjun,LUJianrong,etal.

Objective To investigate the relation between prognosis and recurrence and blood Rab5a gene expression in breast cancer before and after surgery.Methods 100 cases of breast cancer

simple mastectomy or modified radical mastectomy,the expression of Rab5a gene in the blood before and after operation were detected and postoperative relapse was followed up.Results Before surgery,Rab5a gene positive expression were 67 cases,and positive rate was 67.0%.The positive expression of Rab5a gene had obvious relation with T stage,histological grade,lymph node metastasis of breast cancer before operation.After 6 months of followed-up,16 cases had recurrence,the recurrence rate was 16.0%.Spearman rank correlation analysis showed that the Rab5a gene expression was positively correlated with prognosis and recurrence (γ=0.459,P<0.05).Multivariate logistic regression analysis showed that T stage,histological grade,Rab5a gene expression and lymph node metastasis in breast cancer were the major independent risk factors for prognosis and recurrence (P<0.05).Conclusion Rab5a gene has high expression levels in breast cancer,it is related with T stage,histological grade,and lymph node metastasis,and it can affect recurrence after surgery.

Breast cancer;Recurrence;Rab5a gene;Correlation

社会发展攻关计划(编号：2014k11-01-01-05)

710061 陕西省肿瘤医院

10.3969/j.issn.1001-5930.2015.11.001

R737.9

A

1001-5930(2015)11-1581-03

2015-03-29

2015-08-31)

ShanxiTumorHospital,Xi'an,710061