肿瘤患者HBV-DNA载量与乙型肝炎血清标志物实时荧光定量PCR检测结果分析

罗 皓，杨溪霖

（1.四川省肿瘤医院检验科，成都610041；2.成都市第一人民医院检验科，四川 610041）

肿瘤患者HBV-DNA载量与乙型肝炎血清标志物实时荧光定量PCR检测结果分析

罗 皓1，杨溪霖2

（1.四川省肿瘤医院检验科，成都610041；2.成都市第一人民医院检验科，四川 610041）

目的探讨肿瘤患者实时荧光定量PCR检测HBV-DNA载量与乙型肝炎（乙肝）血清标志物常见模式的关系。方法采集2014年5～12月四川省肿瘤医院收治的313例肿瘤患者血液标本，采用实时荧光定量PCR法检测HBV-DNA载量，时间分辨荧光免疫法检测乙肝血清标志物（HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb）。结果HBsAg（阳性）标本共227例，HBV-DNA阳性率为67.40%（153/227），HBeAg（阳性）标本共22例，HBV-DNA阳性率为90.91%（20/ 22）。小三阳组阳性率64.62%（126/195），20%的患者HBV-DNA载量大于105U/mL，具有较强的传染性。结论在检测乙肝血清标志物的同时进行HBV-DNA载量检测对慢性乙肝肿瘤患者和隐性感染的肿瘤患者在化疗过程中是否存在乙肝复燃具有重要的监测意义。

肿瘤；DNA，病毒/血液；肝炎病毒，乙型；肝炎抗体，乙型；肝炎抗原，乙型

目前，判断乙型肝炎（乙肝）感染情况大多仍采用检测乙肝血清标志物（即乙肝两对半），由于其组合模式多种多样，导致临床医生对部分发病患者的病毒感染复制状况难以判断，甚至会出现漏诊的情况[1]。而实时荧光定量PCR法直接检测HBV-DNA本身，反映了病毒当前的复制状态并对其进行相对的量化，对其传染性有更直接的了解，同时也更有利于临床医生对HBV感染的诊断、治疗方案的选择及疗效的判断。为进一步了解HBV-DNA定量检测与乙肝血清标志物结果之间的关系，本研究对2种检测结果进行比较分析，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 采集2014年5～12月在四川省肿瘤医院需进行乙肝血清标志物和HBV-DNA载量检测的313例肿瘤患者血液标本。其中男176例，女137例；年龄12～76岁，中位年龄51.4岁。

1.2 方法

1.2.1 仪器与试剂 乙肝血清标志物检测试剂由苏州新波生物技术有限公司提供，HBV-DNA载量检测试剂由厦门安普利生物工程有限公司提供。检测仪器为苏州新波生物技术有限公司Efficuta全自动样本前处理系统和Anytest时间分辨荧光免疫分析仪，美国ABI公司7500型实时荧光定量PCR仪。

1.2.2 检测方法 采用时间分辨荧光免疫法测定乙肝血清标志物血清浓度，大于试剂盒设定的参考范围判断为阳性；HBV-DNA载量大于500 U/mL判断为阳性。乙肝血清标志物模式中HBsAg（+）HBeAg（+）HBcAb（+）为大三阳，HBsAg（+）HBeAb（+）HBcAb（+）为小三阳。

1.3 统计学处理 应用SPSS20.0统计软件进行数据分析，计数资料以率表示，采用 Χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 313例血液标本中乙肝血清标志物不同模式与HBV-DNA载量比较 标本按乙肝血清标志物模式分为8个类型，分别统计HBV-DNA检测阳性率。HBsAg（+）标本（模式1～3）共227例，HBV-DNA阳性率为67.40%（153/227），HBsAg（-）标本（模式4～8）共86例，HBVDNA阳性率为2.33%（2/86），二者阳性率比较，差异有统计学意义（P＜0.01）。小三阳组阳性率64.62%（126/195）。HBeAg（+）标本（模式1）共22例，HBV-DNA阳性率为90.91%（20/22），HBeAg（-）标本（模式2～8）共291例，HBV-DNA阳性率为46.39%（135/291），二者阳性率比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。HBsAg和HBeAg转阴前后，阳性率有显著下降，但HBeAg转阴后阳性率仍高达46.39%（135/291）。见表1。

表1 313例血液标本中乙肝血清标志物不同模式与HBV-DNA载量比较

2.2 小三阳组（模式2）HBV-DNA载量阳性情况 将195例小三阳组标本按照病毒复制程度分为大于107U/mL、105～107U/mL、500～＜105U/mL、阴性四组，分别统计标本例数。4.10%的患者HBV-DNA载量大于107U/ mL；15.90%的患者HBV-DNA载量105～107U/mL，病毒复制程度较高；44.62%的患者HBV-DNA载量为500～＜105U/mL，传染性较弱。见表2。

表2 小三阳组（模式2）HBV-DNA载量阳性情况

3 讨 论

乙肝血清标志物检测结果是临床诊断HBV感染的传统手段，其检测的是人体感染HBV后的免疫反应状态，而由于抗原、抗体的变性、窗口期等因素，可能造成检测出的乙肝血清标志物模式不能真实反映当前病毒的感染情况[2]。实时荧光定量PCR则可以准确地检测出当前HBV-DNA的复制水平，能够帮助诊断隐匿性HBV感染和血清检测非典型的慢性HBV感染[3]，并对其病程变化和治疗效果进行有效监测。尤其对于需要进行化疗的慢性乙肝患者，由于化疗过程中，细胞毒药物和生物应答调节剂均有不同的免疫抑制功能，就为HBV在患者体内的激活提供了条件，而化疗结束后的免疫重建过程又容易造成肝细胞损伤[4]。因此，接受化疗、皮质激素等治疗的慢性乙肝患者是发生HBV复燃的高危人群，需要定期监测体内HBV-DNA的载量，及时调整治疗方案。

本研究中，22例大三阳组（模式1）中，检出HBVDNA阳性20例，阳性率为90.91%，且大部分患者病毒载量很高（＞107U/mL），表明HBeAg（+）患者病毒复制活跃、传染性很高；同时大三阳组检测出2例阴性标本，这可能与HBV基因S区发生点突变或插入、缺失突变有关[5]，应密切随访监测患者HBV-DNA水平。195例小三阳组（模式2）检出HBV-DNA阳性126例，阳性率为64.62%。虽然HBeAb的出现提示病毒复制减少，传染性减弱，但从表2可以看出，4.10%的患者病毒复制仍处在很高水平（＞107U/mL），这与强传染性的大三阳患者HBV-DNA载量相当；15.90%的患者病毒复制处在较高水平（105～107U/mL），说明虽然HBeAg出现阴转，但病毒并未停止复制，这可能与HBV前C区变异导致不能产生HBeAg有关[6-7]，而这样的感染更容易对患者造成伤害，如未进行积极治疗，容易发展成为肝硬化和肝癌[8-10]；并且 44.62%的患者病毒还在持续表达（500～＜105U/mL），这部分患者虽然部分病毒载量不是很高，但也应该积极继续治疗并定期随访HBV-DNA载量，以防病毒复燃造成病毒大量复制。10例HBsAg（+）HBcAb（+）患者血清中HBV-DNA阳性检出率为70.00%，提示该组患者仍具有较强的病毒复制，传染性强，此情况可能为血清转换期，HBeAg消失而HBeAb尚未出现，或HBV前C区突变而逃避了宿主免疫反应[11]。在49例HBsAb（+）血清中，检测出2例HBV-DNA阳性，检出率为4.08%，提示HBsAb产生并不绝对表示病毒的复制停止或减弱。此现象可能与HBsAg血清学转换或HBV中S基因突变有关，出现隐匿性感染或不同亚型的HBV重叠感染[12]。

综上所述，实时荧光定量PCR法灵敏度高、特异性高、结果准确，其结果是病毒复制最直接可信的指标，而血清乙肝血清标志物因为有血清学转换、免疫逃避、隐匿性或不同亚型感染等原因导致检测出的模式不能反映患者当前真实的病毒复制水平，对于判断HBV-DNA感染、传染性及HBV载量有一定的局限性，因此，在检测乙肝血清标志物的同时进行HBV-DNA的实时荧光定量PCR检测，将为患者提供更好的治疗指导和疗效观察，对进行化疗的肿瘤患者是否发生乙肝复燃提供有效的监测。

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10.3969/j.issn.1009-5519.2015.16.028

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1009-5519（2015）16-2483-02

2015-05-07）

罗皓（1987-），男，四川成都人，检验技师，主要从事生物化学和分子生物学检验工作；E-mail：781146221@qq.com。