不同炮制方法对天麻素及天麻苷元含量的影响

毕荣璐，倪兆武，李德勋，仇全雷，刘祥义△

（1.西南林业大学，云南昆明650224；2.昭通市食品药品检验所，云南昭通657000；3.彝良小草坝野生天麻开发有限公司，云南彝良657600）

天麻（Gastrodia elata BL.）属兰科多年生草本植物的地下干燥块茎[1]，主产于陕西、云南、贵州等地，其主要成分为天麻素、天麻苷元等酚类化合物及甾醇、核苷、有机酸、多糖等[2]，其中天麻素和天麻苷元为天麻中主要的药用活性成分[3]。天麻素具有镇静、抗癫痫、镇痛、安眠等作用[4]。天麻苷元与天麻素一样亦具有镇痛效果[5]。目前天麻最佳炮制的方法的考察多基于测定天麻素的含量[6-14]。本试验将新鲜天麻样品切片后称重混匀，分别以直接晒干、煮制、蒸制、烘烤、冷冻干燥等不同处理方法对天麻切片进行处理，用HPLC 测定天麻素和天麻苷元的含量，旨在观察天麻素和天麻苷元的动态平衡或二者之和总量不变的理论数据，同时为天麻的产后加工提供更科学有效的方法。

1 实验设备与材料

1.1 主要设备

LC-2010AHT 高效液相色谱仪，日本岛津公司；XPE-105 电子天平，梅特勒-托利多国际股份有限公司；DZF-6030B 型鼓风干燥箱，上海恒科公司；Biosafer-10B 台式冻干机，赛飞（中国）有限公司；微型植物组织粉碎机，北京中兴伟业仪器公司生产；美的微波炉，佛山市顺德区美的微波电器制造有限公司；HH-S 恒温水浴箱，郑州长城科技公司。

1.2 材料

1.2.1 原料

乌天麻（新鲜）采自云南省昭通市彝良县小草坝海子公社，采样时间2014 年2 月18 日。

1.2.2 试剂

天麻素对照品（批号：ZL20110720A），南京泽朗医药科技有限公司；天麻苷元对照品（批号：ZL131022AN），南京泽朗医药科技有限公司；乙腈（色谱纯），天津市科密欧化学试剂有限公司；水为娃哈哈纯净水，其余试剂均为市售分析纯。

2 实验内容与方法

2.1 色谱条件

按照2010 年版《中国药典》天麻素含量测定方法测定[1]。色谱柱：色谱柱：MD-ODS C18柱（250mm×4.6mm，5μm），流动相：乙腈-0.05%磷酸溶液（3：97），检测波长：220nm，流速：1.0mL/min，柱温：40℃，进样量：20μL.

2.2 溶液制备

2.2.1 对照品溶液的制备

取天麻素对照品0.150 0mg（纯度：98.42%），加流动相定溶于100mL 量瓶中，配制成每mL 含147.63μg（147.63μg/mL）的标准品溶液，即得。

取天麻苷元对照品0.200mg（纯度：98.35%），加流动相定溶于100mL 容量瓶中，配制成每mL 含196.70μg（196.70μg/mL）的标准品溶液，即得。

2.2.2 供试品溶液制备

参照2010 版药典方法对样品进行处理[1]。取各试验组天麻切片样品（60℃真空干燥），粉碎，所有样品过60 目筛，精密称定2.0g，精密加入50%乙醇50mL，称定重量，加热回流3h，放冷再称定重量，用提取溶剂补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液20mL 浓缩至近干，加入20%乙腈水溶液溶解，定溶于50mL 容量瓶中，稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，既得供试品溶液。

2.3 标准曲线的绘制

精密量取对照品天麻素和天麻苷元储备液适量，加乙腈-水（3∶97）溶液制成每1mL 含天麻素118.10，88.58，59.05，29.53，9.84μg 的溶液和每1mL含天麻苷元196.71，98.35，49.18，19.67，9.84μg 的溶液，进样量均为20μL，按含量测定方法测定峰面积，并以峰面积的积分值为纵坐标，对照品进样量为很坐标建立标准曲线，计算回归方程分别为Y天麻素=28 217 324.344 0x+76 239.371 4，r=0.999 7和Y天麻苷元=59 919 005.988 2x+27 037.854 9，r=0.999 8，天麻素在0.196 8μg～2.362 0μg 范围内有良好的线性关系，天麻苷元在0.196 8μg～3.934 2μg范围内有良好的线性关系。

2.4 精密度试验

分 别 取CS天麻素=147.63μg/mL、CS天麻苷元=196.70μg/mL 对照品溶液，每次进样量为20μL，重复进样6 次，RSD 为1.02%和1.47%，精密度良好。

综上所述，对人感染H7N9禽流感病毒患者实施CPT可以改善肺脏气体交换功能，改善机体缺氧状态；俯卧位通气可使患者肺水肿情况得到改善，最终改善ARDS患者的氧合；CPT和俯卧位通气可明显改善患者的肺部通气与换气功能，但对血流动力学未产生不利影响。由于本研究病例数少，胸肺物理治疗以及俯卧位通气对人感染H7N9禽流患者的肺功能的预防改善作用以及远期效果还需进一步临床研究证实。

2.5 稳定性试验

取水蒸7.5min 组供试品溶液室温放置，分别于0，2，4，8，12h 进样20μL，测定天麻素、天麻苷元吸收峰面积，计算RSD 值为1.97%和1.44%，表明供试品溶液在室温下放置12h 稳定。

2.6 重复性试验

分别称取60℃干燥24h 后水蒸7.5min 组天麻样品5 份，每份2.0g 精密称定。按供试品溶液制备方法制备5 份供试品溶液，测定天麻素、天麻苷元吸收峰面积，计算RSD 值为2.17%和1.98%，表明该方法提取测定天麻素天麻苷元可行。

2.7 回收率试验

分别精密称取60℃干燥24h 后水蒸7.5min 组天麻样品6 份，每份2.0g 精密称定，一份加入50mL 50%乙醇作为对照组，其余5 份各精密加入50%乙醇40mL 并加入10mL 已知浓度的88.58μg/mL 的天麻素对照品溶液和98.35μg/mL 天麻苷元对照品溶液，按供试品溶液制备方法制备供试品溶液，测定天麻素和天麻苷元含量，计算回收率为97.07%和94.13%，RSD 值为1.72%和1.88%.

2.8 天麻炮制方法

取同一穴天麻大小相近的新鲜天麻分别切片，均匀分成16 份。

2.8.1 自然晒干

取1 份新鲜天麻切片直接在阳光下晒2d，自然风干，待用。

取3 份新鲜天麻切片分别放入沸水中煮2.5，5.0，7.5min，再于60℃烘箱热风干燥，待用。

2.8.3 水蒸

取3 份新鲜天麻切片分别在蒸锅上蒸制5.0，7.5，10.0min，再于60℃烘箱热风干燥，待用。

2.8.4 微波炮制

取3 份新鲜天麻切片分别放于800W 功率下的微波炉里加热30，60，90s，再于60℃烘箱热风干燥，待用。

2.8.5 热风干燥

取3 份新鲜天麻切片放于鼓风干燥箱里分别于110，115，120℃加热10min 后，再于60℃烘箱热风干燥，待处理。

取2 份新鲜天麻切片分别放于60℃鼓风干燥箱里烘干和60℃真空干燥箱里烘干，待用。

2.8.6 真空冷冻干燥

取1 份新鲜天麻切片，4℃预冻2h 后放入冷冻干燥机中48h，然后真空抽干，成粉末，待用。

3 结果与讨论

3.1 结果

不同炮制方法天麻的外观形态比较和天麻素、天麻苷元含量的测定结果见表1 以及图1-3。

图2 天麻苷元对照品色谱图

图3 天麻样品色谱图（微波30s）

表1 不同炮制方法天麻的外观形态比较和天麻素、天麻苷元含量的测定结果

从表1 可以看出，用微波处理天麻切片30s 后，天麻中天麻素的含量最高，为1.71%；120℃热风干燥10min 组天麻素含量最低。真空冷冻干燥处理后的天麻，天麻苷元含量最高，为2.50%.综合天麻素和天麻苷元2 个指标（以天麻素为主）以及处理后天麻的外观形态，微波处理30s 这种炮制方法为最佳，不经任何处理直接晒干的天麻炮制方式最次。考虑到生产中的实际条件，水蒸5min 可为生产提供参考依据。

3.2 讨论

从结果可以看出，在水蒸3 种处理方式中，天麻素和天麻苷元基本处于平衡状态，随着时间的增加，天麻素含量逐渐降低，天麻苷元含量逐渐升高，且天麻素与天麻苷元含量之和差异不大。在这一点上微波处理60s 和微波处理90s，热风110℃处理10min 和热风115℃处理10min，包括水煮2.5min 和水煮5min 这3 组数据都有所体现。但是120℃热风干燥10min 处理以及水煮7.5min 以后，天麻素和天麻苷元的含量都明显降低，这说明天麻素和天麻苷元含量处于平衡状态是基于同一种炮制方式一定时间段。水煮7.5min 组天麻样品中天麻素和天麻苷元含量较2.5min 和5min 组样品中天麻素天麻苷元含量下降明显，可能是由于水煮时间过长，其天麻有效成分被煮出而造成损失。

炮制是我国传统中医药体系的重要组成部分，不规范的炮制方法将导致中药饮片质量的不稳定，严重影响中药治疗的效果[9]。本实验研究结果表明，炮制方法对于天麻素和天麻苷元的含量有重要的影响。天麻中天麻素含量不稳定，同一地点采样地点同一种炮制方法不同天麻个体测出的天麻素含量都不一样，尤其以不同炮制方法对天麻素含量影响较大。本试验为了避免前者对天麻素及其天麻苷元含量的影响，采样时只取了同一地点，大小相近天麻切片均分为16 组，保证了每组天麻成分是一致的，这样在探讨不同炮制方法对天麻素及其天麻苷元含量的影响时结果就具有了较高的可信度。

[1] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典（一部）[M]. 北京：中国医药科技出版社，2010：54.

[2] 王莉. 天麻化学物质基础及质量控制方法研究[D]. 大连：中国科学院大连化学物理研究所，2007.

[3] 王俏. 天麻素和天麻苷元的体内外代谢和脑靶向性研究[D]. 杭州：浙江大学药学院，2007.

[4] 岑信钊. 天麻的化学成分与药理作用研究进展[J]. 中药材，2005，28（10）：958-962.

[5] 张怡评，林丽聪，吴春敏，等. 天麻素与天麻苷元的镇痛作用研究[J]. 福建中医学院学报，2006，16（6）：30-31.

[6] 秦俊哲，张洁，周涵，等. 不同炮制方法对天麻素含量的影响[J]. 中药材，2006，29（12）：1285-1288.

[7] 宋嬿，朱俊杰，罗书，等. 常压蒸制法炮制天麻的工艺研究[J]. 中成药，2008，30（7）：1016-1018.

[8] 樊启猛，陈朝银，林玉萍，等. 天麻的炮制研究与规范[J].中成药，2013，35（8）：1737-1741.

[9] 刘毅，张丽艳，谢宇，等. 天麻最佳炮制工艺的综合评分法研究[J]. 时珍国医国药，2009，20（2）：378-379.

[10] 王玫瑰，张先洲. 天麻蒸制工艺的优化研究[J]. 中国药师，2012，15（1）：70-72.

[11] 郑秀艳，邓青芳，陈华国，等. 天麻中天麻素的提取工艺优化[J]. 贵州农业科学，2013（12）：163-166.

[12] 仲瑞雪，钟恋，万军，等. 天麻饮片分级的研究[J]. 中成药，2014，36（1）：135-140.

[13] 田野，李秀芳，杨莲，等. HPLC 法对三产地天麻中天麻素的含量测定[J]. 云南中医学院学报，2008，31（3）：6-8.

[14] 刘红，陈燕芹，罗树常，等. 反相高效液相色谱法同时测定天麻中天麻素和3 种核苷[J]. 中国实验方剂学杂志，2014，20（17）：81-83.