复方麝香注射液内毒素的方法研究

陈　君

（湖北省襄阳市食品药品检验所，湖北 襄阳 441021）

复方麝香注射液内毒素的方法研究

陈君

（湖北省襄阳市食品药品检验所，湖北 襄阳 441021）

目的 建立复方麝香注射液细菌内毒素检查法。方法 按中国药典2010年版二部附录细菌内毒素检查法进行试验。结果 该注射液经过30倍稀释后，对鲎试剂测定细菌内毒素无干扰。结论 复方麝香注射液可以采用细菌内毒素检查法（凝胶法）进行细菌内毒素的限量检查。

复方麝香注射液；细菌内毒素检查；干扰试验

复方麝香注射液是由6味中草药制成，有豁痰开窍，醒脑安神的功效，临床上用于痰热内闭所致的脑卒中昏迷。目前该药仍沿用家兔法检测热原，家兔法操作繁琐、费时、成本高、灵敏度低，很多人都在研究该药的内毒素方法，我们根据2010年版药典二部附录细菌内毒素检查法和热原家兔法的要求［1］，对该药检测进行了研究对比，结果表明，该药是可以用细菌内毒素检查法代替家兔法检测热原的。

1　仪器与材料

1.1仪器：旋涡式混悬器（天津药典标准仪器厂，ZH-2型）；电热恒温水浴箱（江苏金坛市中大仪器厂，420型）；无热源移液器（上海求精生化试剂仪器有限公司）。

1.2材料：鲎试剂2批（湛江安度斯生物有限公司，灵敏度0.5 EU，批号1301241，批号1211241），细菌内毒素检测用水（湛江安度斯生物有限公司，规格2.0，批号1404030，规格5.0，批号1404240），细菌内毒素工作标准品（湛江安度斯生物有限公司，规格10 EU/支，批号1301050）。热源用家兔，经预测全部合格，复方麝香注射液（安徽金太阳生化药业有限公司，批号131201。）

2　方法与结果

2.1内毒素限值的确定：药品细菌内毒素限值（L）一般按以下公式确定：L=K/M，注射剂K=5EU/（kg•h），复方麝香注射液的用法用量中一次最大注射量为20mL，人均体质量按60 kg计算，L=15.15 EU/mL，以此计算出复方麝香注射液内毒素的限值应为15 EU/mL。

这里我们要提一下，以前有很多人在确立M的时候，带入了家兔法的注射剂量，这个应该是不对的，2010年版药典明确规定了M为人用每千克体质量每小时的最大供试品剂量，且指出人均体质量按60 kg计算，注射时间不足1 h按1 h计算。复方麝香注射液说明书上的用法用量，静脉滴注，一次10～20mL，人均体质量按60 kg计算的话，M=0.33mL/（kg•h），而该药现行标准中规定热原检查法剂量按家兔体质量每1 kg注射0.5mL，很多人直接将这里的0.5mL当做M带入计算，会导致计算出的细菌内毒素限值相差1.5倍。

2.2确定最大有效稀释倍数：L能准确确定后，MVD就很好计算了，我们此次试验用哦鲎试剂的标示灵敏度为0.25 EU/mL，计算出MVD=cl/λ=30。

2.3鲎试剂灵敏度复核试验：2010年版药典规定，当使用了新批号的鲎试剂或实验条件发生了任何可能影响检验结果的改变时，应进行鲎试剂灵敏度复核试验。将120 EU/支的细菌内毒素国家标准品用细菌内毒素检测用水溶解后，依法制成2、1、0.5、0.25 λ 4个浓度的内毒素标准溶液，经复核，本次试验所用的0.5 EU/mL的鲎试剂标示灵敏度为0.5 EU/mL。

2.4干扰试验

2.4.1预实验：将供试品溶液按梯度稀释至不超过最大有效稀释倍数的溶液，按鲎试剂灵敏度复核试验项下操作［1］，每个浓度平行做4支管。2批鲎试剂结果一致。见表1。

表1　凝胶法预试验

从表1可知，复方麝香注射液对鲎试剂有干扰，稀释30倍以上可去除干扰。

2.4.2干扰试验［2］：按照中国药典2010年版二部附录XIE细菌内毒素检查法项下干扰试验表1制备溶液A、B、C、D，按鲎试剂灵敏度复核试验项下操作。其中供试品溶液为稀释30倍的溶液。结果见表2。

表2　凝胶法干扰试验

当复方麝香注射液稀释30倍时，干扰试验通过。

2.5供试品用细菌内毒素检查法与家兔法检测结果比较：供试品稀释30倍，参照2010年版药典二部附录XIE细菌内毒素检查法，用0.5 EU/支的鲎试剂检验，结果为阴性。按照2010年版药典二部附录XID家兔法检测，结果也为阴性，两种方法结果完全一致。

3　讨 论

复方麝香注射液为中成药制剂，为临床常用药品，但是目前仍采用家兔法检测热原，费时费力，成本高。本次试验，采用供试品30倍稀释液，0.5 EU/mL的鲎试剂对样品进行细菌内毒素检测，结果与家兔法一致且无干扰。经论证，复方麝香注射液可以用细菌内毒素检查法代替家兔热原检查法。

［1］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典二部［M］.北京：中国医药科技出版社，2010：附录71-73.

［2］ 黄清泉，夏镇明.药品细菌内毒素检查的试验设计［J］.中国药学杂志，1997，32（2）：72.

R284.1

B

1671-8194（2015）10-0068-01