五加糖肽对雏鸡大肠杆菌和新城疫的治疗试验

马海营 （山东农业大学 山东 泰安 271018） 张卫红 （深圳职业技术学院 广东 深圳）

五加糖肽对雏鸡大肠杆菌和新城疫的治疗试验

马海营 （山东农业大学 山东 泰安 271018） 张卫红 （深圳职业技术学院 广东 深圳）

为研究五加糖肽对鸡免疫增效作用及抗感染功效。选择100羽10日龄的雏鸡随机分成5组。2个试验组分别攻毒大肠杆菌和鸡新城疫病毒，然后用五加糖肽饮水，另外设2个感染对照组和1个空白对照组。检测鸡的增重率、保护率、死亡率，试验表明，五加糖肽有较好的免疫增效及抗细菌和病毒感染作用。

五加糖肽 鸡 大肠杆菌 新城疫病毒 免疫增强

五加糖肽是深海红藻中活性成分半乳糖肽类衍生物，由于其独特的结构，具有多种生物学活性，近年来，对其生物的活性研究表明，在抗氧化、抗肿瘤、抗凝血、抗病毒感染以及免疫调节[1,2]等方面具有重要活性。禽大肠杆菌病和新城疫会给养禽业带来巨大危害，使用常规的抗菌和抗病毒药物达不到预期效果，目前大多数抗病毒药物及抗生素已被明令禁止用于禽类，防治疾病发生的最有效方法是提高机体免疫力。

五加糖肽是一种增强动物机体免疫力的药物。且对大多数病毒具有明显的抑制作用，并能增强抗生素药物的抗菌作用。本试验拟选择该药物对人工感染大肠杆菌或新城疫病毒的雏鸡进行防治疗效试验，检测统计鸡的增重率、保护率、死亡率，以判定五加糖肽对鸡的免疫增效及抗病原感染作用。

1 材料与方法

1.1 试验药物 五加糖肽由鹤壁泰德生化科技有限公司提供。

1.2 病原 大肠杆菌由山东农业大学动物医学院实验室提供，新城疫病毒由哈尔滨兽医研究所惠赠，SPF 鸡胚购自济南家禽所，海兰白雏鸡购自泰安市种鸡场。

1.3 方法 （1）病原制备：将保存的大肠杆菌菌种接种于鲜血琼脂平板，37℃培养18h，挑取有典型β-溶血菌落接种于肉汤培养基，37℃培养14h，用比浊法测定菌液浓度，复壮后每毫升含菌量达10亿。取新城疫病毒液接种9日龄SPF鸡胚，0.1ml/枚，37℃培养，收集24～72h死亡鸡胚的尿囊液，并测定其效价为106.0EID50/0.1ml。（2）试验药物的用法和用量：每日按每g加水25～30kg，连用4d，1次/d。（3）试验动物及分组：100只10日龄临床建健康海兰白雏鸡随机分成5组，公母兼有，每组20只，均在相同的温度、湿度、光照等条件下严格隔离饲养。大肠杆菌病感染雏鸡颈部皮下注射接种鸡大肠杆菌菌液0.2ml(10亿/ml)，新城疫病毒尿囊液0.2ml(106.0EID50/0.1ml)颈部皮下注射9日龄雏鸡。 试验分组及处理见表1。（4）观察指标：测定试验前和试验末鸡的体重，计算增重率。感染后每天观察并记录各试验组鸡精神、采食、饮水、粪便、呼吸症状、死亡数、对死亡鸡进行病理剖检和细菌分离。试验期为10d，结束时，计算每组的死亡率和保护率，检测2组、4组和5组所剩鸡只血清中新城疫抗体水平。

表1 试验组分组方法

2 结果

2.1 感染鸡症状观察 （1）大肠杆菌感染组，死亡前雏鸡主要表现出精神沉郁，食欲下降，羽毛松乱，两翅下垂，缩颈，闭眼昏睡，排灰白色或土黄色稀粪，有的发出尖叫声，严重者卧地不起直至死亡。死后剖检病变主要表现肝充血肿胀、易碎，肝包膜、心包膜、气囊有大量纤维性渗出物，形成一层灰白色纤维素性膜。脾肿大，有小出血点；肝脏穿刺能分离培养出典型大肠杆菌。（2）新城疫感染组，病鸡精神萎靡，饮食欲下降或废绝；羽毛松乱，翅下垂，缩颈，精神沉郁；鸡冠发紫，口流黏液，呼噜甩鼻；呼吸困难，张口呼吸；排绿色稀粪。剖检见口腔有黏液，气管黏膜环状出血；腺胃黏膜附有大量粘液，腺胃黏膜乳头出血，肌胃角质膜易剥离，黏膜有出血斑点；消化道黏膜有出血性卡他性炎症，肠道黏膜淋巴滤泡处肿胀。有的病鸡气管充血、出血，有黏液，个别病鸡支气管内有栓塞；肺脏呈暗红色淤血。

2.2 药物对感染鸡增重及保护率的影响 大肠杆菌和新城疫治疗组增重率分别为32.72%、34.4%，低于空白对照组平均增重率，但是明显高于感染对照组，结果见表2。对大肠杆菌和新城疫的保护率分别为75%和65%，显著高于感染对照组10%，但是仍然低于空白对照组100%。结果见表3。

表2 药物对大肠杆菌和新城疫感染鸡的增重影响 (g、%)

表3 药物对鸡感染大肠杆菌、新城疫的保护率 (羽、%)

2.2 药物对新城疫抗体水平的影响 从表4和图1中可以看出雏鸡感染新城疫病毒10d后，新城疫抗体水平显著升高，不进行新城疫攻毒的试验组(5组)母源抗体20日龄时基本消失，新城疫治疗组(2组)血清中新城疫特异性抗体效价平均值(7.54)明显高于新城疫感染对照组(4组)的平均值(5.5)，且存活的13只鸡机体内抗体效价大都在7以上，有的甚至高于9，不用药的一组(4组)血清中新城疫抗体虽然也明显升高，但是效价为5和6，明显低于感染用药组。

表4 药物对新城疫抗体水平的影响 (羽、log2)

附图 新城疫抗体水平分布图

3 讨论

试验结果表明五加糖肽有很强的抗菌、抗病毒活性，明显提高雏鸡的体液免疫反应。因此提示该药物可在平时鸡病防疫中搭配使用，以提高机体的免疫力，抑制细菌、病毒感染；在疫苗免疫时使用，能提高机体的免疫反应，减少免疫应激反应。此外，五加糖肽的免疫调节作用及增强机体免疫力机制可能与其含有卡拉胶成分有密切关系。Nicklin等[3]认为卡拉胶可通过对巨噬细胞的释放炎症因子功能进行调节，魏元臣等[4]报道卡拉胶降解物能显著促进巨噬细胞增殖，并能增强巨噬细胞的吞噬能力和释放NO的能力，从而增强其免疫功能。但是卡拉胶尚有免疫抑制作用，Thomson等[2]认为卡拉胶可以通过削弱T细胞依赖性抗原的体液免疫和补体系统的激活，抑制细胞免疫，发挥免疫抑制作用；Cochran等[5]发现口服卡拉胶可以显著抑制T细胞的增殖；Vijayakumar等[6]研究发现卡拉胶多次注射对BALB/C小鼠具有免疫抑制作用。但是这种作用与抗感染作用的关系还有待进一步研究。结论，五加糖肽具有良好的免疫增效作用和抗感染功效。

[1] Richou R, Lallouette P, Legger H. Carrageenan, adjuvating and immunity stimulating substance[J]. Comptes Rendus Hebdomadaires Des Séances de L'Académie Des Sciences, 1968,267(2): 257-259.

[2] Thomson A W, Fowler E F. Carrageenan: a review of its effects on the immune system [J]. Agents and Actions, 1981, 11(3): 265-273.

[3] Nicklin S, Baker K, Miller K. Carrageenan Induced Changes in the Immunomodulatory Capacity of Macrophages: An in Vitro Study[J]. Advances in Experimental Medicine and Biology, 1988, 237: 821-832.

[4] 魏元臣, 周革非, 李树福等. 峰胶降解组分的体外免疫活性[J]. 食品科学, 2009, 30(11): 232-236.

[5] Cochran F R, Baxter C S. Macrophage-mediated suppression of T lymphocyte proligeration induced by oral carrageenan administration [J]. Immunology, 1984, 53: 291-297.

[6] Vijayakumar R K, Muthukkaruppan V R. Immunoregulatory processes induced by carrageenan in BALB/C mice [J]. Immunological Investigations, 1990, 19: 163-183.

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